Anti-dsDNA:n mittaus sekä CLIFT:llä että ELISA:lla

Autoimmuunisairaudet ovat autoimmuunisairauksia, joissa esiintyy nivel- ja lihasoireita. Muut elimet voivat kuitenkin olla mukana vaihtelevassa määrin eri olosuhteissa. Niitä kutsutaan myös sidekudossairauksiksi (CTD) tai kollageenisairauksiksi. Niihin kuuluvat systeeminen lupus erythematosus (SLE), nivelreuma (RA), Sjiogrenin oireyhtymä (SjS), systeeminen skleroosi, polymyosiitti ja dermatomyosiitti sekä sekamuotoiset sidekudostaudit (Peakman ja Vergani, 2009).

Autoimmuunireumaattisille sairauksille on ominaista antinukleaaristen vasta-aineiden (ANA) esiintyminen. Nämä vasta-aineet osallistuvat taudin patogeneesiin, ja niiden esiintyminen potilaiden seerumeissa on yksi kriteereistä, joita käytetään (yhdessä kliinisten ilmenemismuotojen kanssa) taudin diagnosoinnissa (Stevens, 2010). ANA:t sisältävät autovasta-aineet uutettavia ydinantigeenejä vastaan ​​ja autovasta-aineet histoneille ja deoksiribonukleiinihapolle (DNA).

Anti-DNA-vasta-aineet sisältävät vasta-aineet yksi- ja kaksijuosteista DNA:ta vastaan ​​(ssDNA ja dsDNA, vastaavasti). Anti-dsDNA-vasta-aineet tunnistetaan SLE:n diagnostisiksi markkereiksi ja SLE-taudin aktiivisuuden indikaattoreiksi, erityisesti lupus nefriitissä (Zigon et al., 2011). Korkeita anti-dsDNA-tasoja löytyy kuitenkin vain 50–70 %:lla SLE-potilaista. . Negatiivinen anti-dsDNA-testi ei siis sulje pois SLE:tä. Anti-dsDNA-vasta-aineita voidaan havaita myös muissa autoimmuunisairauksissa, kuten RA:ssa ja SjS:ssä, sekä terveillä verenluovuttajilla (Zigon et al., 2011). -dsDNA SLE-diagnoosissa ja SLE-taudin aktiivisuuden seurannassa on johtanut tämän testilaboratorion pyyntöjen lisääntymiseen sekä kaupallisesti saatavien pakkausten lukumäärään (Chiaro et al., 2011).

Paketteja, joita käytetään anti-dsDNA-vasta-aineiden havaitsemiseen ja kvantitoimiseen, ovat:

1. Radioimmunomääritysmenetelmät, jotka on kehitetty Farr-tekniikan (FARR-RIA) mukaisesti (Wold et ai., 1968). Kuitenkin, koska Farr-määrityksessä käytetään radioaktiivista elementtiä, sitä ei käytetä laajasti rutiininomaisessa diagnostisessa laboratoriotyössä (Mahler ja Fritzler, 2007).
2. Aarden et al (1975) kehittämä Crithidia luciliae immunofluoresenssitesti (CLIFT) havaitsee anti-dsDNA:n epäsuoralla immunofluoresenssilla käyttämällä hemoflagellaattia Crithidia luciliae, joka sisältää kinetoplastia, joka sisältää suuren pitoisuuden natiivia (dsDNA) DNA:ta (Zigon et ai., 2011). Immunofluoresenssin lukeminen ja tulkinta on kuitenkin subjektiivista ja riippuu laboratoriohenkilöstön kokemuksesta ja koulutuksesta, mikä saattaa vaikuttaa testituloksiin (Chiaro et al., 2011).
3. Entsyymi-immunosorbenttimääritys (ELISA) on yksinkertainen suorittaa, se ei vaadi korkeasti koulutettuja käyttäjiä ja se voidaan automatisoida. Siksi siitä on tulossa laajimmin käytetty menetelmä (Kumar et al., 2009). Anti-dsDNA ELISA -määritysten lisääntyessä diagnostisten tarkkuuksien vaihtelun mahdollisuus on valtava, koska erilaiset antigeenit, määritysperiaatteet ja raja-arvot ovat töissä (Chiaro et al., 2011). Anti-dsDNA ELISA:t voivat antaa vääriä positiivisia tuloksia johtuen immuunikompleksien sitoutumisesta pre-coat-välituotteisiin (Zigon et al., 2011).

Assiutin yliopistollisen sairaalan kliinisen immunologian laboratoriossa siirryimme manuaalisista ELISA-sarjoista automatisoituun ELISA-alustaan ​​(Alegria-järjestelmä, Orgentec Diagnostika, Saksa), ja äskettäin laboratorioon otettiin käyttöön CLIFT.