Udvikling af menneskelige næseudfordringsmodeller med mikrobielle bestanddele og græspollen

STUDIEDESIGN OG METODOLOGI

Undersøgelsen involverer 3 dele med forskellige næsespray-udfordringer, der administreres til forsøgspersoner:

1. Bakterielle eller virale komponenter, omfattende en af ​​følgende i en bestemt patient;

   1. MPLA (monophosphoryl lipid A) ligner bakterielt lipopolysaccharid
   2. PolyIC (polyinosin- og cytidylsyre): viral komponent
   3. PolyICLC (polyIC stabiliseret med polyLlysin): viral komponent
   4. Resiquimod: viral efterligning
2. Tuberkulin: delvist oprenset proteinderivat (PPD) fra Mycobacterium bovis, den bakterie, der forårsager TB.
3. Allergen: Næsespray-udfordringsmidlet er Timothy græspollen.

REKRUTTERING

Målet er at rekruttere i alt 174 fag. Emner vil blive identificeret gennem annoncer i aviserne, plakater på campus, praktiserende læger, ambulatorier på St. Mary's hospital, herunder TB-klinikker på St. Mary's Hospital. Vi vil få fuldt informeret samtykke. Alle data vil blive administreret i henhold til GCP og lokale retningslinjer for informationsstyring.

ANTAL EMNER OG DOSERING

DEL 1: Nasal stigende dosis challenge med mikrobielle bestanddele ved hjælp af MPLA, polyIC, polyICLC og resiquimod. Dette er opdelt i del A og del B.

DEL 1A (n=32): Inkrementel stigende dosisundersøgelse baseret på tolerabilitet og SAM. 4 kohorter af 8 raske frivillige (4 af 8 med allergi over for græspollen, husstøvmide eller historie med høfeber). En kohorte for hver mikrobiel bestanddel. Hver kohorte vil blive givet en nasal saltvandskontroludfordring og tre stigende doser af den nasale mikrobielle bestanddel udfordring:

• 10μg mikrobiel bestanddel i 100μl saltvand
• 100μg mikrobiel bestanddel i 100μl saltvand
• 500μg mikrobiel bestanddel i 100μl saltvand

DEL 1B (n=64): Enkelt topdosis med yderligere speciel prøvetagningssonde (SSP) og curettage, enkelt kohorte på op til 16 raske frivillige (8 af 16 allergier over for græspollen, husstøvmide, høfeber i historien). Hvert individ fik saltvandskontrol og en enkelt topdosis efter etablering af tolerabilitet og SAM-respons.

RESIQUIMOD:

I del B vil der blive givet 10 μg pr. næsebor til 36 frivillige:

12 allergiske astmatikere 12 atopiske frivillige 12 ikke-atopiske frivillige

DEL 2: Nasal stigende dosis udfordring med tuberkulin. Dette er opdelt i del A og del B.

DEL 2A (n=16): Dette omfatter i alt 16 latent TB (LTB) forsøgspersoner. Denne gruppe er underopdelt i 4 kohorter af 4 forsøgspersoner i henhold til dosis af tuberkulin, der administreres;

• 0,1 TU i 100 μl, n = 4
• 1,0 TU i 100 μl, n = 4
• 2,0 TU i 100 μl, n = 4
• 5,0 TU i 100μl, n = 4 Hver kohorte har kun 1 udfordring. Startdosis er meget lav ved 0,1 TU. Hvis det tolereres godt, vil forsøgspersonen fortsætte til den næste højere dosis på 1,0 TU. Hvis dette også tolereres godt, vil forsøgspersonen fortsætte til den næste højere dosis på 2,0 TU og derefter til den højeste dosis på 5,0 TU i denne gruppe, hvilket til enhver tid sikrer forsøgspersonernes sikkerhed.

DEL 2B (N=16): Topdosis med yderligere prøveudtagning. Dette består af 16 personer i to grupper (8 raske frivillige og 8 forsøgspersoner med latent TB).

Gruppe 1: Latent TB-fag, nr. af personer = 8 Denne gruppe vil modtage den højeste dosis (5-10,0 TU) af tuberkulin-udfordringen. Ud af de 8 forsøgspersoner i hver gruppe vil 2 modtage placebo (saltvandsdummy-spray), og de resterende 6 vil blive givet tuberkulinspray-udfordringen.

Gruppe 2: Friske frivillige, nr. af personer = 8 Denne gruppe vil også modtage den højeste dosis (5-10,0 TU) af tuberkulin-udfordringen, med forbehold for tolerabilitet. Ud af de 8 forsøgspersoner vil 2 modtage placebo (saltvandsdummy-spray), og de resterende 6 vil blive givet tuberkulinspray-udfordringen

DEL 3 (n=46): Nasal Allergen Challenge med Timothy Grass Pollen

Indledningsvis skal 30 personer undersøges: en gruppe på 12 personer har høfeber, en gruppe på 12 personer har astma med græspollenallergi, og en gruppe på 6 personer er ikke-allergiske og har ikke astma. I en yderligere gruppe skal 16 personer med høfeber undersøges ved at tage kontinuerlige prøver af overfladen af ​​næseslimhinden ved hjælp af en speciel prøveudtagningssonde (SSP) efter næsespraypåvirkningen.

1. Gruppe 1: mennesker med høfeber, n = 12
2. Gruppe 2: personer med allergisk astma, n = 12
3. Gruppe 3: raske, ikke-natopiske mennesker, n = 6
4. Yderligere gruppe 4: personer med høfeber, n=16

NASALE PROCEDURER I UNDERSØGELSEN

1. Næseskylning (næseskylning): I starten af ​​dagen udføres næseskylninger i næsen ved at lede en lille mængde saltvand (saltvand) væske ind i næsen. Denne procedure udføres før andre procedurer for at rense næsen. Væsken opnået fra næseskylningen kasseres og analyseres ikke.
2. Absorption af væske i næsebeklædningen (nasosorption eller SAM): En lille strimmel af absorberende materiale, der ser ud og føles som blødt silkepapir, vil blive brugt til at absorbere fugt fra den indvendige overflade af næseboret. Det specielle absorberende papir vil blive placeret inde i næseboret og efterlades i en periode på 2 minutter for at absorbere næseslimhinden, før det fjernes, og forsigtigt suger væske op som duppepapir. At putte papiret ind i næsen kan kilde og få øjnene til at løbe lidt i vand. Nasosorptionen gør dog ikke ondt, og vores metode har vist sig at være veltolereret hos babyer, børn og voksne. Papiret absorberer næsevæsken, og mange stoffer produceret af næsecellerne kan derefter udvindes fra papiret og måles i laboratoriet.
3. Næseafskrabning (næsekurettage eller Rhinoprobe): En lille steril engangsplastiksonde indsættes i næsen og presses forsigtigt mod den indvendige overflade af næseboret. Den 3 tommer lange sonde har en lille scoop på enden, som næsten ikke kan ses. 24 bittesmå prøver fra hvert næsebor (et knappenålshoved, 2 mm, væv) vil blive taget fra en del af næsen, der har en reduceret nerveforsyning for at begrænse ethvert ubehag. At tage denne prøve forårsager ikke blødning, men kan forårsage mildt ubehag og kan få øjnene til at løbe lidt i vand. Sonden vil opsamle næseceller fra overfladen af ​​næseboret, som derefter sendes til analyse. Denne metode er blevet udført på mange voksne, børn og babyer og er blevet meget godt tolereret.
4. Special Sampling Probe (SSP): Næseoverfladeslimvæsken kan også opsamles ved hjælp af en speciel prøvetagningssonde eller SSP, der bruger en elektrospray til at kaste dråber ud af næseslimhinden. Dette vil ske ved kontinuerlig prøvetagning i et par timer fra et enkelt næsebor. Når du bruger denne specielle prøvetagningssonde (SSP) i folks næser, er der en let kildrende fornemmelse, mens prøven tages. Dette kan næsten ikke bemærkes.

STATISTISK ANALYSE

Fordelingen af ​​data vil blive vurderet ved ShapiroWilks-testen, som afgør, om dataene har en normal (parametrisk) eller ikke-normal (ikke-parametrisk) fordeling.

Normale data vil blive vist grafisk som:

• aritmetiske middelværdier og standardfejl (SEM)
• eller betyder med SD'er
• eller betyder med konfidensintervaller (CI'er)

Ikke-normale data vil blive vist grafisk som:

Box-whisker: median, kvartiler, rækkevidde

For ikke-normale data vil forskellene fra baseline blive målt for aktivt udfordringsmiddel (ved forskellige doser) og placebo på hvert tidspunkt, og AUC beregnes. Forskellene i AUC fra placebo (aktiv placebo) beregnes, og signifikansen testes med den ikke-parametriske Wilcoxon signed rank test (enkelt population). Area under the curve (AUC) skal sagsøges over forskellige definerede tider afhængigt af nasal provokationsmiddel.