Измерение анти-дцДНК как с помощью CLIFT, так и с помощью ELISA

Аутоиммунные ревматические заболевания представляют собой аутоиммунные заболевания, проявляющиеся суставными и мышечными проявлениями. Однако другие органы могут быть вовлечены в различной степени в различных условиях. Их также называют заболеваниями соединительной ткани (ЗСТ) или заболеваниями коллагена. К ним относятся системная красная волчанка (СКВ), ревматоидный артрит (РА), синдром Шегрена (СС), системный склероз, полимиозит и дерматомиозит и смешанное заболевание соединительной ткани (Peakman and Vergani, 2009).

Аутоиммунные ревматические заболевания характеризуются наличием антинуклеарных антител (АНА). Эти антитела участвуют в патогенезе заболевания, и их присутствие в сыворотке больных составляет один из критериев, используемых (вместе с клиническими проявлениями) для диагностики заболевания (Stevens, 2010). ANA включают аутоантитела к экстрагируемым ядерным антигенам и аутоантитела к гистонам и дезоксирибонуклеиновой кислоте (ДНК).

Антитела к ДНК включают антитела против одноцепочечной и двухцепочечной ДНК (оцДНК и двухцепочечной ДНК соответственно). Антитела к дцДНК признаны диагностическими маркерами СКВ и индикаторами активности заболевания, особенно при волчаночном нефрите (Zigon et al., 2011). Однако высокие уровни антител к дцДНК обнаруживаются только у 50–70% больных СКВ. . Таким образом, отрицательный тест на анти-дцДНК не исключает СКВ. Также антитела против дцДНК могут быть обнаружены при других аутоиммунных заболеваниях, таких как РА и ССД, а также у здоровых доноров крови (Zigon et al., 2011). -дцДНК в диагностике СКВ и мониторинге активности заболевания СКВ привела к увеличению запросов на эту тест-лабораторию, а также к увеличению количества коммерчески доступных наборов (Chiaro et al., 2011).

Наборы, которые используются для обнаружения и количественного определения антител против двухцепочечной ДНК, включают:

1. Методы радиоиммунологического анализа разработаны по методике Фарра (FARR-RIA) (Wold et al., 1968). Однако из-за использования радиоактивного элемента в анализе Фарра он не нашел широкого применения в рутинной диагностической лабораторной работе (Mahler and Fritzler, 2007).
2. Иммунофлуоресцентный тест Crithidia luciliae (CLIFT), разработанный Aarden et al. (1975), выявляет анти-дцДНК с помощью непрямой иммунофлуоресценции с использованием гемофлагеллята Crithidia luciliae, который содержит кинетопласт с высокой концентрацией нативной (дцДНК) ДНК (Zigon et al., 2011). Однако чтение и интерпретация результатов иммунофлуоресценции субъективны и зависят от опыта и подготовки персонала лаборатории, что может повлиять на результаты теста (Chiaro et al., 2011).
3. Иммуноферментный анализ (ИФА) прост в выполнении, не требует высокой квалификации операторов и может быть автоматизирован. Таким образом, он становится наиболее широко используемым методом (Kumar et al., 2009). С увеличением количества анализов ELISA против двухцепочечной ДНК потенциал вариабельности диагностической точности огромен, поскольку различаются антигены, принципы анализа и определения пороговых значений. занятых (Chiaro et al., 2011). ELISA анти-дцДНК может давать ложноположительные результаты из-за связывания иммунных комплексов с промежуточными продуктами перед нанесением покрытия (Zigon et al., 2011).

В Лаборатории клинической иммунологии Университетской больницы Асьюта мы перешли с ручных наборов для ИФА на автоматизированную платформу ИФА (система Alegria, Orgentec Diagnostika, Германия), а недавно в лаборатории был внедрен CLIFT.