Pretrattamento con ormone della crescita in Poseidon di tipo IV sottoposto a ICSI utilizzando il protocollo di induzione minima: uno studio controllato randomizzato (Growth hormone)

I pazienti vengono reclutati dai partecipanti della clinica per l'infertilità e dell'unità di fecondazione in vitro nell'ospedale di maternità dell'università di Ain Shams che sono idonei per la sperimentazione.

La procedura sarà curata dal Prof. Dott. Mostafa Fouad. e il docente Dr Ebtihal ElTaieb

* Adeguata anamnesi, esame e indagini per:

• escludere altre cause di infertilità.
• Anamnesi mestruale: per la valutazione di oligo o anovualizzazione.
• Storia medica: .
• Storia passata: precedenti tentativi di trattamento dell'infertilità o sindrome da iperstimolazione ovarica.
• Anamnesi ostetrica: per aborti ricorrenti.
• Esame clinico, tra cui:
• Misurazione della pressione arteriosa
• Valutazione dell'irsutismo tramite punteggio Ferriman-Gallwey modificato
• Valutazione dell'alopecia e dell'acne.
• Valutazione del profilo ormonale: FSH sierico basale, LH, E2, progesterone, AMH, testosterone sierico totale, SHBG (per il calcolo del FAI), DHEA, DHEAS, TSH, prolattina e cortisolo libero nelle 24 ore (per escludere la sindrome di Cushing).
• Analisi del liquido seminale: per escludere cause maschili di infertilità come teratospermia o azospermia.
• Ecografia transvaginale: dalla stessa esperta ecografista ginecologica utilizzando un ecografo Voluson E6 Expert (General Electric®, Fairfield, CT, USA) per criteri U/S di PCOS, AFC ed esclusione di eventuali patologie uterine o pelviche.
• Isterosalpingografia (HSG): per escludere eventuali anomalie uterine, tubariche o peritoneali.

I pazienti che soddisfano i criteri di inclusione ed esclusione saranno randomizzati in entrambi i gruppi di studio. Verrà utilizzato un elenco generato dal computer tramite il software MedCalc ®, versione 13.2.2, assegnando il numero di ciascun partecipante a entrambi i gruppi di studio. L'assegnazione avverrà mediante buste numerate in sequenza, altrimenti identiche, sigillate (SNOSE), ciascuna contenente un foglio di 2 pollici per 2 pollici con un codice scritto che designa il gruppo assegnato. Questi documenti saranno inseriti in un foglio piegato di alluminio inserito all'interno della busta. Ci si sforzerà di assicurare l'assenza di qualsiasi differenza rilevabile in termini di dimensioni o peso tra le buste di intervento e quelle di controllo. Le buste saranno scelte opache e foderate internamente con carta carbone. Le buste verranno aperte in sequenza solo dopo aver scritto le informazioni di tracciamento del soggetto sulla busta in modo che la carta carbone serva da traccia di controllo.

Dopo l'arruolamento ogni paziente preleva a caso una busta riportante un numero, in modo che le pazienti non siano a conoscenza dell'assegnazione (tecnica single blind), quindi verrà applicato il protocollo di stimolazione ovarica controllata secondo la lettera allegata (A o B) guidata dal computer tabella di randomizzazione basata.

I pazienti sono stati assegnati in modo casuale a uno dei due gruppi paralleli:

• Gruppo A: protocollo di stimolazione lieve + adiuvante dell'ormone della crescita
• Gruppo B: protocollo di stimolazione lieve

Interventi dello studio: i pazienti di entrambi i gruppi hanno ricevuto un protocollo di stimolazione lieve:

Il protocollo di iperstimolazione ovarica controllata si svolgerà secondo un protocollo flessibile GnRH antagonista + clomofina citrato.

La stimolazione ovarica inizierà con una dose giornaliera fissa di 100 mg di clomifene citrato e l'FSH ricombinante (Gonal-F®) inizierà il giorno 2 del ciclo mestruale a una dose di 150 UI da aggiustare successivamente in modo graduale ogni 2-4 giorni in base alla risposta ovarica (Kolibianakis et al., 2011).

. Per quelli nel gruppo GH, verranno somministrati 8 UI di GH umano ricombinante a partire dal giorno 14 del ciclo precedente fino alla somministrazione di HCG per l'attivazione dell'ovulazione, mentre quelli nel gruppo di controllo riceveranno lo stesso protocollo di stimolazione senza il trattamento adiuvante con GH.

• Il follow-up TVU/S verrà eseguito a giorni alterni a partire dal giorno 6 di stimolazione.
• Cetrotide® 0,25 mg verrà avviato quando viene soddisfatto almeno uno dei seguenti criteri: LH >10 IU/L, presenza di un follicolo con diametro medio >12 mm e livello sierico di E2 >150 pg/mL e continuato fino alla somministrazione di HCG .
• Quando il follicolo principale raggiunge i 16 mm, la TV U/S verrà eseguita giornalmente fino a quando il follicolo più grande raggiunge un diametro di> 18 mm. La durata massima della stimolazione con rFSH non potrà superare il giorno 16.
• PRELIEVO DI OOCITI, FERTILIZZAZIONE E TRASFERIMENTO DI EMBRIONI
• Il prelievo ovarico verrà effettuato 36 ore dopo l'iniezione di HCG, il trasduttore verrà collegato al sistema ecografico. Verrà controllata la direzione del raggio guida. L'ago di perforazione sarà collegato a un apparato di aspirazione fissato mediante un anello di fissaggio alle estremità anteriore e posteriore del trasduttore vaginale, definendo così la direzione della perforazione corrispondente al raggio guida sull'immagine ecografica. Gli ovociti saranno aspirati utilizzando la tecnica di aspirazione standard utilizzando il catetere Wallace® 101 (Smiths medical®, Minnesota, USA) utilizzando una pressione di aspirazione di 90-100 mmHg utilizzando la tecnica del flushing.

Per massimizzare il numero di ovociti recuperati, l'aspirazione follicolare seguita da un singolo lavaggio da 2 ml utilizzando terreni di coltura embrionale. Dopo l'aspirazione iniziale, i follicoli sono stati lavati e aspirati tre volte ciascuno con 2 mL di mezzo di lavaggio.

• L'iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi sarà eseguita su ovociti in metafase II utilizzando la tecnica della penetrazione diretta. I risultati della fecondazione saranno valutati da 16 a 19 ore dopo l'ICSI. La fecondazione sarà considerata normale dalla presenza di due pronuclei. La degenerazione degli ovociti è stata identificata dal collasso del contenuto citoplasmatico e dalla separazione dalla zona. La mancata fecondazione sarà definita dall'assenza dei pronuclei.
• Il trasferimento dell'embrione verrà eseguito il giorno 3 dell'ICSI, utilizzando la guida ecografica nella parte mediocorporea della cavità uterina utilizzando un catetere di trasferimento morbido Wallace® (Smiths medical®, Minnesota, USA).
• La fase luteale sarà supportata dal progesterone naturale sotto forma di supposte vaginali 400 mg due volte al giorno a partire dal giorno del prelievo degli ovociti fino al test di gravidanza.