Pomiar anty-dsDNA metodą CLIFT i ELISA

Autoimmunologiczne choroby reumatyczne są zaburzeniami autoimmunologicznymi objawiającymi się stawami i mięśniami. Jednak inne narządy mogą być zaangażowane w różnym stopniu w różnych warunkach. Nazywa się je również chorobami tkanki łącznej (CTD) lub chorobami kolagenu. Należą do nich toczeń rumieniowaty układowy (SLE), reumatoidalne zapalenie stawów (RA), zespół Sjiogrena (SjS), twardzina układowa, zapalenie wielomięśniowe i zapalenie skórno-mięśniowe oraz mieszana choroba tkanki łącznej (Peakman i Vergani, 2009).

Autoimmunologiczne choroby reumatyczne charakteryzują się obecnością przeciwciał przeciwjądrowych (ANA). Przeciwciała te biorą udział w patogenezie choroby, a ich obecność w surowicach pacjentów stanowi jedno z kryteriów stosowanych (wraz z objawami klinicznymi) do rozpoznania choroby (Stevens, 2010). ANA obejmują autoprzeciwciała przeciwko ekstrahowalnym antygenom jądrowym i autoprzeciwciała przeciwko histonom i kwasowi dezoksyrybonukleinowemu (DNA).

Przeciwciała anty-DNA obejmują przeciwciała przeciwko jednoniciowemu i dwuniciowemu DNA (odpowiednio ssDNA i dsDNA). Przeciwciała anty-dsDNA są rozpoznawane jako markery diagnostyczne SLE i jako wskaźniki aktywności choroby SLE, zwłaszcza w toczniowym zapaleniu nerek (Zigon i wsp., 2011). Jednak wysokie poziomy anty-dsDNA stwierdza się tylko u 50-70% pacjentów z SLE . Tak więc negatywny wynik testu anty-dsDNA nie wyklucza SLE. Również przeciwciała anty-dsDNA można wykryć w innych chorobach autoimmunologicznych, takich jak RZS i SjS, jak również u zdrowych dawców krwi (Zigon i wsp., 2011). -dsDNA w diagnostyce SLE iw monitorowaniu aktywności choroby SLE doprowadziło do wzrostu wymagań tego laboratorium testowego, jak również liczby dostępnych na rynku zestawów (Chiaro et al., 2011).

Zestawy stosowane do wykrywania i oznaczania ilościowego przeciwciał anty-dsDNA obejmują:

1. Metody radioimmunologiczne opracowane zgodnie z techniką Farra (FARR-RIA) (Wold i in., 1968). Jednak ze względu na zastosowanie pierwiastka promieniotwórczego w teście Farra nie jest on powszechnie stosowany w rutynowej diagnostyce laboratoryjnej (Mahler i Fritzler, 2007).
2. Test immunofluorescencji Crithidia luciliae (CLIFT) opracowany przez Aardena i wsp. (1975) wykrywa anty-dsDNA metodą immunofluorescencji pośredniej przy użyciu hemoflagellatu Crithidia luciliae, który zawiera kinetoplast zawierający wysokie stężenie natywnego (dsDNA) DNA (Zigon i in., 2011). Odczyt i interpretacja immunofluorescencji jest jednak subiektywna i zależy od doświadczenia i przeszkolenia personelu laboratorium, co może mieć wpływ na wyniki testu (Chiaro i in., 2011).
3. Test immunoenzymatyczny (ELISA) jest prosty do wykonania, nie wymaga wysoko wykwalifikowanych operatorów i może być zautomatyzowany. Dlatego staje się ona najczęściej stosowaną metodą (Kumar i in., 2009). Wraz ze wzrostem liczby testów anty-dsDNA ELISA, potencjał zmienności w dokładności diagnostycznej jest ogromny, ponieważ różne antygeny, zasady testu i oznaczenia odcięcia zatrudnionych (Chiaro i in., 2011). Testy ELISA przeciwko dsDNA mogą dawać wyniki fałszywie dodatnie z powodu wiązania kompleksów immunologicznych z półproduktami przed powlekaniem (Zigon i in., 2011).

W Laboratorium Immunologii Klinicznej Szpitala Uniwersyteckiego Assiut przeszliśmy z ręcznych zestawów ELISA na zautomatyzowaną platformę ELISA (system Alegria, Orgentec Diagnostika, Niemcy), a ostatnio w laboratorium wprowadzono CLIFT.