Måling av Anti-dsDNA ved både CLIFT & ELISA

Autoimmune revmatiske sykdommer er autoimmune lidelser presentert med ledd- og muskelmanifestasjoner. Andre organer kan imidlertid være involvert i ulik grad under forskjellige forhold. De kalles også bindevevssykdommer (CTD) eller kollagensykdommer. De inkluderer systemisk lupus erythematosus (SLE), revmatoid artritt (RA), Sjogrens syndrom (SjS), systemisk sklerose, polymyositt og dermatomyositt og blandet bindevevssykdom (Peakman og Vergani, 2009).

Autoimmune revmatiske sykdommer er preget av tilstedeværelse av antinukleære antistoffer (ANA). Disse antistoffene er involvert i sykdomspatogenesen, og deres tilstedeværelse i pasientenes sera utgjør ett av kriteriene som brukes (sammen med de kliniske manifestasjonene) for sykdomsdiagnostikk (Stevens, 2010). ANA inkluderer autoantistoffer mot ekstraherbare nukleære antigener og autoantistoffer mot histoner og deoksyribonukleinsyre (DNA).

Anti-DNA-antistoffer inkluderer de mot enkelt- og dobbelttrådet DNA (henholdsvis ssDNA og dsDNA). Anti-dsDNA-antistoffer er anerkjent som diagnostiske markører for SLE og som indikatorer på SLE-sykdomsaktivitet, spesielt ved lupus nefritis (Zigon et al., 2011). Høye anti-dsDNA-nivåer finnes imidlertid bare hos 50-70 % av SLE-pasientene . Så, negativ anti-dsDNA-test utelukker ikke SLE. Anti-dsDNA-antistoffer kan også påvises i andre autoimmune sykdommer som RA og SjS, så vel som hos friske blodgivere (Zigon et al., 2011). Betydningen av anti -dsDNA i SLE-diagnose og i overvåking av SLE-sykdomsaktivitet har ført til en økning i denne testlaboratorieforespørsler så vel som i antall kommersielt tilgjengelige sett (Chiaro et al., 2011).

Settene som brukes til påvisning og kvantifisering av anti-dsDNA-antistoffer inkluderer:

1. Radioimmunoassay-metoder utviklet i henhold til Farr-teknikk (FARR-RIA) (Wold et al., 1968). På grunn av bruken av radioaktivt element i Farr-analysen, er det imidlertid ikke mye brukt i det rutinemessige diagnostiske laboratoriearbeidet (Mahler og Fritzler, 2007).
2. Crithidia luciliae immunfluorescenstest (CLIFT) utviklet av Aarden et al (1975) oppdager anti-dsDNA ved indirekte immunfluorescens ved bruk av hemoflagellaten Crithidia luciliae som inneholder kinetoplast som inneholder en høy konsentrasjon av naturlig (dsDNA) DNA (Zigon et al.). Lesing og tolkning av immunfluorescensen er imidlertid subjektiv og avhenger av erfaringen og opplæringen til laboratoriepersonellet, noe som kan påvirke testresultatene (Chiaro et al., 2011).
3. Enzym-linked immunosorbant assay (ELISA) er enkel å utføre, krever ikke høyt opplærte operatører og kan automatiseres. Derfor er det i ferd med å bli den mest brukte metoden (Kumar et al., 2009). Med det økende antallet anti-dsDNA ELISA-analyser er potensialet for variasjon i diagnostiske nøyaktigheter enormt ettersom forskjellige antigener, analyseprinsipper og cutoff-bestemmelser er ansatt (Chiaro et al., 2011). Anti-dsDNA ELISAer kan gi falskt positive resultater på grunn av binding av immunkomplekser til pre-coat-mellomproduktene (Zigon et al., 2011).

I Laboratory of Clinical Immunology, Assiut Universitetssykehus, gikk vi fra manuelle ELISA-sett til automatisert ELISA-plattform (Alegria-system, Orgentec Diagnostika, Tyskland) og nylig ble CLIFT introdusert i laboratoriet.