CLIFT と ELISA による抗 dsDNA の測定

自己免疫性リウマチ性疾患は、関節や筋肉の症状を伴う自己免疫疾患です。 ただし、他の臓器は、さまざまな条件でさまざまな程度で関与している可能性があります。 それらは、結合組織病（CTD）または膠原病とも呼ばれます。 それらには、全身性エリテマトーデス (SLE)、関節リウマチ (RA)、シェーオグレン症候群 (SjS)、全身性硬化症、多発性筋炎および皮膚筋炎、混合性結合組織病が含まれます (Peakman and Vergani, 2009)。

自己免疫性リウマチ性疾患は、抗核抗体 (ANA) の存在によって特徴付けられます。 これらの抗体は疾患の病因に関与しており、患者の血清中のそれらの存在は、疾患の診断に (臨床症状とともに) 使用される基準の 1 つを構成します (Stevens, 2010)。 ANA には、抽出可能な核抗原に対する自己抗体と、ヒストンおよびデオキシリボ核酸 (DNA) に対する自己抗体が含まれます。

抗 DNA 抗体には、一本鎖および二本鎖 DNA (それぞれ ssDNA および dsDNA) に対する抗体が含まれます。 抗 dsDNA 抗体は、SLE の診断マーカーとして認識されており、特にループス腎炎における SLE 疾患活動性の指標として認識されています (Zigon et al., 2011)。しかし、高い抗 dsDNA レベルは、SLE 患者の 50 ～ 70% にのみ見られます。 . したがって、抗 dsDNA 検査の陰性は SLE を除外するものではありません。また、抗 dsDNA 抗体は、健康な献血者だけでなく、RA や SjS などの他の自己免疫疾患でも検出される可能性があります (Zigon et al., 2011)。 SLE 診断および SLE 疾患活動のモニタリングにおける dsDNA は、この検査機関への要求と市販キットの数の増加につながっています (Chiaro et al., 2011)。

抗 dsDNA 抗体の検出と定量に使用されるキットには、次のものがあります。

1. Farr 法 (FARR-RIA) に従って開発されたラジオイムノアッセイ法 (Wold et al., 1968)。 ただし、Farr アッセイでは放射性元素を使用するため、ルーチンの診断検査作業では広く使用されていません (Mahler and Fritzler, 2007)。
2. Aarden ら (1975) によって開発された Crithidia luciliae 免疫蛍光検査 (CLIFT) は、高濃度のネイティブ (dsDNA) DNA を含むキネトプラストを含む血鞭毛藻 Crithidia luciliae を使用した間接免疫蛍光法によって抗 dsDNA を検出します (Zigon et al., 2011)。 ただし、免疫蛍光の読み取りと解釈は主観的であり、検査結果に影響を与える可能性のある実験室職員の経験と訓練に依存します (Chiaro et al., 2011)。
3. 酵素免疫測定法 (ELISA) は簡単に実行でき、高度な訓練を受けたオペレーターを必要とせず、自動化することができます。 そのため、最も広く使用されている方法になりつつあります (Kumar et al., 2009)。抗 dsDNA ELISA アッセイの数が増えるにつれて、抗原、アッセイ原理、およびカットオフの決定が異なるため、診断精度のばらつきの可能性が非常に大きくなります。採用されています（Chiaro et al。、2011）。 抗 dsDNA ELISA では、プレコート中間体への免疫複合体の結合により、偽陽性の結果が得られる場合があります (Zigon et al., 2011)。

アシュート大学病院の臨床免疫学研究室では、手動 ELISA キットから自動 ELISA プラットフォーム (Alegria システム、Orgentec Diagnostika、ドイツ) に移行し、最近 CLIFT が研究室に導入されました。