Opracowanie modeli prowokacji nosa człowieka ze składnikami mikrobiologicznymi i pyłkiem trawy

PROJEKT BADANIA I METODOLOGIA

Badanie składa się z 3 części, w których pacjentom podaje się różne prowokacje w postaci aerozolu do nosa:

1. Komponenty bakteryjne lub wirusowe, obejmujące jeden z następujących u konkretnego pacjenta;

   1. MPLA (monofosforylolipid A) przypomina bakteryjny lipopolisacharyd
   2. PoliIC (kwasy poliinozynowy i cytydylowy): składnik wirusowy
   3. PoliICLC (poliIC stabilizowany poliLlizyną): składnik wirusowy
   4. Rezykwimod: naśladujący wirusy
2. Tuberkulina: częściowo oczyszczona pochodna białka (PPD) z Mycobacterium bovis, bakterii wywołującej gruźlicę.
3. Alergen: Czynnikiem prowokacyjnym w aerozolu do nosa jest pyłek trawy tymotki.

REKRUTACJA

Celem jest rekrutacja łącznie 174 osób. Osoby badane będą identyfikowane poprzez ogłoszenia w gazetach, plakaty na kampusie, usługi lekarza pierwszego kontaktu, przychodnie w szpitalu St. Mary's, w tym kliniki gruźlicy w szpitalu St. Mary's. Uzyskamy w pełni świadomą zgodę. Wszystkie dane będą zarządzane zgodnie z GCP i lokalnymi wytycznymi dotyczącymi zarządzania informacjami.

LICZBA PODMIOTÓW I DAWKOWANIE

CZĘŚĆ 1: Donosowa prowokacja rosnącą dawką ze składnikami drobnoustrojów przy użyciu MPLA, poliIC, poliICLC i resikwimodu. Jest to podzielone na część A i część B.

CZĘŚĆ 1A (n=32): Badanie przyrostowej dawki rosnącej w oparciu o tolerancję i SAM. 4 kohorty po 8 zdrowych ochotników (4 z 8 z alergią na pyłki traw, roztocza kurzu domowego lub katar sienny). Jedna kohorta dla każdego składnika mikrobiologicznego. Każda kohorta otrzyma kontrolną prowokację donosową solą fizjologiczną i trzy rosnące dawki nosowej prowokacji składnika drobnoustrojów:

• 10 μg składnika mikrobiologicznego w 100 μl soli fizjologicznej
• 100 μg składnika mikrobiologicznego w 100 μl soli fizjologicznej
• 500 μg składnika mikrobiologicznego w 100 μl soli fizjologicznej

CZĘŚĆ 1B (n=64): Pojedyncza górna dawka z dodatkową specjalną sondą do pobierania próbek (SSP) i łyżeczkowaniem, pojedyncza kohorta do 16 zdrowych ochotników (8 z 16 alergii na pyłki traw, roztocza kurzu domowego, katar sienny w wywiadzie). Każdy osobnik otrzymał kontrolę soli fizjologicznej i pojedynczą najwyższą dawkę po ustaleniu tolerancji i odpowiedzi SAM.

RESIQUIMOD:

W części B 10 μg na nozdrze zostanie podane 36 ochotnikom:

12 alergicznych astmatyków, 12 ochotników z atopią, 12 ochotników bez atopii

CZĘŚĆ 2: Prowokacja donosowa z rosnącą dawką tuberkuliny. Jest to podzielone na część A i część B.

CZĘŚĆ 2A (n=16): Obejmuje to w sumie 16 osobników z utajoną gruźlicą (LTB). Grupę tę podzielono na 4 kohorty po 4 osobników w zależności od dawki podawanej tuberkuliny;

• 0,1 TU w 100 μl, n = 4
• 1,0 TU w 100 μl, n = 4
• 2,0 TU w 100 μl, n = 4
• 5,0 TU w 100 μl, n = 4 Każda kohorta ma tylko 1 wyzwanie. Dawka początkowa jest bardzo niska i wynosi 0,1 TU. Jeśli jest dobrze tolerowany, pacjent przejdzie do następnej wyższej dawki 1,0 TU. Jeśli to również będzie dobrze tolerowane, pacjent przejdzie do kolejnej wyższej dawki 2,0 TU, a następnie do najwyższej dawki 5,0 TU w tej grupie, zapewniającej bezpieczeństwo pacjentom przez cały czas.

CZĘŚĆ 2B (N=16): Najwyższa dawka z dodatkowym pobieraniem próbek. Obejmuje to 16 osób w dwóch grupach (8 zdrowych ochotników i 8 osób z utajoną gruźlicą).

Grupa 1: Osoba z utajoną gruźlicą, nie. osób = 8 Ta grupa otrzyma najwyższą dawkę (5-10,0 TU) prowokacji tuberkulinowej. Spośród 8 badanych w każdej grupie, 2 otrzyma placebo (sól fizjologiczna w aerozolu), a pozostałych 6 zostanie poddanych prowokacji w spreju tuberkulinowym.

Grupa 2: Zdrowi ochotnicy, nie. osób = 8 Ta grupa również otrzyma najwyższą dawkę (5-10,0 TU) prowokacji tuberkulinowej, w zależności od tolerancji. Spośród 8 badanych 2 otrzyma placebo (sól fizjologiczna w aerozolu), a pozostałych 6 otrzyma wyzwanie w postaci sprayu tuberkulinowego

CZĘŚĆ 3 (n=46): Prowokacja nosowa alergenem z pyłkiem tymotki zwyczajnej

Wstępnie przebadanych zostanie 30 osób: jedna grupa 12 osób ma katar sienny, jedna grupa 12 osób ma astmę z alergią na pyłki traw, a grupa 6 osób jest niealergiczna i nie ma astmy. W dodatkowej grupie 16 osób z katarem siennym zostanie zbadanych poprzez ciągłe pobieranie próbek płynu z powierzchniowej wyściółki nosa za pomocą specjalnej sondy do pobierania próbek (SSP) po prowokacji aerozolem do nosa.

1. Grupa 1: osoby z katarem siennym, n = 12
2. Grupa 2: osoby z astmą alergiczną, n = 12
3. Grupa 3: osoby zdrowe, nieatopowe, n = 6
4. Dodatkowa grupa 4: osoby z katarem siennym, n=16

PROCEDURY NOSOWE W BADANIE

1. Płukanie nosa (płukanie nosa): Na początku dnia płukanie nosa zostanie przeprowadzone poprzez wprowadzenie do nosa niewielkiej ilości płynu zawierającego słoną wodę (sól fizjologiczną). Ta procedura jest przeprowadzana przed innymi procedurami oczyszczania nosa. Płyn uzyskany z popłuczyn z nosa odrzuca się i nie analizuje.
2. Wchłanianie płynu przez wyściółkę nosa (nasosorpcja lub SAM): Mały pasek materiału chłonnego, który wygląda i czuje się jak miękka bibułka, zostanie użyty do wchłonięcia wilgoci z wewnętrznej powierzchni nozdrza. Specjalny papier chłonny zostanie umieszczony w nozdrzu i pozostawiony na okres 2 minut, aby wchłonął płyn z wyściółki nosa przed usunięciem, delikatnie zasysając płyn jak bibuła. Wkładanie papieru do nosa może łaskotać i powodować lekkie łzawienie oczu. Jednak nosorpcja nie boli, a nasza metoda okazała się dobrze tolerowana przez niemowlęta, dzieci i dorosłych. Papier absorbuje płyn nosowy, a wiele substancji wytwarzanych przez komórki nosowe można następnie wyekstrahować z bibuły i zmierzyć w laboratorium.
3. Zeskrobanie nosa (kiretaż nosa lub Rhinoprobe): Mała sterylna plastikowa sonda jednorazowego użytku zostanie włożona do nosa i delikatnie dociśnięta do wewnętrznej powierzchni wyściółki nozdrza. Sonda o długości 3 cali ma na końcu małą miarkę, którą ledwo widać. Z każdego nozdrza zostaną pobrane 24 małe próbki (piłka od szpilki, 2 mm tkanki) z części nosa, która ma zmniejszone ukrwienie nerwów, aby ograniczyć dyskomfort. Pobranie tej próbki nie powoduje krwawienia, ale może powodować lekki dyskomfort i lekkie łzawienie oczu. Sonda pobierze komórki nosowe z powierzchni nozdrza, które następnie zostaną przesłane do analizy. Ta metoda została zastosowana u wielu dorosłych, dzieci i niemowląt i była bardzo dobrze tolerowana.
4. Specjalna sonda do pobierania próbek (SSP): Płyn wyściełający powierzchnię nosa można również pobrać za pomocą specjalnej sondy do pobierania próbek lub SSP, która wykorzystuje elektrorozpylanie do odbijania kropelek od płynu wyściełającego nos. Odbywa się to poprzez ciągłe pobieranie próbek przez kilka godzin z jednego nozdrza. Podczas stosowania tej specjalnej sondy do pobierania próbek (SSP) w nosie ludzi, podczas pobierania próbki występuje lekkie uczucie łaskotania. Ledwo można to zauważyć.

ANALIZA STATYSTYCZNA

Rozkład danych zostanie oceniony za pomocą testu ShapiroWilks, który określa, czy dane mają rozkład normalny (parametryczny), czy nienormalny (nieparametryczny).

Normalne dane będą wyświetlane graficznie jako:

• średnie arytmetyczne i błąd standardowy średnich (SEM)
• lub oznacza z SD
• lub średnie z przedziałami ufności (CI)

Nienormalne dane będą wyświetlane graficznie jako:

Wąsy pudełkowe: mediana, kwartyle, rozstęp

W przypadku danych innych niż normalne, różnice w stosunku do linii podstawowej będą mierzone dla aktywnego środka prowokującego (w różnych dawkach) i placebo w każdym punkcie czasowym i obliczane AUC. Oblicza się różnice w AUC z placebo (aktywne placebo) i testuje istotność nieparametrycznym testem rangowym Wilcoxona (pojedyncza populacja). Powierzchnia pod krzywą (AUC) jest badana w różnych określonych czasach w zależności od donosowego środka prowokacyjnego.