Az anti-dsDNS mérése CLIFT és ELISA módszerrel

Az autoimmun reumás betegségek olyan autoimmun betegségek, amelyek ízületi és izommegnyilvánulásokkal jelentkeznek. Mindazonáltal más szervek is eltérő mértékben érintettek különböző körülmények között. Ezeket kötőszöveti betegségeknek (CTD) vagy kollagénbetegségeknek is nevezik. Ide tartozik a szisztémás lupus erythematosus (SLE), a rheumatoid arthritis (RA), a Sjiogren-szindróma (SjS), a szisztémás sclerosis, a polymyositis és a dermatomyositis, valamint a vegyes kötőszöveti betegség (Peakman és Vergani, 2009).

Az autoimmun reumás betegségeket antinukleáris antitestek (ANA) jelenléte jellemzi. Ezek az antitestek részt vesznek a betegség patogenezisében, és jelenlétük a betegek szérumában a betegség diagnózisának egyik kritériuma (a klinikai megnyilvánulásokkal együtt) (Stevens, 2010). Az ANA-k közé tartoznak az extrahálható nukleáris antigének elleni autoantitestek, valamint a hisztonok és a dezoxiribonukleinsav (DNS) elleni autoantitestek.

Az anti-DNS antitestek közé tartoznak az egy- és kétszálú DNS (ssDNS és dsDNS) elleni antitestek. Az anti-dsDNS antitesteket az SLE diagnosztikai markereiként és az SLE-betegség aktivitásának indikátoraiként ismerik fel, különösen lupus nephritis esetén (Zigon és mtsai, 2011). Magas anti-dsDNS-szint azonban csak az SLE-s betegek 50-70%-ában található meg. . Tehát a negatív anti-dsDNS teszt nem zárja ki az SLE-t. Az anti-dsDNS antitestek más autoimmun betegségekben is kimutathatók, mint például RA és SjS, valamint egészséges véradókban (Zigon et al., 2011). A -dsDNS az SLE diagnózisában és az SLE-betegség aktivitásának monitorozásában a tesztlaboratóriumi kérések, valamint a kereskedelmi forgalomban kapható kitek számának növekedéséhez vezetett (Chiaro et al., 2011).

Az anti-dsDNS antitestek kimutatására és mennyiségi meghatározására használt készletek a következők:

1. Farr-technika (FARR-RIA) szerint kifejlesztett radioimmunoassay módszerek (Wold et al., 1968). A radioaktív elem Farr-tesztben való felhasználása miatt azonban nem használják széles körben a rutin diagnosztikai laboratóriumi munkákban (Mahler és Fritzler, 2007).
2. Az Aarden és munkatársai (1975) által kifejlesztett Crithidia luciliae immunfluoreszcencia teszt (CLIFT) az anti-dsDNS-t indirekt immunfluoreszcenciával detektálja a Crithidia luciliae hemoflagellát segítségével, amely nagy koncentrációban natív (dsDNS) DNS-t tartalmazó kinetoplasztot tartalmaz (Zigon et al., 2011). Az immunfluoreszcencia leolvasása és értelmezése azonban szubjektív, és a laboratóriumi személyzet tapasztalatától és képzettségétől függ, ami befolyásolhatja a vizsgálati eredményeket (Chiaro et al., 2011).
3. Az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat (ELISA) egyszerűen végrehajtható, nem igényel magasan képzett kezelőket, és automatizálható. Ezért ez válik a legszélesebb körben használt módszerré (Kumar et al., 2009). Az anti-dsDNS ELISA vizsgálatok növekvő számával a diagnosztikai pontosság variabilitásának lehetősége óriási, mivel a különböző antigének, vizsgálati elvek és határérték-meghatározások alkalmazottak (Chiaro et al., 2011). Az anti-dsDNS ELISA-k hamis pozitív eredményeket adhatnak, mivel az immunkomplexek kötődnek a bevonat előtti intermedierekhez (Zigon et al., 2011).

Az Assiut Egyetemi Kórház Klinikai Immunológiai Laboratóriumában áttértünk a manuális ELISA készletekről az automatizált ELISA platformra (Alegria rendszer, Orgentec Diagnostika, Németország), és a közelmúltban a CLIFT is megjelent a laboratóriumban.