Phänotypisches Profil und molekularer Resistenzmechanismus in Carbapenemase-produzierenden Enterobacterales- und Pseudomonas Aeruginosa-Isolaten aus brasilianischen Krankenhäusern: Auswirkungen auf die Einführung von IMIPENEM-RELEBACTAM

Prospektive Auswertung von 150 (einhundertfünfzig) Enterobacterales- und 100 (einhundert) Pseudomonas aeruginosa-Isolaten aus 12 Krankenhäusern in der Stadt Rio de Janeiro. Unter Berücksichtigung der Einschlusskriterien der Resistenz gegen Carbapenem wird eine fortlaufende Anzahl von Isolaten pro Einheit ausgewählt. Es wird nur ein Isolat pro Patient bewertet. Das Isolat wird anhand der Massenspektrometriemethode VITEK® MS MALDI-TOF (bioMérieux – Frankreich) anhand von Blutstromisolaten und Atemwegsproben nach Gattung und Art identifiziert.

Der Nachweis der Carbapenemase-Produktion durch eine schnelle kolorimetrische Methode wird mit dem RAPIDEC® Carba NP-Test (bioMérieux – Frankreich) durchgeführt. Die Isolate, die im kolorimetrischen Verfahren einen positiven Carbapenemase-Test aufweisen, werden dem PCR-Extended-Spectrum-Beta-Lactamase- und Carbapenemase-Gencharakterisierungstest für die folgenden Gene unterzogen: blaSHV, blaCTX-M, KPC, NDM, VIM, IMP, SME, NMC / IMI, GES, GIM, SMP, IMP, OXA 23, OXA 24, OXA 48, OXA 51 und OXA 58.

Nach der Charakterisierung der Carbapenemase-produzierenden Gene, Isolaten, die das Carbapenemase-Gen der Klassen A und D besitzen, wird das Anfälligkeitsprofil von Imipenem-Relebactam unter Verwendung von BMD (Broth Microdilution) bewertet, um die minimale Hemmkonzentration und ihre jeweiligen Empfindlichkeits- und Resistenzkriterien zu bestimmen aktuelle CLSI-MIC-Breakpoints – M100, 29. Ausgabe (Clinical and Laboratory Standards Institute – 2020) und EUCAST Version 10.0 (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing V 10.0). Isolate, die positive Ergebnisse für die Carbapenemase-Produktion, aber negative PCR-Ergebnisse für die oben beschriebenen Gene aufweisen, werden weiter auf das wahrscheinliche Vorhandensein anderer Carbapenemase-produzierender Gene oder anderer Mechanismen der Resistenz gegen Carbapenem-Antibiotika untersucht. Für die Untersuchung und Bewertung der genetischen Vielfalt der Isolate wird die Multilocus Sequence Typing (MLST)-Methodik verwendet. Isolate, die gleichzeitig eine Resistenz gegen Carbapeneme, Polymyxin B und Fluorchinolone aufweisen, werden einem Next-Generation-Sequencing (NGS) unterzogen, um weitere Gene oder Mechanismen zu untersuchen, die mit Antibiotikaresistenz- oder Virulenzmarkern verbunden sind.