Zapobieganie upośledzeniu metabolizmu kości wywołanemu przez glukokortykoidy

Reklamując się w prasie, sklepach, klubach fitness, w miejscach publicznych, na platformach społecznościowych oraz kontaktując się z zainteresowanymi osobami (mailowo i telefonicznie) zidentyfikowano publicznie dostępne strony internetowe (np. www.ratsit.se), Do badania zostanie zrekrutowanych 46 młodych, zdrowych kobiet i mężczyzn. Osoby biorące udział w badaniu będą kontaktowane telefonicznie i otrzymają więcej informacji dotyczących badania oraz zostaną poddane wstępnej ocenie pod kątem kwalifikowalności do udziału. Szczegółowe informacje o badaniu zostaną przesłane pocztą do badanych osób. Podczas wizyty przesiewowej uczestnicy otrzymają ustną informację o badaniu, a jeśli podpiszą formularz świadomej zgody, zostaną poddani badaniu glikemii na czczo, HbA1c oraz doustnemu testowi obciążenia glukozą (OGTT). Wystandaryzowany kwestionariusz do samodzielnego wypełniania zostanie wykorzystany do zebrania podczas wizyty przesiewowej informacji na temat nawyków związanych z paleniem tytoniu, spożyciem wapnia, historią medyczną, przyjmowanymi lekami, wcześniejszymi złamaniami, aktywnością fizyczną i nawykami dietetycznymi. Kwalifikujący się uczestnicy są następnie zapraszani na wizytę randomizacyjną. Podczas wizyty randomizacyjnej osoby badane zostaną poproszone o powstrzymanie się od ćwiczeń fizycznych innych niż chodzenie i utrzymanie niezmienionej normalnej diety od 14 dnia badania. Randomizacja zostanie przeprowadzona przez dostawcę LR (BioGaiaAB). Badacze nie będą mieli dostępu do kodu randomizacji, a zaślepienie zostanie utrzymane do czasu zakończenia badania i zablokowania bazy danych. Po randomizacji uczestnicy badania będą spożywać LR lub placebo przez 30 dni. Po 14-dniowym okresie wstępnym wszyscy uczestnicy zaczną przyjmować doustnie 25 mg prednizolonu codziennie rano przez 7 dni. Podczas 14-dniowej wizyty rozpocznie się całodobowe monitorowanie glikemii przez kolejne 10 dni. Podczas kolejnej wizyty w dniu 16 rano (7-9 rano) zostaną pobrane próbki krwi na czczo, dostarczone zostaną próbki kału (w ciągu 24 godzin od pobrania), a uczestnicy rozpoczną na tej wizycie doustne leczenie GKS po pobraniu próbek krwi pociągnięty. Na wizytach 19-, 23- i 30-dniowych próbki krwi będą pobierane rano (7-9 rano dla wszystkich wizyt, przed przyjęciem dawki GC). Podczas tych wizyt zostaną również pobrane próbki kału. Uczestnicy biorący udział w badaniu zostaną poproszeni o przybycie do kliniki i zgłoszenie przestrzegania zaleceń oraz ewentualnych zdarzeń niepożądanych w czasie trwania badania i podczas wszystkich wizyt.

Ćwiczenie.

Kwestionariusze:

Wystandaryzowany kwestionariusz posłuży do zebrania podczas wizyty przesiewowej informacji na temat nawyków związanych z paleniem, spożyciem wapnia, historią medyczną (np. udar mózgu, reumatoidalne zapalenie stawów i cukrzyca), leki i wcześniejsze złamania. Obecna aktywność fizyczna i nawyki żywieniowe zostaną ocenione na podstawie kwestionariuszy zgłaszanych przez samych siebie (IPAQ i FFQ) na początku badania. Dzienne spożycie wapnia będzie obliczane na podstawie kwestionariuszy dotyczących żywności zawierającej wapń (np. nabiał, warzywa itp.). Objawy żołądkowo-jelitowe zostaną przeanalizowane za pomocą kwestionariusza GSRS.

Analizy surowicy, osocza i kału:

Surowica i osocze zostaną pobrane rano (na czczo), zamrożone i przechowywane w temperaturze -80°C do czasu dalszych analiz. Próbki z dnia 16 zostaną pobrane przed rozpoczęciem doustnej terapii GC. Podczas każdej wizyty zostanie pobrane maksymalnie 30 ml krwi. Stężenie glukozy we krwi na czczo będzie analizowane przy użyciu świeżej krwi podczas badania przesiewowego (z dodatkiem HbA1c podczas badania przesiewowego) oraz w dniach 16 (początek GC), 19, 23 i 30. Próbki surowicy i osocza zostaną natychmiast zamrożone i przechowywane do czasu analizy. Analizy markerów surowicy lub osocza i kości (osteokalcyny, P1NP i CTX) zostaną przeprowadzone przy użyciu dostępnych na rynku testów immunosorpcyjnych. Próbki kału będą pobierane w ciągu 24 godzin od ich wytworzenia i przechowywane w temperaturze -80oC do czasu dalszej analizy.

Doustny test obciążenia glukozą (OGTT):

Podczas wizyty przesiewowej zostanie zmierzona poranna glikemia na czczo, po czym nastąpi spożycie 24 cl syropu glukozowego zawierającego 75 gramów cukru. Po 2 godzinach zostanie wykonany kolejny pomiar stężenia glukozy we krwi. Włączenie do badania będzie uzależnione od prawidłowego stężenia glukozy we krwi na czczo (≤6 mmol/l) i OGTT (<7,8 mmol/l).

Markery przepuszczalności jelit i stanu zapalnego jelit:

Analizy markerów przepuszczalności jelitowej (analiza endotoksyn, test fluorescencyjny punktu końcowego rekombinowanego czynnika C PyroGeneTM) zostaną przeprowadzone przy użyciu testu fluorescencyjnego w dniu 16, dniu 19 i dniu 23. Markery zapalenia jelit (lipokalina-2 i kalprotektyna) będą również analizowane w kale i surowicy.

Analizy mikroflory jelitowej - analizy eksploracyjne:

DNA z próbek kału zostanie wyizolowany przy użyciu dobrze sprawdzonego protokołu i przeprowadzony PCR w celu amplifikacji regionów zmiennych (V4) bakteryjnego genu 16S rRNA przy użyciu starterów z kodem kreskowym. Przeprowadzone zostaną również analizy metagenomu wszystkich próbek.

Ciągłe monitorowanie glukozy:

W 14. dniu badania rozpocznie się ciągłe monitorowanie glikemii (CGM), umożliwiające 48-godzinny okres obserwacji przed rozpoczęciem doustnego podawania prednizolonu. CGM będzie stosowany od dnia 14 do zakończenia leczenia prednizolonem w dniu 23. System Dexcom G6 będzie używany do CGM u wszystkich uczestników.