Mesure de l'Anti-dsDNA par CLIFT et ELISA

Les maladies rhumatismales auto-immunes sont des maladies auto-immunes se présentant avec des manifestations articulaires et musculaires. Cependant, d'autres organes peuvent être impliqués à des degrés divers dans des conditions différentes. On les appelle aussi maladies du tissu conjonctif (CTD) ou maladies du collagène. Ils comprennent le lupus érythémateux disséminé (LES), la polyarthrite rhumatoïde (PR), le syndrome de Sjiogren (SjS), la sclérodermie systémique, la polymyosite et la dermatomyosite et la maladie mixte du tissu conjonctif (Peakman et Vergani, 2009).

Les maladies rhumatismales auto-immunes sont caractérisées par la présence d'anticorps antinucléaires (ANA). Ces anticorps sont impliqués dans la pathogenèse de la maladie, et leur présence dans le sérum des patients constitue l'un des critères utilisés (avec les manifestations cliniques) pour le diagnostic de la maladie (Stevens, 2010). Les ANA comprennent des auto-anticorps contre les antigènes nucléaires extractibles et des auto-anticorps contre les histones et l'acide désoxyribonucléique (ADN).

Les anticorps anti-ADN comprennent ceux contre l'ADN simple et double brin (ssDNA et dsDNA, respectivement). Les anticorps anti-dsDNA sont reconnus comme marqueurs diagnostiques du LES et comme indicateurs de l'activité de la maladie du LES, en particulier dans la néphrite lupique (Zigon et al., 2011). . Ainsi, un test anti-dsDNA négatif n'exclut pas le LES. De plus, des anticorps anti-dsDNA peuvent être détectés dans d'autres maladies auto-immunes telles que la polyarthrite rhumatoïde et le SjS, ainsi que chez des donneurs de sang sains (Zigon et al., 2011). -dsDNA dans le diagnostic du LES et dans la surveillance de l'activité de la maladie du LES a conduit à une augmentation des demandes de tests en laboratoire ainsi que du nombre de kits disponibles dans le commerce (Chiaro et al., 2011).

Les kits utilisés pour la détection et la quantification des anticorps anti-dsDNA comprennent :

1. Méthodes de dosage radioimmunologique développées selon la technique de Farr (FARR-RIA) (Wold et al., 1968). Cependant, en raison de l'utilisation d'éléments radioactifs dans le test de Farr, il n'est pas largement utilisé dans les travaux de diagnostic de routine en laboratoire (Mahler et Fritzler, 2007).
2. Le test d'immunofluorescence de Crithidia luciliae (CLIFT) développé par Aarden et al (1975) détecte l'anti-dsDNA par immunofluorescence indirecte en utilisant l'hémoflagellé Crithidia luciliae qui contient un kinétoplaste qui contient une forte concentration d'ADN natif (dsDNA) (Zigon et al., 2011). Cependant, la lecture et l'interprétation de l'immunofluorescence sont subjectives et dépendent de l'expérience et de la formation du personnel du laboratoire, ce qui pourrait affecter les résultats du test (Chiaro et al., 2011).
3. Le dosage immuno-enzymatique (ELISA) est simple à réaliser, ne nécessite pas d'opérateurs hautement qualifiés et peut être automatisé. Par conséquent, il devient la méthode la plus largement utilisée (Kumar et al., 2009). Avec le nombre croissant de tests ELISA anti-dsDNA, le potentiel de variabilité dans la précision du diagnostic est énorme car différents antigènes, principes de test et déterminations de seuil sont employés (Chiaro et al., 2011). Les tests ELISA anti-ADNdb peuvent donner des résultats faussement positifs en raison de la liaison des complexes immuns aux intermédiaires de pré-couche (Zigon et al., 2011).

Dans le laboratoire d'immunologie clinique de l'hôpital universitaire d'Assiut, nous sommes passés des kits ELISA manuels à la plate-forme ELISA automatisée (système Alegria, Orgentec Diagnostika, Allemagne) et récemment CLIFT a été introduit dans le laboratoire.