Messung von Anti-dsDNA sowohl durch CLIFT als auch durch ELISA

Rheumatische Autoimmunerkrankungen sind Autoimmunerkrankungen, die sich mit Gelenk- und Muskelmanifestationen präsentieren. Andere Organe können jedoch unter verschiedenen Bedingungen in unterschiedlichem Ausmaß beteiligt sein. Sie werden auch Bindegewebserkrankungen (CTDs) oder Kollagenerkrankungen genannt. Dazu gehören systemischer Lupus erythematodes (SLE), rheumatoide Arthritis (RA), Sjiogren-Syndrom (SjS), systemische Sklerose, Polymyositis und Dermatomyositis sowie Mischkollagenosen (Peakman und Vergani, 2009).

Rheumatische Autoimmunerkrankungen sind durch das Vorhandensein von antinukleären Antikörpern (ANA) gekennzeichnet. Diese Antikörper sind an der Pathogenese der Krankheit beteiligt, und ihre Anwesenheit in Patientenseren stellt eines der Kriterien dar, die (zusammen mit den klinischen Manifestationen) für die Krankheitsdiagnose verwendet werden (Stevens, 2010). ANA umfassen Autoantikörper gegen extrahierbare Kernantigene und Autoantikörper gegen Histone und Desoxyribonukleinsäure (DNA).

Anti-DNA-Antikörper umfassen diejenigen gegen einzel- und doppelsträngige DNA (ssDNA bzw. dsDNA). Anti-dsDNA-Antikörper gelten als diagnostische Marker für SLE und als Indikatoren für die Aktivität der SLE-Krankheit, insbesondere bei Lupusnephritis (Zigon et al., 2011). Hohe Anti-dsDNA-Spiegel werden jedoch nur bei 50-70 % der SLE-Patienten gefunden . Negativer Anti-dsDNA-Test schließt also SLE nicht aus. Auch bei anderen Autoimmunerkrankungen wie RA und SjS sowie bei gesunden Blutspendern können Anti-dsDNA-Antikörper nachgewiesen werden (Zigon et al., 2011). Die Bedeutung von Anti -dsDNA in der SLE-Diagnose und bei der Überwachung der SLE-Krankheitsaktivität hat zu einer Zunahme der Anforderungen dieser Testlabore sowie der Anzahl kommerziell erhältlicher Kits geführt (Chiaro et al., 2011).

Zu den Kits, die zum Nachweis und zur Quantifizierung von Anti-dsDNA-Antikörpern verwendet werden, gehören:

1. Radioimmunoassay-Verfahren, entwickelt gemäß der Farr-Technik (FARR-RIA) (Wold et al., 1968). Aufgrund der Verwendung radioaktiver Elemente im Farr-Assay wird es jedoch in der routinemäßigen diagnostischen Laborarbeit nicht häufig verwendet (Mahler und Fritzler, 2007).
2. Der von Aarden et al. (1975) entwickelte Crithidia luciliae-Immunfluoreszenztest (CLIFT) weist Anti-dsDNA durch indirekte Immunfluoreszenz unter Verwendung des Hämoflagellaten Crithidia luciliae nach, der einen Kinetoplasten enthält, der eine hohe Konzentration an nativer (dsDNA)-DNA enthält (Zigon et al., 2011). Das Ablesen und Interpretieren der Immunfluoreszenz ist jedoch subjektiv und hängt von der Erfahrung und Ausbildung des Laborpersonals ab, was die Testergebnisse beeinflussen könnte (Chiaro et al., 2011).
3. Enzyme-linked Immunosorbant Assay (ELISA) ist einfach durchzuführen, erfordert keine hochqualifizierten Bediener und kann automatisiert werden. Daher wird es zur am weitesten verbreiteten Methode (Kumar et al., 2009). Mit der zunehmenden Anzahl von Anti-dsDNA-ELISA-Assays ist das Potenzial für Variabilität in der diagnostischen Genauigkeit enorm, da es unterschiedliche Antigene, Assay-Prinzipien und Cutoff-Bestimmungen gibt beschäftigt (Chiaro et al., 2011). Anti-dsDNA-ELISAs können aufgrund der Bindung von Immunkomplexen an die Precoat-Zwischenprodukte zu falsch positiven Ergebnissen führen (Zigon et al., 2011).

Im Labor für klinische Immunologie des Universitätsklinikums Assiut haben wir von manuellen ELISA-Kits auf eine automatisierte ELISA-Plattform (Alegria-System, Orgentec Diagnostika, Deutschland) umgestellt, und kürzlich wurde CLIFT im Labor eingeführt.