Misurazione dell'anti-dsDNA sia mediante CLIFT che ELISA

Le malattie reumatiche autoimmuni sono malattie autoimmuni presentate con manifestazioni articolari e muscolari. Tuttavia, altri organi possono essere coinvolti in misura diversa in condizioni diverse. Sono anche chiamate malattie del tessuto connettivo (CTD) o malattie del collagene. Includono il lupus eritematoso sistemico (LES), l'artrite reumatoide (RA), la sindrome di Sjiogren (SjS), la sclerosi sistemica, la polimiosite e la dermatomiosite e la malattia mista del tessuto connettivo (Peakman e Vergani, 2009).

Le malattie reumatiche autoimmuni sono caratterizzate dalla presenza di anticorpi antinucleari (ANA). Questi anticorpi sono coinvolti nella patogenesi della malattia e la loro presenza nel siero dei pazienti costituisce uno dei criteri utilizzati (insieme alle manifestazioni cliniche) per la diagnosi della malattia (Stevens, 2010). Gli ANA includono autoanticorpi contro antigeni nucleari estraibili e autoanticorpi contro istoni e acido desossiribonucleico (DNA).

Gli anticorpi anti-DNA includono quelli contro il DNA a singolo e doppio filamento (rispettivamente ssDNA e dsDNA). Gli anticorpi anti-dsDNA sono riconosciuti come marcatori diagnostici del LES e come indicatori dell'attività della malattia del LES, specialmente nella nefrite da lupus (Zigon et al., 2011). Tuttavia, livelli elevati di anti-dsDNA si riscontrano solo nel 50-70% dei pazienti con LES . Quindi, il test anti-dsDNA negativo non esclude il LES Inoltre, gli anticorpi anti-dsDNA possono essere rilevati in altre malattie autoimmuni come RA e SjS, così come in donatori di sangue sani (Zigon et al., 2011). Il significato di anti-dsDNA -dsDNA nella diagnosi del LES e nel monitoraggio dell'attività della malattia del LES ha portato ad un aumento delle richieste di questo laboratorio di analisi e del numero di kit disponibili in commercio (Chiaro et al., 2011).

I kit utilizzati per il rilevamento e la quantificazione degli anticorpi anti-dsDNA includono:

1. Metodi radioimmunologici sviluppati secondo la tecnica Farr (FARR-RIA) (Wold et al., 1968). Tuttavia, a causa dell'uso dell'elemento radioattivo nel dosaggio Farr, non è ampiamente utilizzato nel lavoro di laboratorio diagnostico di routine (Mahler e Fritzler, 2007).
2. Il test di immunofluorescenza Crithidia luciliae (CLIFT) sviluppato da Aarden et al (1975) rileva l'anti-dsDNA mediante immunofluorescenza indiretta utilizzando l'emoflagellato Crithidia luciliae che contiene un cinetoplasto che contiene un'alta concentrazione di DNA nativo (dsDNA) (Zigon et al., 2011). Tuttavia, la lettura e l'interpretazione dell'immunofluorescenza è soggettiva e dipende dall'esperienza e dalla formazione del personale di laboratorio che potrebbe influenzare i risultati del test (Chiaro et al., 2011).
3. Il test ELISA (Enzyme Linked Immunosorbant Assay) è semplice da eseguire, non richiede operatori altamente qualificati e può essere automatizzato. Pertanto, sta diventando il metodo più utilizzato (Kumar et al., 2009). Con il numero crescente di test ELISA anti-dsDNA, il potenziale di variabilità nelle accuratezze diagnostiche è enorme in quanto diversi antigeni, principi di dosaggio e determinazioni di cutoff sono occupati (Chiaro et al., 2011). Gli ELISA anti-dsDNA possono dare risultati falsi positivi a causa del legame degli immunocomplessi agli intermedi pre-coat (Zigon et al., 2011).

Nel Laboratorio di Immunologia Clinica, Assiut University Hospital, siamo passati dai kit ELISA manuali alla piattaforma ELISA automatizzata (sistema Alegria, Orgentec Diagnostika, Germania) e recentemente CLIFT è stato introdotto nel laboratorio.