Medición de Anti-dsDNA por CLIFT y ELISA

Las enfermedades reumáticas autoinmunes son trastornos autoinmunes que se presentan con manifestaciones articulares y musculares. Sin embargo, otros órganos pueden estar involucrados en mayor o menor grado en diferentes condiciones. También se les llama enfermedades del tejido conectivo (CTD, por sus siglas en inglés) o enfermedades del colágeno. Incluyen lupus eritematoso sistémico (LES), artritis reumatoide (AR), síndrome de Sjiogren (SjS), esclerosis sistémica, polimiositis y dermatomiositis y enfermedad mixta del tejido conectivo (Peakman y Vergani, 2009).

Las enfermedades reumáticas autoinmunes se caracterizan por la presencia de anticuerpos antinucleares (ANA). Estos anticuerpos están involucrados en la patogenia de la enfermedad, y su presencia en el suero de los pacientes constituye uno de los criterios utilizados (junto con las manifestaciones clínicas) para el diagnóstico de la enfermedad (Stevens, 2010). Los ANA incluyen autoanticuerpos contra antígenos nucleares extraíbles y autoanticuerpos contra histonas y ácido desoxirribonucleico (ADN).

Los anticuerpos anti-ADN incluyen aquellos contra el ADN monocatenario y bicatenario (ssDNA y dsDNA, respectivamente). Los anticuerpos anti-dsDNA se reconocen como marcadores de diagnóstico de LES y como indicadores de la actividad de la enfermedad de LES, especialmente en la nefritis lúpica (Zigon et al., 2011). Sin embargo, los niveles altos de anti-dsDNA se encuentran solo en el 50-70% de los pacientes con LES. . Por lo tanto, una prueba anti-dsDNA negativa no excluye el LES. Además, los anticuerpos anti-dsDNA se pueden detectar en otras enfermedades autoinmunes como la AR y el SjS, así como en donantes de sangre sanos (Zigon et al., 2011). -dsDNA en el diagnóstico de LES y en el seguimiento de la actividad de la enfermedad de LES ha llevado a un aumento en las solicitudes de laboratorio de esta prueba, así como en la cantidad de kits disponibles comercialmente (Chiaro et al., 2011).

Los kits que se utilizan en la detección y cuantificación de anticuerpos anti-dsDNA incluyen:

1. Métodos de radioinmunoensayo desarrollados según la técnica de Farr (FARR-RIA) (Wold et al., 1968). Sin embargo, debido al uso de elementos radiactivos en el ensayo de Farr, no se usa mucho en el trabajo de laboratorio de diagnóstico de rutina (Mahler y Fritzler, 2007).
2. La prueba de inmunofluorescencia de Crithidia luciliae (CLIFT) desarrollada por Aarden et al (1975) detecta anti-dsDNA por inmunofluorescencia indirecta utilizando el hemoflagelado Crithidia luciliae que contiene cinetoplasto que contiene una alta concentración de ADN nativo (dsDNA) (Zigon et al., 2011). Sin embargo, la lectura e interpretación de la inmunofluorescencia es subjetiva y depende de la experiencia y capacitación del personal del laboratorio, lo que podría afectar los resultados de la prueba (Chiaro et al., 2011).
3. El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) es fácil de realizar, no requiere operadores altamente capacitados y puede automatizarse. Por lo tanto, se está convirtiendo en el método más utilizado (Kumar et al., 2009). Con el número creciente de ensayos ELISA anti-dsDNA, el potencial de variabilidad en las precisiones diagnósticas es enorme, ya que se utilizan diferentes antígenos, principios de ensayo y determinaciones de corte. empleados (Chiaro et al., 2011). Los ELISA anti-dsDNA pueden dar resultados falsos positivos debido a la unión de los inmunocomplejos a los intermedios de precapa (Zigon et al., 2011).

En el Laboratorio de Inmunología Clínica del Hospital Universitario de Assiut, pasamos de los kits de ELISA manuales a la plataforma de ELISA automatizada (sistema Alegria, Orgentec Diagnostika, Alemania) y recientemente se introdujo CLIFT en el laboratorio.