Kinetikk av nasale cytokinresponser på mekanisk stimulering

Allergisk rhinitt (AR) og allergisk astma er en vanlig manifestasjon av type I-allergi, en IgE-mediert overfølsomhetssykdom som anslås å påvirke så mye som 40 % av den globale befolkningen. IgE produseres av B-celler og binder seg til overflaten av mastceller og basofiler via dens høyaffinitets-Fce-reseptor I (FceRI). Tverrbinding av overflate-IgE av dets spesifikke allergen induserer degranulering av cellene samt frigjøring av inflammatoriske mediatorer. Denne prosessen som utvikler seg over minutter fører til typiske okulære, nese- og lungesymptomer på AR og astma som kløe, rødme i øynene, rennende og/eller tett nese og hvesing på grunn av luftfangst som et resultat av obstruksjon i nedre luftveier. Noen pasienter kan også utvikle senfasereaksjoner (LPR). Disse responsene utvikler seg typisk 2-6 timer etter allergeneksponering, topper i intensitet mellom 6-9 timer og er for det meste preget av vevsødem som manifesterer seg som luftstrømobstruksjon i luftveiene.

Siden introduksjonen av brukervennlige og svært absorberende prøvetakingsanordninger for slimhinnevæske, har mediatorene som er involvert i den umiddelbare og senfase allergiske responsen og kinetikken for frigjøringen av dem blitt godt karakterisert i løpet av de siste årene. Innsats fra Imperial College London og upubliserte data fra etterforskergruppen i Wien har vist at nøkkelmediatorer involvert i den umiddelbare fasen inkluderer mastcelleavledede mediatorer, (Tryptase, PGD2), epitelalarminer (IL-33, sST2) og komplement (C3a). , C4a, C5a, D-Dimer). Mediatorer involvert i senfasereaksjoner inkluderer også alarminer (sST2, TSLP), Th2-cytokiner (IL-4, IL-5, IL-13), nøytrofile mediatorer (MMP-9) og eosinofile mediatorer (EDN).

Men det som også nylig har blitt klart gjennom placebokontrollerte studier er at noen mediatorer er mekanisk mediert (upubliserte observasjoner), og slippes ut i det ekstracellulære miljøet som et resultat av selve prøvetakingsprosessen. Dette er av vital interesse, da forståelse av hvilke cytokiner som er mekaniske og hvilke som er allergenspesifikke vil hjelpe til med å veilede fremtidige studier som forsøker å målrette spesifikke biomarkører for behandling eller sykdomsovervåking. For å forstå om den mekaniske frigjøringen spiller noen rolle i den patologiske responsen på allergener, må forskjellige pasientkohorter undersøkes for å se om responsene deres er forskjellige på noen måte.

Rasjonal av studien

I lys av dette foreslår etterforskerne en studie for å undersøke effekten av slimhinneprøvetaking på cytokinfrigjøring fra neseepitel. Etterforskerne planlegger å prøve forskjellige pasientkohorter (allergisk rhinitt, allergisk astma, ikke-allergisk) for å se hvordan mekaniske effekter påvirkes av prøvetaking og allergisk eller ikke-allergisk status. Ved å inkludere 10 pasienter i hver gruppe håper etterforskerne å etablere en rekke "normale" for mekanisk frigjøring av allergenrelevante cytokiner i hver studiegruppe som vil bidra til å informere fremtidige studier som undersøker allergenspesifikke responser. For å kartlegge både de symptomatiske og objektive responsene på luftveisprøvetaking, vil symptomskåre og luftveismålere benyttes. For å kartlegge kinetikken til responsene vil deltakerne gjennomgå et tidskurs for slimhinneprøver i løpet av en 8 timers periode på en enkelt dag. Siden ingen intervensjonsstoffer blir gitt, vil denne studien ha svært lav risiko for de involverte personene samtidig som den kaster viktig lys over epitelresponsene på mekanisk manipulasjon.

Studiedesign I dette enkeltsenteret, pilotstudien vil totalt 36 pasienter (n=12 per gruppe) rekrutteres på frivillig basis og vil alle motta neseprøver. Studiedeltakere vil gjennomgå neseprøven i ett enkelt besøk.

Screening besøk

Fremgangsmåte:

• Signering av skjemaet for informert samtykke
• Tildeling av visningsnummer
• Demografisk data
• Historie med allergi
• Vurdering av inn- og eksklusjonskriterier
• Graviditetstest for kvinner ved behov for SPT
• Medisinsk historie
• Pasienter som rapporterer astma i anamnesen, må fremlegge objektive bevis på luftveisobstruksjon og reversibilitet (spirometrireversibilitet eller PC20 metakolin/histamin <8mg)
• Samtidig medisinering
• Fremre rhinoskopi
• Standard SPT med kommersielt ekstrakt fra: hassel, ask, gressblanding, ragweed, bynke, D. pteronyssinus, D. farina, katte- og hundefass, alternaria, cladosporium, histamin og negativ kontroll
• Blodprøvetaking (maks 60ml heparinisert blod og serum) - En del av blodprøven sendes direkte til laboratoriet for analyse av total IgE, og spesifikt IgE til relevante allergener. Fra resten av blodet vil RNA bli tilberedt og lagret ved -80°C og serum vil bli separert og lagret ved -20°C.
• neseprøvetaking (mucosal curette prøvetaking og nasal sekresjon prøvetaking)

Prøvebesøk

Fremgangsmåte:

• Revurdering av inn- og eksklusjonskriterier (allergenspesifikke IgE-resultater)
• Registrering av samtidig medisinering
• Baseline Blodprøvetaking
• Baseline neseprøvetaking for begge neseborene (prøvetaking av nesesekresjon) ved 0 min
• Baseline TNSS-poengsum
• Grunnlinje PNIF
• Bivirkningsregistrering (AE).

• Blod, PNIF, neseprøvetaking (begge nesebor: mucosal curette prøvetaking og nasal sekresjon prøvetaking), og TNSS score, 15 min, 30 min, 45 min, 60 min, 75 min, 90 min, 120 min, 180 min, 240 min, 3600 min, 40 min, 4, 40 min av prøvetakingstidsforløp

  4 Studieprosedyrer

4.1 Sykehistorie til deltakerne, demografiske data, samtidig medisinering Deltakerne vil bli spurt om deres sykehistorie inkludert demografiske data og samtidig medisinering, deres allergiske symptomer inkludert intensitet og varighet og deres allergiske medisinhistorie.

4.2 Anamnese med allergi og TNSS-skår Deltakerne vil bli bedt om forekomst av nysing, rhinoré, nasal kløe, nesetetthet og om å gradere hvert symptom. De vil bruke følgende symptomscoremetode: 0 = fraværende; 1 = mild - tilstede, men lett tolerert; 2 = moderat - tilstede, symptom er plagsomt, men forstyrrer ikke dagliglivets aktiviteter; 3 = alvorlig - symptom er vanskelig å tolerere og forstyrrer dagliglivets aktiviteter.

4.3 Anterior rhinoskopi Anterior rhinoskopi vil bli utført én gang under screeningbesøket for å utelukke anatomiske varianser (f.eks. septumavvik) eller patologiske endringer (f.eks. nesepolypper). Det vil bli utført ved å bruke et spekulum med pasienten sittende med hodet litt bakover.

4.4 Peak Inspiratory Nasal Flow Meter (PNIF) Portabiliteten og enkelheten til PNIF gir en unik mulighet til å oppnå objektive målinger. Det har også nylig blitt validert som et studieverktøy under neseallergenutfordring.

4.4.1 Prosedyre: PNIF bruker et rør med variabel diameter kalibrert direkte i liter per minutt sammen med en indikatorring med lav treghet. Posisjonen til ringen etter en inspirasjonsmanøver indikerer maksimal strømning som oppnås. Enheten fungerer når en pasient inhalerer gjennom munnen eller nesen, dette fører til at luft trekkes gjennom måleren og en markør beveger seg langs skalaen for å indikere inhalasjonshastigheten. Den oppnådde strømningshastigheten kan noteres ved å kontrollere posisjonen til markøren mot den kalibrerte skalaen.

4.4.2 PNIF i studiegjennomføring: Deltakerne vil få opplæring i bruk av PNIF på studiedagen, og deretter vil den bli brukt på alle studietidspunkter for å få informasjon om nesestrøm.

4.5 Hudstikktest 4.5.1 Fremgangsmåte: Allergener settes inn i dermis på underarmen ved å stikke huden forsiktig gjennom en dråpe (20 ul) av en allergenholdig løsning med en steril lansett med minst 2 cm mellom hvert enkelt påføringspunkt. 0,9 % natriumkloridløsning vil bli brukt som negativ og histamin som positiv kontroll. Hos tidligere sensibiliserte individer vil kløende hevelse og rødhet i huden (hvit- og oppblussreaksjon) oppstå innen 15 minutter etter smitte med det respektive allergenet. Etter 20 minutter vil allergenløsninger bli tørket av og marginene til skjærene spores med en kulepenn. Gjennomsiktig tape vil limes på huden for å overføre omrisset av hvelvet til tapen for postene. Overflaten til hvalene vil bli beregnet ved hjelp av digital planimetri. For inkludering vil hvaler med en diameter på minst 3 mm anses som positive reaksjoner.

4.5.2 Testløsninger: Et kommersielt tilgjengelig panel av tre- og gresspollen, ugress- og flerårige allergener (Allergopharma, Wien, Østerrike) vil bli brukt ved screeningbesøket og vil bli lagret i henhold til produsentens instruksjoner. Som kontroller vil steril 0,9 % NaCl-løsning (negativ kontroll) og histamin (positiv kontroll, Allergopharma, Wien, Østerrike) brukes. De vil bli lagret i henhold til produsentens instruksjoner.

4.5.3 SPT i studiegjennomføring:

Screening besøk:

En standard hudpriktest med kommersielt bjørkepollenekstrakt og et panel av tre- og gresspollen, ugress- og flerårige allergener (alle Allergopharma, Wien, Østerrike) som brukes i rutinediagnostikk i allergiklinikken til ØNH-avdelingen vil bli utført for å vurdere deltakernes sensibiliseringsprofil ved screeningbesøket.

4.5.4 Sikkerhetstiltak Som en sikkerhetstiltak vil deltakerne bli overvåket i 30 minutter etter testing. Alle undersøkelser vil bli gjort i poliklinikken ved ØNH-avdelingen, hvor fullt akuttutstyr er tilgjengelig.

4.6 Blodprøvetaking og måling av immunologiske parametere Det vil bli tatt blodprøver ved screeningbesøket og ved alle studiebesøk ved punktering av antecubitalvenen før hudtesting. Maksimalt 60 ml per besøk vil bli tatt enten heparinisert (f.eks. for basofile sensitivitetsanalyser) eller for fremstilling av serum (f.eks. for vurdering av totale og allergenspesifikke immunglobulinnivåer eller RBL-analyse). Serumampuller vil bli behandlet og serum vil bli lagret ved -20°C. Allergenspesifikk IgE av blodprøver fra screeningbesøket vil bli målt av CAP-FEIA for å vurdere den allergenspesifikke RAST-klassen til pasientene. Måling av totalt, fritt og allergenspesifikk serum IgE, IgG, IgA og IgM vil utføres enten ved CAP-FEIA, ved mikroarraymåling eller ELISA. Immunformidlere vil bli målt ved å bruke MSD-plattformen enten av oss eller av våre samarbeidspartnere i AstraZeneca, Cambridge, Storbritannia. Målingen vil bli utført på slutten av studien i alle innsamlede serumprøver for å minimere interassayvariasjoner.

4.7 Graviditetstesting Hos kvinnelige deltakere vil graviditet utelukkes med en standard uringraviditetstest. Testen vil bli utført før første hudstikkprøve ved screeningbesøket og etterpå en gang i måneden.

4.8 Neseprøvetaking Neseprøvetaking vil bli utført ved alle besøk. For hvert besøk vil det bli tatt prøver ved bruk av nasosorpsjon FXi/PU (som inneholder en syntetisk absorberende matrise (SAM)), eller en 10 cm lang plastkyrett (nasosorpsjonsenheter fra Hunt Developments, Storbritannia) (Curette-enheter fra Arlington Scientific, USA)

4.8.1 Nasosorpsjon ved bruk av FXi/PU (Hunt Developments, Storbritannia). Under visualisering vil enheten settes inn i nesehulen og plasseres langs sideveggen mot den nedre turbinatet. Pasientens pekefinger vil bli brukt til å trykke på de ytre sidene av alarmen og laterale nesebruskene for å holde enheten på plass. Etter 1 minutt vil enhetene fjernes og deretter fryses ved -80°C.

4.8.2 Slimhinne-mRNA-prøvetaking En 10 cm nasal curette (enten Rhino-Probe, Arlington Scientific, USA eller Cellskim, Hunt Developments, UK) vil bli brukt. Under direkte visualisering vil kyretten bringes til å ligge mot den midtre nedre delen av den nedre turbinaten. Curetten vil bli presset mot slimhinneoverflaten flyttet utover 2-3 ganger. Denne bevegelsen gjentas 2-3 ganger for å sikre god prøvesamling. Denne kyretten og teknikken har vist seg å ikke forårsake betydelig ubehag for deltakerne, og den har derfor fordelen av at det ikke er behov for lokalbedøvelse. Etter innsamling vil cellene lyseres i Qiagen RLT-buffer og lagres ved -80 °C for senere mRNA-analyse.

5 Undersøkelsesprodukter og studiemedisiner 5.3 Samtidig medisinering 5.3.1 Generelt Alle tilleggsmedisiner som tas av forsøkspersonene ved inntreden i studien eller på et hvilket som helst tidspunkt under studien regnes som samtidig medisinering og vil bli dokumentert i CRF. Samtidig medisinering bør holdes på et minimum under studien, men hvis det anses nødvendig kan det gis dersom det ikke forstyrrer studieprotokollen.

5.3.2 Redningsmedisiner Selv om anafylaktiske hendelser er svært usannsynlige i denne studien, må de alltid vurderes som mulige. Derfor vil et komplett nødsett være tilgjengelig umiddelbart ved anafylaktiske reaksjoner ved SPT. Videre hvis deltakeren lider av sterke hudsymptomer etter SPT vil desloratadin 5mg gis for å lindre symptomene.

5.3.3 Forbudt samtidig medisinering

Forsøkspersonene må holde seg unna medisiner som forstyrrer studieprosedyrene så lenge studien varer. Følgende samtidige behandlinger er ikke tillatt under denne studien:

• Systemiske eller aktuelle kortikosteroider
• Andre immundempende legemidler
• Antihistaminer eller dinatriumkromoglykat 3 dager før screeningbesøk
• Systemiske eller intranasale adrenerge legemidler
• Psykofarmakologiske legemidler

• ACE-hemmere eller betablokkere

  6 Bivirkninger En uønsket hendelse er enhver hendelse under en klinisk studie, inkludert samtidig sykdom eller ulykke, som svekker individets velvære; det kan også ha form av en unormal laboratorieverdi. Begrepet uønsket hendelse innebærer ikke en årsakssammenheng med studiebehandlingen.

Alle forsøkspersoner som opplever uønskede hendelser - enten de anses forbundet med bruken av studiebehandlingen eller ikke - vil bli overvåket til symptomene avtar og eventuell unormal laboratorieverdi har returnert til baseline, eller til det er en tilfredsstillende forklaring på endringene som er observert, eller til døden. , i så fall vil en fullstendig patologirapport fra en kvalifisert patolog bli gitt. Alle funn skal rapporteres på en «uønsket hendelse»-side i saksjournalskjemaet.

Alle uønskede hendelser vil bli rapportert om og dokumentert som beskrevet nedenfor. Uønskede hendelser er delt inn i kategoriene "alvorlige" og "ikke-alvorlige". Dette bestemmer prosedyren som skal brukes for å rapportere/dokumentere den uønskede hendelsen (se nedenfor).

6.1 Definisjon av alvorlige og ikke-alvorlige uønskede hendelser

En alvorlig bivirkning er:

• Enhver hendelse som er dødelig eller livstruende
• Enhver hendelse som er permanent deaktivert
• Enhver hendelse som krever eller forlenger sykehusinnleggelse
• Enhver hendelse som involverer kreft, medfødt abnormitet eller oppstår som et resultat av overdose (påføring av mer enn den fastsatte dosen).

Bivirkninger som ikke faller inn under disse kategoriene, er definert som ikke-alvorlige.

6.2 Vurdering av alvorlighetsgrad av AE

Uavhengig av klassifiseringen av en bivirkning som alvorlig eller ikke-alvorlig (se ovenfor), må alvorlighetsgraden vurderes som mild, moderat eller alvorlig, i henhold til medisinske kriterier alene:

Mild = forstyrrer ikke rutineaktiviteter, akseptabel Moderat = forstyrrer rutinemessige aktiviteter Alvorlig = umulig å utføre rutinemessige aktiviteter, anses som uakseptabel av legen, krever behandling, krever seponering av studien eller har resteffekt.

Det skal bemerkes at en alvorlig uønsket hendelse ikke trenger å være alvorlig. Uavhengig av alvorlighetsgrad skal alle alvorlige bivirkninger rapporteres som nedenfor.

6.3 Rapportering/dokumentasjon av uønskede hendelser Uønskede hendelser samles inn ved spontanrapportering. 6.3.1 Rapportering/dokumentasjon av alvorlige uønskede hendelser Alle alvorlige uønskede hendelser som oppstår i løpet av denne studien, enten de anses å være assosiert med studien eller ikke, skal dokumenteres på en "Uønskede hendelse"-side i saksjournalskjemaet.

Det skal utarbeides en oppfølgingsrapport med all ny informasjon som er innhentet om den alvorlige hendelsen og vil bli samlet inn.

Etterforskeren vil på forespørsel sende inn kopier av alle disse rapportene til den etiske komiteen. Der det er nødvendig vil etterforskerne informere myndighetene.

6.3.2 Rapportering/dokumentasjon av ikke-alvorlige uønskede hendelser Disse skal dokumenteres på en «Uønskede hendelse»-side i saksjournalskjemaet.

7 Statistisk analyse Disse analysene vil søke å utforske eventuelle statistisk signifikante forskjeller i longitudinelle nasale cytokinbaner mellom friske individer, atopiske individer og astmatikere. Vi vil først foreta grunnleggende beskrivende statistikk. Emnekarakteristikker (f.eks. helsestatus, demografiske variabler) og utfallsvariabler (f.eks. nasal cytokinfrigjøring, kliniske responser) vil bli beskrevet ved å beregne maksimum, minimum, median, gjennomsnitt og standardavvik for metriske variabler og absolutte og relative frekvenser for kategoriske variabler for hver faggruppe (friske individer, atopiske individer og astmatikere).

Logg-endringer fra baseline vil bli sammenlignet mellom grupper, og på hvert tidspunkt ved å bruke t-tester for hver parvis sammenligning mellom grupper, for å utforske formen til banene-over-tid. For grafisk illustrasjon vil de individuelle logg-baseline-endring-banene for hver pasient plottes, samt gruppegjennomsnitt med 95 % CI.

Hvis log-endringer-fra-baseline-viser rimelig-linearitet, vil vi teste for en assosiasjon mellom faggrupper og longitudinelle baner ved å bruke blandede lineære modeller med fagspesifikke tilfeldige avskjæringer for å ta hensyn til intra-individuelle korrelasjoner av gjentatte mål, og gruppere etter tidsinteraksjonsbegreper for å teste for statistisk signifikante forskjeller i baner. Motivasjonen for denne blandede modelleringstilnærmingen vil være å øke kraften ved å kombinere informasjon på tvers av flere tidspunkter. Gjennomsnittlige baner og 95 % CI-er som utledet av det blandede modelleringsarbeidet vil også bli plottet

8 Etiske og juridiske aspekter Studien vil bli utført i tråd med lokale lovkrav og GCP. Den vil bli utført i samsvar med retningslinjene i Helsinki-erklæringen (1964), inkludert gjeldende revisjoner.

8.1 Informert samtykke fra forsøksperson Før opptak til studien må forsøkspersonen ha samtykket til å delta etter at arten, omfanget og mulige konsekvenser av den kliniske studien er forklart i en form som er forståelig for ham/henne. Observanden må gi skriftlig samtykke. Underskriften til etterforskeren vil bekrefte forsøkspersonens samtykke. Pasienten kan trekke tilbake samtykket, selv uten å gi kommentarer, når som helst og uten negative konsekvenser for hans fremtidige medisinske behandling. Nasosorpsjon og/eller RNA og/eller blodprøver kan sendes i anonymisert form til samarbeidspartnere utenfor Østerrike for analyse (f.eks. analyse av spaltet og hel IL-33 av AstraZeneca, Cambridge UK). Pasienten informeres om dette i samtykkeerklæringen.

8.2 Bekreftelse/godkjenning av studien Før studiens start vil studieprotokollen sendes til den etiske komiteen ved det medisinske universitetet i Wien og det generelle sykehuset i Wien (Borschkegasse 8b/E 06, 1090 Wien, Østerrike).

8.3 Forsikring Alle forsøkspersoner som deltar i denne studien vil være forsikret hos Zürich Insurance Company (Zürich-Versicherungs-Aktiengesellschaft, Schwarzenbergplatz 15, 1010 Wien, tlf. +43 50 1255 1255).

8.4 Konfidensialitet Alle forsøkspersoners navn vil bli holdt hemmelig i etterforskernes filer. Forsøkspersonene vil bli identifisert gjennom dokumentasjonen og evalueringen ved antall tildelt dem under studien. Forsøkspersonene vil bli fortalt at alle studiefunn vil bli lagret og håndtert strengt konfidensielt.

9 Dokumentasjon og bruk av studiefunn 9.1 Dokumentasjon av studiefunn Alle resultater som samles inn i løpet av studien vil bli samlet i en kildedatafil og vil senere bli overført til saksrapportskjemaene (CRF). Alle oppføringer på saksjournalskjemaene vil bli gjort leselig med svart eller blått blekk. Dersom det foretas rettelser i oppføringer i saksjournalskjemaet, vil ordene eller tallene bli ringmerket og et enkelt strøk trukket gjennom dem. Den riktige verdien vil bli lagt inn ved siden av den gamle oppføringen og datoen, og korrigeringen vil bli initialisert. Feil inntastinger må ikke dekkes med korrigeringsvæske eller slettes eller gjøres uleselige på noen måte. De utfylte CRF-ene vil bli signert av etterforskeren. CRF vil bli gjennomført umiddelbart etter avsluttende eksamen. De medisinske journalene som CRF er basert på, vil bli oppbevart i minst 15 år.

9.2 Bruk av studiefunnene Funnene fra denne studien vil bli publisert av etterforskerne i et vitenskapelig tidsskrift og presentert i vitenskapelige møter. Manuskriptet vil bli sirkulert til alle medetterforskere før innlevering.

10 betraktninger om potensielle risikoer og fordeler for studiedeltakere og valg av dose

De inkluderte deltakerne vil ikke ha direkte utbytte av studien. Men siden kinetikken til mekanisk slimhinnestimulering fortsatt ikke er fullstendig forstått, vil denne omfattende pilotstudien gi en mulighet til å veilede fremtidig forskning som forhåpentligvis vil føre til oppdagelsen av nye terapeutiske mål.

Potensielle risikoer for deltakerne inkluderer smerte, infeksjon og hematom på stedet for blodprøvetaking. Under neseslimhinne- og sekretprøvetaking er lett neseblødning en mulig risiko. Under SPT, selv om det er svært usannsynlig, er anafylaktiske reaksjoner en mulighet. For å minimere risikoen for anafylaktiske reaksjoner og gi optimal behandling i tilfelle en anafylaktisk reaksjon skulle oppstå, vil pasientene overvåkes i minimum 30 minutter etter SPT. Ved alle deltakerbesøk vil opplært personell og akuttmedisinering være tilgjengelig hele tiden.