Desarrollo de modelos de provocación nasal humana con componentes microbianos y polen de hierba

DISEÑO Y METODOLOGÍA DEL ESTUDIO

El estudio consta de 3 partes con diferentes desafíos de aerosol nasal que se administran a los sujetos:

1. Componentes bacterianos o virales, que comprenden uno de los siguientes en un paciente particular;

   1. MPLA (monofosforil lípido A) se parece al lipopolisacárido bacteriano
   2. PolyIC (ácidos poliinosínico y citidílico): componente viral
   3. PolyICLC (poliIC estabilizado con polilisina): componente viral
   4. Resiquimod: imitador viral
2. Tuberculina: derivado proteico parcialmente purificado (PPD) de Mycobacterium bovis, la bacteria que causa la TB.
3. Alérgeno: el agente de desafío del aerosol nasal es el polen de hierba Timothy.

RECLUTAMIENTO

El objetivo es reclutar un total de 174 sujetos. Los sujetos se identificarán a través de anuncios en los periódicos, carteles en el campus, servicios de médicos de cabecera, clínicas para pacientes ambulatorios en el hospital St. Mary's, incluidas las clínicas de TB en el Hospital St. Mary's. Obtendremos un consentimiento plenamente informado. Todos los datos se administrarán de acuerdo con GCP y las pautas locales de gobierno de la información.

NÚMERO DE SUJETOS Y DOSIFICACIÓN

PARTE 1: desafío de dosis ascendente nasal con componentes microbianos utilizando MPLA, polyIC, polyICLC y resiquimod. Se divide en parte A y parte B.

PARTE 1A (n=32): Estudio de Dosis Incremental Ascendente basado en Tolerabilidad y SAM. 4 cohortes de 8 voluntarios sanos (4 de 8 con alergias al polen de gramíneas, ácaros del polvo doméstico o antecedentes de fiebre del heno). Una cohorte para cada constituyente microbiano. A cada cohorte se le administrará un desafío de control de solución salina nasal y tres dosis ascendentes del desafío constituyente microbiano nasal:

• 10 μg de constituyente microbiano en 100 μl de solución salina
• 100 μg de constituyente microbiano en 100 μl de solución salina
• 500 μg de constituyente microbiano en 100 μl de solución salina

PARTE 1B (n=64): Dosis superior única con sonda de muestreo especial adicional (SSP) y curetaje, cohorte única de hasta 16 voluntarios sanos (8 de 16 alergias al polen de gramíneas, ácaros del polvo doméstico, antecedentes de fiebre del heno). A cada sujeto se le administró un control de solución salina y una dosis superior única después de establecer la tolerabilidad y la respuesta SAM.

RESIQUIMOD:

En la Parte B, se administrarán 10 μg por fosa nasal a 36 voluntarios:

12 asmáticos alérgicos 12 voluntarios atópicos 12 voluntarios no atópicos

PARTE 2: Provocación de dosis ascendente nasal con tuberculina. Se divide en parte A y parte B.

PARTE 2A (n=16): Comprende un total de 16 sujetos con TB latente (LTB). Este grupo se subdivide en 4 cohortes de 4 sujetos según la dosis de tuberculina que se administre;

• 0,1 TU en 100 μl, n = 4
• 1,0 TU en 100 μl, n = 4
• 2,0 TU en 100 μl, n = 4
• 5,0 TU en 100 μl, n = 4 Cada cohorte tiene solo 1 desafío. La dosis inicial es muy baja a 0,1 TU. Si se tolera bien, el sujeto pasará a la siguiente dosis más alta de 1,0 TU. Si esto también se tolera bien, el sujeto pasará a la siguiente dosis más alta de 2,0 TU y luego a la dosis más alta de 5,0 TU en este grupo, lo que garantiza la seguridad de los sujetos en todo momento.

PARTE 2B (N=16): Dosis superior con muestreo adicional. Este se compone de 16 personas en dos grupos (8 voluntarios sanos y 8 sujetos con TB latente).

Grupo 1: Sujeto con TB latente, no. de personas = 8 Este grupo recibirá la dosis máxima (5-10,0 TU) del desafío de la tuberculina. De los 8 sujetos en cada grupo, 2 recibirán placebo (spray simulado de solución salina) y los 6 restantes recibirán el reto del spray de tuberculina.

Grupo 2: Voluntarios sanos, núm. de personas = 8 Este grupo también recibirá la dosis máxima (5-10,0 TU) de la provocación con tuberculina, sujeto a tolerabilidad. De los 8 sujetos, 2 recibirán el placebo (spray simulado de solución salina) y los 6 restantes recibirán el reto del spray de tuberculina.

PARTE 3 (n=46): Desafío nasal de alérgenos con polen de hierba timotea

Inicialmente, se estudiarán 30 personas: un grupo de 12 personas tiene fiebre del heno, un grupo de 12 personas tiene asma con alergia al polen de gramíneas y un grupo de 6 personas no son alérgicas y no tienen asma. En un grupo adicional, se estudiarán 16 personas con fiebre del heno mediante la toma de muestras continuas del fluido del revestimiento nasal superficial utilizando una sonda de muestreo especial (SSP) después de la provocación con aerosol nasal.

1. Grupo 1: personas con fiebre del heno, n = 12
2. Grupo 2: personas con asma alérgica, n = 12
3. Grupo 3: personas sanas, no atópicas, n = 6
4. Grupo adicional 4: personas con fiebre del heno, n=16

PROCEDIMIENTOS NASALES EN EL ESTUDIO

1. Lavado nasal (lavado nasal): Al comienzo del día, se realizarán lavados nasales en la nariz pasando un pequeño volumen de líquido de agua salada (solución salina) en la nariz. Este procedimiento se realiza antes de otros procedimientos para limpiar la nariz. El líquido obtenido de los lavados nasales se desecha y no se analiza.
2. Absorción de líquido del revestimiento nasal (nasosorción o SAM): se utilizará una pequeña tira de material absorbente, que se ve y se siente como un pañuelo de papel suave, para absorber la humedad de la superficie interior de la fosa nasal. El papel absorbente especial se colocará dentro de la fosa nasal y se dejará durante un período de 2 minutos para que absorba el líquido del revestimiento nasal antes de retirarlo, succionando suavemente el líquido como si fuera papel secante. Poner el papel en la nariz puede hacerle cosquillas y hacer que sus ojos lagrimeen un poco. Sin embargo, la nasosorción no duele y nuestro método ha demostrado ser bien tolerado en bebés, niños y adultos. El papel absorbe el fluido nasal y muchas sustancias producidas por las células nasales pueden extraerse del papel y medirse en el laboratorio.
3. Raspado nasal (legrado nasal o rinosonda): se insertará una pequeña sonda plástica desechable estéril en la nariz y se presionará suavemente contra el revestimiento de la superficie interior de la fosa nasal. La sonda de 3 pulgadas de largo tiene una pequeña pala en el extremo, que apenas se puede ver. Se tomarán 24 pequeñas muestras de cada fosa nasal (una cabeza de alfiler, 2 mm de tejido) de una parte de la nariz que tiene un suministro nervioso reducido para limitar cualquier molestia. Tomar esta muestra no causa sangrado, pero puede causar algunas molestias leves y puede hacer que los ojos lagrimeen un poco. La sonda recolectará células nasales de la superficie de la fosa nasal que luego se enviarán para su análisis. Este método se ha realizado en muchos adultos, niños y bebés, y ha sido muy bien tolerado.
4. Sonda de muestreo especial (SSP): el líquido del revestimiento de la superficie nasal también se puede recolectar usando una sonda de muestreo especial o SSP que utiliza un electrospray para hacer rebotar las gotas en el líquido del revestimiento nasal. Esto se hará tomando muestras continuamente durante algunas horas de una sola fosa nasal. Cuando se utiliza esta sonda de muestreo especial (SSP) en la nariz de las personas, se siente una ligera sensación de cosquilleo mientras se toma la muestra. Esto apenas se puede notar.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO

La distribución de los datos se evaluará mediante la prueba de ShapiroWilks, que determina si los datos tienen una distribución normal (paramétrica) o no normal (no paramétrica).

Los datos normales se mostrarán gráficamente como:

• Medias aritméticas y error estándar de las medias (SEM)
• o significa con SDs
• o medias con intervalos de confianza (IC)

Los datos no normales se mostrarán gráficamente como:

Caja-bigotes: mediana, cuartiles, rango

Para los datos no normales, se medirán las diferencias desde el inicio para el agente de desafío activo (en diferentes dosis) y el placebo en cada punto de tiempo, y se calculará el AUC. Se calculan las diferencias en el AUC del placebo (placebo activo), y se prueba la significación con la prueba de rango con signo de Wilcoxon no paramétrica (población única). El área bajo la curva (AUC) se demandará en diferentes tiempos definidos según el agente de provocación nasal.