台湾におけるミトコンドリア nt3243 A>G 変異

患者と臨床的特徴。 この研究は、台北の三次医療センターである国立台湾大学病院で実施されます。 国立台湾大学病院の遺伝医学部門は紹介を受け、台湾全土の病院の遺伝子検査を行っています。 文書化されたミトコンドリア DNA nt3243 点変異を持つすべての患者のカルテを確認します。 人口統計データ、発症年齢、臨床的特徴（脳卒中、発作様エピソード、乳酸値、真性糖尿病、聴覚障害、ミオパシー、心電図異常、慢性進行性外眼筋麻痺を含む）、関連する家族歴、治療、および転帰記録されます。 完全な MELAS 表現型は、発作、脳卒中、またはその両方の局所的な中枢神経系イベントの存在として定義されました。

遺伝子解析。 Puregene DNA精製キット（Gentra Systems、ミネアポリス、ミネソタ、米国）を使用して、末梢血白血球からゲノムDNAを抽出しました。 ミトコンドリア DNA nt3243 点突然変異のポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) は、左プライマー 5'-cggagtaatccaggtcggtt-3' および右プライマー 5'-ggaattgaacctctgactgt-3' によって実行されました。 ミトコンドリア DNA nt3243 A>G 変異の存在は、Hae III 制限酵素消化後に検出されました。

ミトコンドリア nt3243A>G 変異のヘテロプラスミーは、以前に報告された [19] ように、リアルタイム増幅不応性変異システム定量的 PCR (ARMS-qPCR) アッセイによって検出されました。 簡単に説明すると、野生型および変異体ターゲット プライマー (それぞれ 500 nM) を、1X KAPA SYBR® FAST ABI Prism® qPCR マスター ミックス (KAPABIOSYSTEMS、カタログ番号 KK4603) および 4 ng のゲノムを含む 10 ml の PCR 反応液に加えました。 DNA。 リアルタイム PCR 条件は、50°C で 2 分、95°C で 20 秒間、続いて 95°C で 15 秒間の変性と 62°C での 30 秒間のアニーリング/伸長の 40 サイクルでした。 PCR産物のクロスポイントおよび濃度蛍光シグナル強度のデータを記録し、ABI StepOnePlusTMリアルタイムPCRシステム（Applied Biosystems）およびStepOneソフトウェアv2.1（Applied Biosystems）によって分析しました。 線形指数期内の閾値サイクル ( CT 値) を使用して、標準曲線を作成し、DNA テンプレートの元のコピー数を測定しました。 変異ｍｔＤＮＡのパーセンテージは、以下の式を使用して計算した：ヘテロプラスミー％＝１／（１＋１／２△ＣＴ）。

統計分析。 SPSS 17.0 (SPSS、シカゴ、イリノイ州、米国) を統計分析に使用しました。 結果は、適切な場合、中央値と範囲、または平均 ± 1 SD として与えられました。 スチューデントの t 検定を使用して、対応のないグループを比較しました。 フィッシャーの正確確率検定を使用して、2 つのカテゴリ変数間の関連性を判断しました。 Cox 回帰モデルを使用して、考えられる予後因子を分析しました。 結果でのグループ間の差異は、カプラン・マイヤー推定とログランク検定によって比較されました。 ピアソンの相関を使用して、ヘテロプラスミーと診断年齢を関連付けました。 p 値 < 0.05 は、統計的に有意であると見なされました。