Måling af Anti-dsDNA ved både CLIFT & ELISA

Autoimmune gigtsygdomme er autoimmune lidelser med led- og muskelmanifestationer. Andre organer kan dog være involveret i varierende grad under forskellige forhold. De kaldes også bindevævssygdomme (CTD'er) eller kollagensygdomme. De omfatter systemisk lupus erythematosus (SLE), rheumatoid arthritis (RA), Sjogrens syndrom (SjS), systemisk sklerose, polymyositis og dermatomyositis og blandet bindevævssygdom (Peakman og Vergani, 2009).

Autoimmune reumatiske sygdomme er karakteriseret ved tilstedeværelsen af ​​antinukleære antistoffer (ANA). Disse antistoffer er involveret i sygdomspatogenesen, og deres tilstedeværelse i patienters sera udgør et af de kriterier, der anvendes (sammen med de kliniske manifestationer) til sygdomsdiagnostik (Stevens, 2010). ANA omfatter autoantistoffer mod ekstraherbare nukleare antigener og autoantistoffer mod histoner og deoxyribonukleinsyre (DNA).

Anti-DNA-antistoffer inkluderer dem mod enkelt- og dobbeltstrenget DNA (henholdsvis ssDNA og dsDNA). Anti-dsDNA-antistoffer er anerkendt som diagnostiske markører for SLE og som indikatorer for SLE-sygdomsaktivitet, især ved lupus nefritis (Zigon et al., 2011). Høje anti-dsDNA-niveauer findes dog kun hos 50-70 % af SLE-patienter . Så negativ anti-dsDNA-test udelukker ikke SLE. Anti-dsDNA-antistoffer kan også påvises i andre autoimmune sygdomme såsom RA og SjS, såvel som i raske bloddonorer (Zigon et al., 2011). Betydningen af ​​anti -dsDNA i SLE-diagnose og overvågning af SLE-sygdomsaktivitet har ført til en stigning i denne testlaboratorieanmodning såvel som i antallet af kommercielt tilgængelige kits (Chiaro et al., 2011).

De kits, der bruges til påvisning og kvantificering af anti-dsDNA-antistoffer omfatter:

1. Radioimmunoassay-metoder udviklet ifølge Farr-teknik (FARR-RIA) (Wold et al., 1968). På grund af brugen af ​​radioaktivt grundstof i Farr-assayet er det imidlertid ikke udbredt i det rutinemæssige diagnostiske laboratoriearbejde (Mahler og Fritzler, 2007).
2. Crithidia luciliae immunfluorescenstest (CLIFT) udviklet af Aarden et al (1975) påviser anti-dsDNA ved indirekte immunfluorescens ved hjælp af hæmolagellaten Crithidia luciliae, som indeholder kinetoplast, der indeholder en høj koncentration af naturligt (dsDNA) DNA (Zigon et al.). Imidlertid er læsning og fortolkning af immunfluorescensen subjektiv og afhænger af laboratoriepersonalets erfaring og uddannelse, hvilket kan påvirke testresultaterne (Chiaro et al., 2011).
3. Enzym-linked immunosorbant assay (ELISA) er enkel at udføre, kræver ikke højtuddannede operatører og kan automatiseres. Derfor er det ved at blive den mest udbredte metode (Kumar et al., 2009). Med det stigende antal anti-dsDNA ELISA-assays er potentialet for variabilitet i den diagnostiske nøjagtighed enormt, da forskellige antigener, assayprincipper og cutoff-bestemmelser er ansat (Chiaro et al., 2011). Anti-dsDNA ELISA'er kan give falsk-positive resultater på grund af binding af immunkomplekser til præ-coat-mellemprodukterne (Zigon et al., 2011).

I laboratoriet for klinisk immunologi, Assiut Universitetshospital, skiftede vi fra manuelle ELISA-sæt til automatiseret ELISA-platform (Alegria-system, Orgentec Diagnostika, Tyskland), og for nylig blev CLIFT introduceret i laboratoriet.