Il rilevamento delle cellule tumorali circolanti (CTC) nei pazienti con cancro al fegato sottoposti a criochirurgia combinata con il trattamento DC-CIK

1 giorno prima e 2 giorni dopo la criochirurgia con o senza trattamento DC-CIK, sono stati prelevati circa 17 ml di sangue di acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) mediante puntura venosa da pazienti con cancro al fegato e volontari sani. Il sangue dei volontari sani sarà utilizzato per valutare la sensibilità e la specificità e come cellule di controllo negative. Per evitare la contaminazione con le cellule della pelle, verranno scartati 2 ml di sangue prima che vengano prelevati i campioni dello studio. In breve, le cellule mononucleate verranno separate dal sangue su Ficoll-Paque per 20 minuti con 1800 g a 4 ℃. Le cellule di interfaccia saranno rimosse e lavate, ei globuli rossi (RBC) saranno rimossi usando un tampone di lisi seguito da un lavaggio ripetuto. Le cellule mononucleate saranno contate e aliquotate per RT-PCR e citometria a flusso multiparametro sulla base di almeno 2-3×106 cellule per ciascuna metodologia. Il pellet cellulare sarà risospeso in soluzione salina tamponata con fosfato per citometria a flusso multiparametro e in reagente Trizol per RT-PCR. Obiettivo: l'identificazione delle CTC può portare a una migliore diagnosi e prognosi e potrebbe aiutare a scegliere una terapia adeguata.