Perfil fenotípico y mecanismo molecular de resistencia en aislamientos de Enterobacterales y Pseudomonas aeruginosa productoras de carbapenemasas de hospitales brasileños: implicaciones para la introducción de IMIPENEM-RELEBACTAM

Evaluación prospectiva de 150 (ciento cincuenta) Enterobacterales y 100 (cien) Pseudomonas aeruginosa aislados de 12 hospitales de la ciudad de Río de Janeiro. Se seleccionará un número secuencial de aislamientos por unidad considerando los criterios de inclusión de resistencia a carbapenémicos, se evaluará un solo aislamiento por paciente. El aislado se identificará en género y especie mediante la metodología de espectrometría de masas VITEK® MS MALDI-TOF (bioMérieux - Francia) a partir de aislados del torrente sanguíneo y muestras respiratorias.

La detección de producción de carbapenemasas por método colorimétrico rápido se realizará mediante el test RAPIDEC® Carba NP (bioMérieux - Francia). Los aislados que presenten prueba de carbapenemasas positivas por método colorimétrico serán sometidos a la prueba PCR de caracterización génica de betalactamasas y carbapenemasas de espectro extendido para los siguientes genes: blaSHV, blaCTX-M, KPC, NDM, VIM, IMP, SME, NMC/ IMI, GES, GIM, SMP, IMP, OXA 23, OXA 24, OXA 48, OXA 51 y OXA 58.

Luego de la caracterización de los genes productores de carbapenemasas, aislados que poseen el gen de carbapenemasas Clase A y D, se evaluará el perfil de susceptibilidad de imipenem-relebactam mediante BMD (Broth Microdilution) para determinar la concentración inhibitoria mínima y sus respectivos criterios de sensibilidad y resistencia mediante Puntos de corte CLSI MIC recientes - M100, 29.ª edición (Instituto de Normas Clínicas y de Laboratorio - 2020) y EUCAST Versión 10.0 (Comité Europeo de Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana V 10.0). Los aislados que muestren resultados positivos para la producción de carbapenemasas, pero con resultados de PCR negativos para los genes descritos anteriormente, se investigarán más a fondo para determinar la posible presencia de otros genes productores de carbapenemasas u otros mecanismos de resistencia a los antibióticos carbapenémicos. Para el estudio y evaluación de la diversidad genética de los aislados se utilizará la metodología Multilocus Sequence Typing (MLST). Los aislados que muestren resistencia simultánea a los carbapenémicos, la polimixina B y las fluoroquinolonas se someterán a secuenciación de próxima generación (NGS) para una evaluación adicional de otros genes o mecanismos asociados con la resistencia a los antibióticos o los marcadores de virulencia.