Měření Anti-dsDNA metodou CLIFT i ELISA

Autoimunitní revmatická onemocnění jsou autoimunitní onemocnění projevující se kloubními a svalovými projevy. U různých stavů však mohou být v různé míře postiženy i jiné orgány. Říká se jim také onemocnění pojivové tkáně (CTD) nebo kolagenová onemocnění. Patří mezi ně systémový lupus erythematodes (SLE), revmatoidní artritida (RA), Sjiogrenův syndrom (SjS), systémová skleróza, polymyositida a dermatomyositida a smíšené onemocnění pojivové tkáně (Peakman a Vergani, 2009).

Autoimunitní revmatická onemocnění jsou charakterizována přítomností antinukleárních protilátek (ANA). Tyto protilátky se podílejí na patogenezi onemocnění a jejich přítomnost v séru pacientů tvoří jedno z kritérií používaných (spolu s klinickými projevy) pro diagnostiku onemocnění (Stevens, 2010). ANA zahrnují autoprotilátky proti extrahovatelným jaderným antigenům a autoprotilátky proti histonům a deoxyribonukleové kyselině (DNA).

Anti-DNA protilátky zahrnují protilátky proti jednovláknové a dvouvláknové DNA (ssDNA a dsDNA, v daném pořadí). Protilátky anti-dsDNA jsou rozpoznávány jako diagnostické markery SLE a jako indikátory aktivity onemocnění SLE, zejména u lupusové nefritidy (Zigon et al., 2011). Vysoké hladiny anti-dsDNA se však nacházejí pouze u 50–70 % pacientů se SLE . Negativní anti-dsDNA test tedy nevylučuje SLE Protilátky anti-dsDNA lze také detekovat u jiných autoimunitních onemocnění, jako je RA a SjS, stejně jako u zdravých dárců krve (Zigon et al., 2011). -dsDNA v diagnostice SLE a při monitorování aktivity onemocnění SLE vedla k nárůstu požadavků této testovací laboratoře i počtu komerčně dostupných kitů (Chiaro et al., 2011).

Soupravy, které se používají při detekci a kvantifikaci anti-dsDNA protilátek, zahrnují:

1. Radioimunoanalytické metody vyvinuté podle Farrovy techniky (FARR-RIA) (Wold et al., 1968). Vzhledem k použití radioaktivního prvku ve Farrově testu však není široce používán v rutinní diagnostické laboratorní práci (Mahler a Fritzler, 2007).
2. Imunofluorescenční test Crithidia luciliae (CLIFT) vyvinutý Aardenem a kol. (1975) detekuje anti-dsDNA nepřímou imunofluorescencí pomocí hemoflagelátu Crithidia luciliae, který obsahuje kinetoplast, který obsahuje vysokou koncentraci nativní (dsDNA) DNA (Zigon a kol., 2011). Čtení a interpretace imunofluorescence je však subjektivní a závisí na zkušenostech a školení laboratorního personálu, což by mohlo ovlivnit výsledky testu (Chiaro et al., 2011).
3. Enzyme-linked immunosorbant assay (ELISA) se snadno provádí, nevyžaduje vysoce vyškolenou obsluhu a lze jej automatizovat. Stává se proto nejpoužívanější metodou (Kumar et al., 2009). S rostoucím počtem testů anti-dsDNA ELISA je potenciál variability v diagnostické přesnosti obrovský, protože různé antigeny, principy testů a stanovení cut-off jsou zaměstnaní (Chiaro et al., 2011). Anti-dsDNA ELISA mohou poskytovat falešně pozitivní výsledky kvůli vazbě imunitních komplexů na meziprodukty před nátěrem (Zigon et al., 2011).

V Laboratoři klinické imunologie Fakultní nemocnice Assiut jsme přešli z manuálních souprav ELISA na automatizovanou platformu ELISA (systém Alegria, Orgentec Diagnostika, Německo) a nedávno byl v laboratoři zaveden CLIFT.