Livelli di chemerina, fetuina-A, IL-34 e IL-13 nei pazienti affetti da parodontite diabetica

Il diabete di tipo 2 (T2DM) aumenta di tre volte il rischio di malattia parodontale grave, rendendolo un fattore di rischio per la progressione della parodontite. La parodontite funziona come focolaio di infezione locale e fonte di infiammazione cronica di basso grado. La terapia parodontale mira principalmente alla componente microbica della malattia mediante lo sbrigliamento meccanico delle superfici dei denti.

La chemerina, un'adipochina specifica del tessuto adiposo, influenza la via del glucosio, il metabolismo dei lipidi, i livelli di infiammazione, la chemiotassi delle cellule dendritiche immature e l'integrazione dell'attività macrofago-fagocitaria nelle proteine ​​della matrice extracellulare e nelle molecole di adesione. La fetuina-A impedisce il recettore dell'insulina tirosina chinasi, quindi associato alla resistenza all'insulina, alla sindrome metabolica e ad un aumento del rischio di diabete mellito di tipo 2. L'interleuchina (IL)-34 modula la differenziazione, la proliferazione e la sopravvivenza delle cellule mieloidi. A seconda del microambiente, IL-34 può trasformare i monociti circolanti in specifici macrofagi non residenti con un fenotipo M1 "proinfiammatorio" o un fenotipo M2 "antiinfiammatorio". IL-13 inibisce il rilascio di citochine infiammatorie, come IL-1, IL-6 e TNF-α, da monociti e macrofagi.

Questo studio è il primo studio clinico controllato che esamina i livelli di chemerina, fetuina-A, IL-34 e IL-13 nella saliva e nel siero nella parodontite con e senza T2DM (T2DM ben controllato e scarsamente controllato) e valuta il situazione prima e dopo il trattamento. La prima ipotesi di questo studio è che nei gruppi affetti da parodontite, i livelli di chemerina e IL-34 saranno elevati nella saliva e nel siero, e i livelli di IL-13 e fetuina-A saranno bassi in contrasto con i gruppi non affetti da parodontite. La seconda ipotesi di questo studio è che nei gruppi con T2DM, i livelli di fetuina-A e chemerina saranno elevati rispetto ai partecipanti senza T2DM. La terza ipotesi di questo studio, dopo il trattamento parodontale, i livelli di chemeina e IL-34 diminuiranno e IL-13 e fetuina-A aumenteranno nella saliva e nel siero. Sulla base di queste ipotesi, lo studio si propone di confrontare i livelli di chemerina, fetuina-A, IL-34 e IL-13 nella saliva e nel siero di controlli non parodontali (NP), NP con T2DM (DM.NP), parodontite (P ), P con soggetti con T2DM ben controllati (WDM.P) e P con soggetti con T2DM scarsamente controllati (PDM.P) e per valutare l'effetto del trattamento parodontale.

In questo studio sono stati inclusi un totale di 110 partecipanti, 22 NP, 22 DM.NP, 22 P, 22 WDM.P e 22 PDM.P. L'esame clinico parodontale della bocca intera comprendeva la misurazione della profondità di sondaggio (PPD), del livello di attacco clinico (CAL), della presenza di sanguinamento al sondaggio (BOP), dell'indice gengivale (GI) e dell'indice di placca (PI) in 6 siti per dente, ad eccezione di i terzi molari. La presenza e il tipo di perdita ossea alveolare sono stati valutati sulla radiografia panoramica digitale di ciascun partecipante, integrata se necessario con radiografie periapicali.

Lo stato parodontale di ciascun paziente è stato valutato da un singolo parodontologo calibrato con una sonda manuale. La diagnosi di parodontite o salute parodontale è stata determinata secondo il Workshop mondiale 2017 sulla classificazione delle malattie e condizioni parodontali e perimplantari. Gli individui NP (sani e con gengivite) (n=22) nel gruppo di controllo non avevano siti con PD >3 mm e CAL >2 mm e nessuna evidenza radiografica di perdita di osso alveolare. Anche il gruppo NP non presentava storia di parodontite. I pazienti con parodontite di stadio III/IV avevano un minimo di tre denti a parte i primi molari e gli incisivi che mostravano CAL ≥ 5 mm e PD ≥ 6 mm. Perdita ossea radiografica che si estende dalla corona al terzo medio o oltre. La percentuale di perdita ossea/età era superiore a 1,0.

La diagnosi dei pazienti con T2DM si basava sui criteri forniti dall'Organizzazione Mondiale della Sanità. Sono stati inclusi pazienti diabetici sia ben controllati che scarsamente controllati, con diagnosi di T2DM almeno un anno fa e trattati con antidiabetici orali e/o insulina, senza complicanze diabetiche maggiori (retinopatia, nefropatia, neuropatia).

Trattamento

I pazienti affetti da parodontite reclutati hanno ricevuto il ridimensionamento convenzionale del quadrante e la pianificazione radicolare (SRP) in anestesia locale per un totale di 4 sessioni in quattro settimane. L'SRP è stato eseguito dallo stesso parodontologo utilizzando inserti ad ultrasuoni e curette parodontali manuali. Le rivalutazioni sono state eseguite a 1 e 3 mesi dopo il completamento dell'SRP. Nessun intervento parodontale è stato effettuato nei controlli senza parodontite.

Campionamento di saliva e siero Un totale di 5 ml di saliva intera non stimolata è stata raccolta con il metodo della bava passiva tra le 9:00 e le 10:00. Ai partecipanti è stato consigliato di evitare il consumo di cibo per tre ore prima della raccolta del campione. I partecipanti erano seduti in posizione verticale e la saliva veniva raccolta nell'arco di 5 minuti con le istruzioni di raccogliere la saliva nel pavimento della bocca e sbavarla passivamente in un bicchiere di vetro sterile. Quindi, i campioni di saliva vengono immediatamente trasferiti in una provetta di polipropilene da 2 ml e conservati a -80°C. Un totale di 10,5 ml di sangue sono stati raccolti dalla fossa antecubitale mediante il metodo della venipuntura. Il siero è stato isolato dal sangue mediante centrifugazione a 4000 giri al minuto per 12 minuti, seguito dal suo rapido trasferimento in una provetta sterile di polipropilene e conservazione a -80°C.

Analisi immunologiche dei biomarcatori I campioni di saliva e siero sono stati scongelati su ghiaccio. I campioni di saliva sono stati centrifugati a 5000 giri al minuto per 15 minuti a temperatura ambiente e i surnatanti sono stati immediatamente utilizzati per i test. Utilizzando kit commerciali, campioni di siero e saliva di chemerina, fetuina-A, IL-34 e IL-13 sono stati misurati mediante ELISA.

Analisi statistica Il test di normalità di Shapiro Wilk è stato applicato per determinare la distribuzione dei dati clinici e biochimici. Sono stati utilizzati test non parametrici perché le variabili non seguivano una distribuzione normale. Le distribuzioni di genere tra i gruppi sono state analizzate utilizzando il test Chi-Square. Confronti multipli dei parametri clinici e biochimici sono stati analizzati utilizzando il Kruskal-Wallis; in caso di significatività, è stato applicato il test U di Mann-Whitney aggiustato per Bonferroni per i confronti appaiati. I confronti intragruppo sono stati eseguiti utilizzando il test dei ranghi con segno di Wilcoxon. Le correlazioni tra i parametri clinici e biochimici al basale sono state eseguite utilizzando l'analisi di correlazione dei ranghi di Spearman. La regressione logistica multinomiale è stata utilizzata per determinare le associazioni tra gruppi di parodontiti e parametri biochimici. Il livello di significatività è stato fissato a P <0,05.