Разработка моделей носовых инфекций человека с микробными компонентами и пыльцой травы

ДИЗАЙН И МЕТОДОЛОГИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование включает 3 части, в которых испытуемым вводят различные назальные спреи:

1. Бактериальные или вирусные компоненты, включающие один из следующих компонентов у конкретного пациента;

   1. MPLA (монофосфорильный липид A) напоминает бактериальный липополисахарид.
   2. PolyIC (полиинозиновая и цитидиловая кислоты): вирусный компонент
   3. PolyICLC (polyIC, стабилизированный полилизином): вирусный компонент
   4. Ресиквимод: вирусный имитатор
2. Туберкулин: частично очищенное производное белка (PPD) из Mycobacterium bovis, бактерий, вызывающих туберкулез.
3. Аллерген: Назальный спрей представляет собой пыльцу травы тимофеевки.

НАБОР ПЕРСОНАЛА

Цель состоит в том, чтобы набрать в общей сложности 174 субъекта. Субъекты будут идентифицированы с помощью объявлений в газетах, плакатов в кампусе, услуг врачей общей практики, амбулаторных клиник в больнице Святой Марии, включая противотуберкулезные клиники в больнице Святой Марии. Мы получим полностью информированное согласие. Все данные будут обрабатываться в соответствии с GCP и местными рекомендациями по управлению информацией.

КОЛИЧЕСТВО СУБЪЕКТОВ И ДОЗИРОВКА

ЧАСТЬ 1: Назальная провокация микробными компонентами с возрастающей дозой с использованием MPLA, polyIC, polyICLC и резиквимода. Он разделен на часть А и часть В.

ЧАСТЬ 1A (n = 32): Исследование возрастающей дозы на основе переносимости и SAM. 4 когорты из 8 здоровых добровольцев (4 из 8 с аллергией на пыльцу трав, клещей домашней пыли или сенной лихорадкой в ​​анамнезе). Одна когорта для каждого микробного компонента. Каждой когорте будет дан контрольный тест с назальным солевым раствором и три возрастающие дозы назального микробного компонента:

• 10 мкг микробного компонента в 100 мкл физиологического раствора
• 100 мкг микробного компонента в 100 мкл физиологического раствора
• 500 мкг микробного компонента в 100 мкл физиологического раствора

ЧАСТЬ 1B (n = 64): однократная верхняя доза с дополнительным специальным зондом для отбора проб (SSP) и кюретажем, отдельная группа до 16 здоровых добровольцев (8 из 16 аллергиков на пыльцу трав, клещей домашней пыли, сенная лихорадка в анамнезе). Каждому субъекту давали контрольный раствор физиологического раствора и одну максимальную дозу после установления переносимости и ответа SAM.

РЕЗИКИМОД:

В части B будет показано, как 10 мкг в каждую ноздрю вводят 36 добровольцам:

12 астматиков-аллергиков 12 добровольцев с атопией 12 добровольцев без атопии

ЧАСТЬ 2: Назальная провокация туберкулином с возрастающей дозой. Он разделен на часть А и часть В.

ЧАСТЬ 2A (n = 16): включает в общей сложности 16 субъектов с латентным ТБ (LTB). Эта группа подразделяется на 4 когорты по 4 субъекта в соответствии с дозой вводимого туберкулина;

• 0,1 ТЕ в 100 мкл, n = 4
• 1,0 ТЕ в 100 мкл, n = 4
• 2,0 ТЕ в 100 мкл, n = 4
• 5,0 ТЕ в 100 мкл, n = 4 Каждая когорта имеет только 1 провокацию. Начальная доза очень низкая и составляет 0,1 ТЕ. Если он хорошо переносится, субъект перейдет к следующей более высокой дозе 1,0 ТЕ. Если это также хорошо переносится, субъект перейдет к следующей более высокой дозе 2,0 ТЕ, а затем к самой высокой дозе 5,0 ТЕ в этой группе, обеспечивая постоянную безопасность субъектов.

ЧАСТЬ 2B (N=16): Максимальная доза с дополнительным отбором проб. Это включает 16 человек в двух группах (8 здоровых добровольцев и 8 субъектов с латентным туберкулезом).

1 группа: латентный ТБ субъект, кол. человек = 8 Эта группа получит максимальную дозу (5-10,0 TU) туберкулиновой провокации. Из 8 субъектов в каждой группе 2 получат плацебо (пустышка с солевым раствором), а оставшиеся 6 получат туберкулиновый спрей.

Группа 2: Здоровые добровольцы, кол. человек = 8 Эта группа также получит максимальную дозу (5-10,0 TU) туберкулиновой провокации при условии переносимости. Из 8 испытуемых 2 получат плацебо (солевой фиктивный спрей), а остальные 6 получат туберкулиновый спрей.

ЧАСТЬ 3 (n = 46): Назальный аллерген с пыльцой Timothy Grass

Первоначально необходимо обследовать 30 человек: одна группа из 12 человек с сенной лихорадкой, одна группа из 12 человек с астмой с аллергией на пыльцу трав и группа из 6 человек без аллергии и без астмы. В дополнительной группе 16 человек с сенной лихорадкой должны быть обследованы путем непрерывного взятия проб жидкости из слизистой оболочки носа с помощью специального пробоотборного зонда (SSP) после заражения назальным спреем.

1. 1 группа: больные сенной лихорадкой, n = 12.
2. 2 группа: люди с аллергической астмой, n = 12.
3. 3 группа: здоровые люди без атопии, n = 6.
4. Дополнительная группа 4: больные сенной лихорадкой, n=16.

НАЗАЛЬНЫЕ ПРОЦЕДУРЫ В ИССЛЕДОВАНИИ

1. Промывание носа (промывание носа): в начале дня промывание носа будет проводиться путем введения в нос небольшого объема соленой воды (физиологического раствора). Эта процедура проводится перед другими процедурами по очистке носа. Жидкость, полученная из носовых смывов, выбрасывается и не анализируется.
2. Абсорбция жидкости слизистой носа (назосорбция или SAM): небольшая полоска абсорбирующего материала, которая выглядит и на ощупь напоминает мягкую папиросную бумагу, будет использоваться для поглощения влаги с внутренней поверхности ноздри. Специальную абсорбирующую бумагу помещают внутрь ноздри и оставляют на 2 минуты для впитывания жидкости, выстилающей нос, а затем удаляют, осторожно всасывая жидкость, как промокательную бумагу. Помещение бумаги в нос может вызвать щекотку и вызвать слезотечение. Тем не менее, назосорбция безболезненна, и наш метод хорошо переносится младенцами, детьми и взрослыми. Бумага поглощает носовую жидкость, и многие вещества, вырабатываемые клетками носа, затем могут быть извлечены из бумаги и измерены в лаборатории.
3. Соскоб из носа (кюретаж или ринозонд): в нос вводится небольшой стерильный одноразовый пластиковый зонд, который аккуратно прижимается к внутренней поверхности слизистой оболочки ноздри. Зонд длиной 3 дюйма имеет крошечный совок на конце, который едва можно разглядеть. 24 крошечных образца из каждой ноздри (булавочная головка, 2 мм ткани) будут взяты из части носа, которая имеет уменьшенную иннервацию, чтобы ограничить любой дискомфорт. Взятие этого образца не вызывает кровотечения, но может вызвать легкий дискомфорт и небольшое слезотечение. Зонд собирает носовые клетки с поверхности ноздри, которые затем отправляются на анализ. Этот метод применялся на многих взрослых, детях и младенцах и очень хорошо переносился.
4. Специальный зонд для отбора проб (SSP). Жидкость, выстилающая поверхность носа, также может быть собрана с помощью специального зонда для отбора проб или SSP, который использует электрораспылитель для отражения капель от жидкости, выстилающей нос. Это будет сделано путем непрерывного отбора проб в течение нескольких часов из одной ноздри. При использовании этого специального пробоотборного зонда (SSP) в носу людей ощущается легкое щекотание во время забора пробы. Это едва ли можно заметить.

СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

Распределение данных будет оцениваться с помощью теста Шапиро-Уилкса, который определяет, имеют ли данные нормальное (параметрическое) или ненормальное (непараметрическое) распределение.

Нормальные данные будут отображаться графически как:

• средние арифметические и стандартная ошибка средних (SEM)
• или значит с СД
• или средние значения с доверительными интервалами (ДИ)

Ненормальные данные будут отображаться графически как:

Box-whisker: медиана, квартили, диапазон

Для ненормальных данных будут измеряться отличия от исходного уровня для активного контрольного агента (в разных дозах) и плацебо в каждый момент времени, и будет рассчитываться AUC. Различия в AUC по сравнению с плацебо (активным плацебо) рассчитывают, а значимость проверяют с помощью непараметрического критерия знакового ранга Вилкоксона (отдельная популяция). Площадь под кривой (AUC) должна измеряться в течение различных определенных периодов времени в зависимости от назального агента.