Medição de Anti-dsDNA por CLIFT e ELISA

As doenças reumáticas autoimunes são doenças autoimunes que se apresentam com manifestações articulares e musculares. No entanto, outros órgãos podem estar envolvidos em graus variados em diferentes condições. Eles também são chamados de doenças do tecido conjuntivo (DTCs) ou doenças do colágeno. Eles incluem lúpus eritematoso sistêmico (LES), artrite reumatóide (AR), síndrome de Sjiogren (SjS), esclerose sistêmica, polimiosite e dermatomiosite e doença mista do tecido conjuntivo (Peakman e Vergani, 2009).

As doenças reumáticas autoimunes são caracterizadas pela presença de anticorpos antinucleares (FAN). Estes anticorpos estão envolvidos na patogénese da doença, sendo a sua presença no soro dos doentes um dos critérios utilizados (juntamente com as manifestações clínicas) para o diagnóstico da doença (Stevens, 2010). ANA incluem autoanticorpos para antígenos nucleares extraíveis e autoanticorpos para histonas e ácido desoxirribonucléico (DNA).

Os anticorpos anti-DNA incluem aqueles contra DNA de fita simples e dupla (ssDNA e dsDNA, respectivamente). Os anticorpos anti-dsDNA são reconhecidos como marcadores diagnósticos de LES e como indicadores da atividade da doença LES, especialmente na nefrite lúpica (Zigon et al., 2011). No entanto, níveis elevados de anti-dsDNA são encontrados apenas em 50-70% dos pacientes com LES . Portanto, teste anti-dsDNA negativo não exclui LES Além disso, anticorpos anti-dsDNA podem ser detectados em outras doenças autoimunes, como AR e SSj, bem como em doadores de sangue saudáveis ​​(Zigon et al., 2011). -dsDNA no diagnóstico do LES e no monitoramento da atividade da doença do LES levou a um aumento nas solicitações laboratoriais desse teste, bem como no número de kits disponíveis comercialmente (Chiaro et al., 2011).

Os kits usados ​​na detecção e quantificação de anticorpos anti-dsDNA incluem:

1. Métodos de radioimunoensaio desenvolvidos de acordo com a técnica de Farr (FARR-RIA) (Wold et al., 1968). No entanto, devido ao uso de elemento radioativo no ensaio de Farr, ele não é amplamente utilizado na rotina de trabalho de diagnóstico laboratorial (Mahler e Fritzler, 2007).
2. O teste de imunofluorescência de Crithidia luciliae (CLIFT) desenvolvido por Aarden et al (1975) detecta anti-dsDNA por imunofluorescência indireta usando o hemoflagelado Crithidia luciliae que contém cinetoplasto que contém uma alta concentração de DNA nativo (dsDNA) (Zigon et al., 2011). No entanto, a leitura e interpretação da imunofluorescência é subjetiva e depende da experiência e treinamento do pessoal do laboratório, o que pode afetar os resultados do teste (Chiaro et al., 2011).
3. O ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) é simples de realizar, não requer operadores altamente treinados e pode ser automatizado. Portanto, está se tornando o método mais amplamente utilizado (Kumar et al., 2009). Com o aumento do número de ensaios ELISA anti-dsDNA, o potencial de variabilidade nas precisões diagnósticas é enorme, pois diferentes antígenos, princípios de ensaio e determinações de corte são empregados (Chiaro et al., 2011). Anti-dsDNA ELISAs podem dar resultados falso-positivos devido à ligação de imunocomplexos aos intermediários do pré-revestimento (Zigon et al., 2011).

No Laboratório de Imunologia Clínica do Hospital Universitário de Assiut, passamos dos kits ELISA manuais para a plataforma ELISA automatizada (sistema Alegria, Orgentec Diagnostika, Alemanha) e recentemente o CLIFT foi introduzido no laboratório.