Mätning av Anti-dsDNA med både CLIFT & ELISA

Autoimmuna reumatiska sjukdomar är autoimmuna sjukdomar med led- och muskelmanifestationer. Andra organ kan dock vara inblandade i varierande grad under olika förhållanden. De kallas också bindvävssjukdomar (CTD) eller kollagensjukdomar. De inkluderar systemisk lupus erythematosus (SLE), reumatoid artrit (RA), Sjogrens syndrom (SjS), systemisk skleros, polymyosit och dermatomyosit och blandad bindvävssjukdom (Peakman och Vergani, 2009).

Autoimmuna reumatiska sjukdomar kännetecknas av närvaron av antinukleära antikroppar (ANA). Dessa antikroppar är involverade i sjukdomspatogenesen och deras närvaro i patienternas sera utgör ett av de kriterier som används (tillsammans med de kliniska manifestationerna) för sjukdomsdiagnostik (Stevens, 2010). ANA inkluderar autoantikroppar mot extraherbara nukleära antigener och autoantikroppar mot histoner och deoxiribonukleinsyra (DNA).

Anti-DNA-antikroppar inkluderar de mot enkel- och dubbelsträngat DNA (ssDNA respektive dsDNA). Anti-dsDNA-antikroppar erkänns som diagnostiska markörer för SLE och som indikatorer på SLE-sjukdomsaktivitet, särskilt vid lupusnefrit (Zigon et al., 2011). Höga anti-dsDNA-nivåer finns dock endast hos 50-70 % av SLE-patienterna . Så, negativt anti-dsDNA-test utesluter inte SLE. Anti-dsDNA-antikroppar kan också detekteras vid andra autoimmuna sjukdomar som RA och SjS, såväl som hos friska blodgivare (Zigon et al., 2011). Betydelsen av anti -dsDNA vid SLE-diagnos och vid övervakning av SLE-sjukdomsaktivitet har lett till en ökning av detta testlaboratorieförfrågningar såväl som i antalet kommersiellt tillgängliga kit (Chiaro et al., 2011).

Satsen som används för detektion och kvantifiering av anti-dsDNA-antikroppar inkluderar:

1. Radioimmunoanalysmetoder utvecklade enligt Farr-teknik (FARR-RIA) (Wold et al., 1968). Men på grund av användningen av radioaktivt element i Farr-analysen används det inte i stor utsträckning i det rutinmässiga diagnostiska laboratoriearbetet (Mahler och Fritzler, 2007).
2. Crithidia luciliae immunofluorescenstest (CLIFT) utvecklat av Aarden et al (1975) detekterar anti-dsDNA genom indirekt immunofluorescens med användning av hemoflagellaten Crithidia luciliae som innehåller kinetoplast som innehåller en hög koncentration av naturligt (dsDNA) DNA (Zigon et al.). Men läsning och tolkning av immunfluorescensen är subjektiv och beror på laboratoriepersonalens erfarenhet och utbildning, vilket kan påverka testresultaten (Chiaro et al., 2011).
3. Enzym-linked immunosorbant assay (ELISA) är enkel att utföra, kräver ingen välutbildad operatör och kan automatiseras. Därför håller det på att bli den mest använda metoden (Kumar et al., 2009). Med det ökande antalet anti-dsDNA ELISA-analyser är potentialen för variabilitet i den diagnostiska noggrannheten enorm eftersom olika antigener, analysprinciper och cutoff-bestämningar är anställd (Chiaro et al., 2011). Anti-dsDNA ELISA kan ge falskt positiva resultat på grund av bindning av immunkomplex till pre-coat intermediärer (Zigon et al., 2011).

I Laboratory of Clinical Immunology, Assiut University Hospital, gick vi från manuella ELISA-kit till automatiserad ELISA-plattform (Alegria-systemet, Orgentec Diagnostika, Tyskland) och nyligen introducerades CLIFT i laboratoriet.