Meting van anti-dsDNA door zowel CLIFT als ELISA

Auto-immuunreumatische aandoeningen zijn auto-immuunziekten die worden gepresenteerd met manifestaties van gewrichten en spieren. Andere organen kunnen echter in verschillende mate bij verschillende omstandigheden betrokken zijn. Ze worden ook bindweefselziekten (CTD's) of collageenziekten genoemd. Ze omvatten systemische lupus erythematosus (SLE), reumatoïde artritis (RA), het syndroom van Sjiogren (SjS), systemische sclerose, polymyositis en dermatomyositis en gemengde bindweefselziekte (Peakman en Vergani, 2009).

Auto-immuunreumatische aandoeningen worden gekenmerkt door de aanwezigheid van antinucleaire antilichamen (ANA). Deze antilichamen zijn betrokken bij de pathogenese van de ziekte en hun aanwezigheid in de sera van patiënten vormt een van de criteria die worden gebruikt (samen met de klinische manifestaties) voor de diagnose van de ziekte (Stevens, 2010). ANA omvat auto-antilichamen tegen extraheerbare nucleaire antigenen en auto-antilichamen tegen histonen en deoxyribonucleïnezuur (DNA).

Anti-DNA-antilichamen omvatten die tegen enkel- en dubbelstrengs DNA (respectievelijk ssDNA en dsDNA). Anti-dsDNA-antilichamen worden herkend als diagnostische markers van SLE en als indicatoren van SLE-ziekteactiviteit, vooral bij lupus nefritis (Zigon et al., 2011). Hoge anti-dsDNA-niveaus worden echter alleen gevonden bij 50-70% van de SLE-patiënten . Negatieve anti-dsDNA-test sluit SLE dus niet uit. Ook kunnen anti-dsDNA-antilichamen worden aangetoond bij andere auto-immuunziekten zoals RA en SjS, maar ook bij gezonde bloeddonoren (Zigon et al., 2011). -dsDNA bij de diagnose van SLE en bij het monitoren van de ziekteactiviteit van SLE heeft geleid tot een toename van de aanvragen van dit testlaboratorium en van het aantal in de handel verkrijgbare kits (Chiaro et al., 2011).

De kits die worden gebruikt bij de detectie en kwantificering van anti-dsDNA-antilichamen omvatten:

1. Radioimmunoassay-methoden ontwikkeld volgens de Farr-techniek (FARR-RIA) (Wold et al., 1968). Vanwege het gebruik van radioactieve elementen in de Farr-test wordt het echter niet veel gebruikt in routinematig diagnostisch laboratoriumwerk (Mahler en Fritzler, 2007).
2. Crithidia luciliae immunofluorescentietest (CLIFT) ontwikkeld door Aarden et al (1975) detecteert anti-dsDNA door indirecte immunofluorescentie met behulp van de hemoflagellate Crithidia luciliae die kinetoplast bevat die een hoge concentratie aan natief (dsDNA) DNA bevat (Zigon et al., 2011). Het lezen en interpreteren van de immunofluorescentie is echter subjectief en hangt af van de ervaring en training van het laboratoriumpersoneel, wat de testresultaten kan beïnvloeden (Chiaro et al., 2011).
3. Enzyme-linked immunosorbant assay (ELISA) is eenvoudig uit te voeren, vereist geen hoogopgeleide operators en kan worden geautomatiseerd. Daarom is het de meest gebruikte methode aan het worden (Kumar et al., 2009). Met het toenemende aantal anti-dsDNA ELISA-assays is het potentieel voor variabiliteit in de diagnostische nauwkeurigheid enorm, aangezien verschillende antigenen, assayprincipes en cutoff-bepalingen in dienst (Chiaro et al., 2011). Anti-dsDNA ELISA's kunnen vals-positieve resultaten geven door binding van immuuncomplexen aan de pre-coat tussenproducten (Zigon et al., 2011).

In het Laboratorium voor Klinische Immunologie, Universitair Ziekenhuis Assiut, zijn we overgestapt van handmatige ELISA-kits naar een geautomatiseerd ELISA-platform (Alegria-systeem, Orgentec Diagnostika, Duitsland) en onlangs werd CLIFT geïntroduceerd in het laboratorium.