Profilo fenotipico e meccanismo molecolare di resistenza negli isolati di Enterobacterales e Pseudomonas aeruginosa produttori di carbapenemasi provenienti da ospedali brasiliani: implicazioni per l'introduzione di IMIPENEM-RELEBACTAM

Valutazione prospettica di 150 (centocinquanta) Enterobacterales e 100 (cento) Pseudomonas aeruginosa isolati da 12 ospedali della città di Rio de Janeiro. Verrà selezionato un numero sequenziale di isolati per unità considerando i criteri di inclusione della resistenza ai carbapenemi, verrà valutato un solo isolato per paziente. L'isolato sarà identificato in genere e specie mediante la metodologia di spettrometria di massa VITEK® MS MALDI-TOF (bioMérieux - France) da isolati del flusso sanguigno e campioni respiratori.

La rilevazione della produzione di carbapenemasi mediante metodo colorimetrico rapido sarà eseguita utilizzando il test RAPIDEC® Carba NP (bioMérieux - Francia). Gli isolati che presentano positività al test della carbapenemasi con metodo colorimetrico saranno sottoposti al test PCR di caratterizzazione genica della beta-lattamasi e della carbapenemasi a spettro esteso per i seguenti geni: blaSHV, blaCTX-M, KPC, NDM, VIM, IMP, SME, NMC/ IMI, GES, GIM, SMP, IMP, OXA 23, OXA 24, OXA 48, OXA 51 e OXA 58.

Dopo la caratterizzazione dei geni produttori di carbapenemasi, isolati in possesso del gene carbapenemasi di Classe A e D, sarà valutato il profilo di suscettibilità di imipenem-relebactam mediante BMD (Broth Microdilution) per determinare la concentrazione minima inibente e i rispettivi criteri di sensibilità e resistenza utilizzando recenti breakpoint CLSI MIC - M100, 29th Ed (Clinical and Laboratory Standards Institute - 2020) e EUCAST Versione 10.0 (Comitato europeo sui test di sensibilità antimicrobica V 10.0). Gli isolati che mostrano risultati positivi per la produzione di carbapenemasi, ma con risultati PCR negativi per i geni sopra descritti, saranno ulteriormente studiati per la probabile presenza di altri geni produttori di carbapenemasi o altri meccanismi di resistenza agli antibiotici carbapenemici. Per lo studio e la valutazione della diversità genetica degli isolati verrà utilizzata la metodologia Multilocus Sequence Typing (MLST). Gli isolati che mostrano resistenza simultanea a carbapenemi, polimixina B e fluorochinoloni saranno sottoposti a sequenziamento di nuova generazione (NGS) per un'ulteriore valutazione di altri geni o meccanismi associati alla resistenza agli antibiotici oa marcatori di virulenza.