Wpływ probiotyków na gojenie się ran w jamie ustnej – badanie pilotażowe (PROWOUND)

Interwencja: po świadomej zgodzie i wyjściowym zebraniu danych klinicznych (wiek, płeć) uczestnicy zostaną losowo przydzieleni do jednej z kolejności zabiegów. W okresie wstępnym otrzymają zapas tabletek probiotycznych lub placebo wystarczających na siedem dni. Uczestnicy są poinstruowani, aby przyjmować dwie tabletki dziennie (jedną rano i jedną wieczorem, w dniach 0-7) i proszeni są o powstrzymanie się od wszelkich innych pokarmów lub suplementów zawierających probiotyki. W ósmym dniu uczestnik uda się do kliniki i zostanie przeprowadzona biopsja. W zależności od grupy alokacyjnej zostanie dostarczony olejek probiotyczny lub placebo. Uczestnik zostanie poinstruowany, aby nakładać olej miejscowo na ranę plastikowym mikropędzlem przez 9 dni każdego wieczoru i silnie wzmocniony, aby kontynuować stosowanie przydzielonych tabletek dwa razy dziennie. Uczestnik pojawi się w klinikach drugiego, piątego i ósmego dnia po zranieniu, aby wykonać zdjęcia kontrolne gojenia się ran. Pierwszy okres interwencji kończy się czterotygodniowym okresem wymywania, a następnie rozpoczyna się drugi okres interwencji, zgodnie z tymi samymi procedurami.

Tabletki probiotyczne oraz olej probiotyczny (w zalecanej dawce) zawierają 2x10^8 CFU Lactobacillus reuteri. Zarówno tabletki placebo, jak i olej są identyczne pod względem wielkości i składu, ale bez dodatku szczepów probiotycznych. Tabletki i olej są pakowane w identyczne pojemniki/butelki oznaczone kolorami. Kod nie będzie dostępny dla badaczy do czasu zakończenia analizy. Zarówno tabletki, jak i olej dostarcza firma BIOGAIA AB.

Procedury kliniczne i pobieranie próbek

Wszystkie procedury kliniczne i pobieranie próbek będą przeprowadzane przez wykwalifikowanego i autoryzowanego dentystę z Instytutu Odontologii, Sekcji Kariologii, Endodoncji, Stomatologii Dziecięcej i Genetyki Klinicznej, Wydziału Zdrowia i Nauk Medycznych Uniwersytetu w Kopenhadze. Pobrane próbki (ślina, wysięk z rany i wymaz bakteryjny) będą przechowywane w zamrażarce w temperaturze -80°C do czasu zebrania wszystkich próbek od wszystkich pacjentów – maksymalnie przez sześć miesięcy. Jednoczesne badanie wszystkich pobranych próbek pozwala na sprawne przeprowadzenie analiz laboratoryjnych i uniknięcie błędów.

Biopsja punktowa: ósmego dnia za pomocą stempla biopsyjnego zostanie utworzona znormalizowana okrągła rana o średnicy 3,5 mm i głębokości około 1,5 mm w błonie śluzowej podniebienia twardego. Biopsję wykonuje się w warunkach aseptycznych iw znieczuleniu miejscowym z użyciem 2% lidokainy w połączeniu z epinefryną w celu uzyskania miejscowej hemostazy. Za pomocą skalpela usunięto nabłonek powierzchniowy i leżącą pod nim powierzchowną tkankę łączną, która zostanie usunięta zgodnie z przepisami bezpieczeństwa biologicznego Instytutu Stomatologii Uniwersytetu Kopenhaskiego. Po zranieniu miejsce rany zostanie sfotografowane (zakodowane na ślepo) za pomocą kamery wewnątrzustnej, umieszczając wokół rany standardowy szablon o średnicy 6 mm jako punkt odniesienia. Uczestnik uda się do kliniki dentystycznej drugiego, piątego i ósmego dnia po zranieniu, aby zrobić zdjęcie rany przez doktorantkę Ginę Castiblanco. Rozmiar rany na zdjęciach będzie mierzony przez dwóch oceniających i będzie wyrażany jako stosunek pola powierzchni rany do standardowego rozmiaru etykiety za pomocą oprogramowania (Canvas 7, ACD Systems of America). Punktem końcowym będzie procent początkowej wielkości rany, mierzony w drugim, piątym i ósmym dniu po zranieniu.

Pobieranie próbek śliny: zostanie pobranych sześć próbek niestymulowanej śliny pełnej (UWS) od każdego pacjenta (jedna na początku badania, jedna zaraz po okresie wstępnym i jedna na koniec okresu interwencji). W przypadku odbioru USW uczestnik będzie siedział w wygodnej pozycji z lekko pochyloną głową. Uczestnik jest proszony o trzymanie oczu otwartych i wykonywanie jak najmniejszej liczby ruchów, w tym połykania. Następnie proszony jest o przepłukanie ust wodą i ponowne wyplucie. Następnie instruuje się go, aby ślina spływała z ust do wyznaczonego plastikowego kubka przez dziesięć minut. Porcje śliny (1,5 ml) natychmiast umieszcza się na lodzie i przechowuje w zamrażarce w temperaturze -80°C do czasu dalszej analizy.

Pobranie wysięku z rany: łącznie zostanie pobranych osiem próbek wysięku z rany. Miejsce rany zostanie osuszone wacikiem i paski periopapieru (ProFlow, Amityville, NY, USA) zostaną delikatnie dociśnięte do rany przez 20 sekund. W przypadku zanieczyszczenia krwią pasek jest rozładowywany, a po 5 minutach pobieranie próbki jest powtarzane. Objętość wysięku rejestruje się za pomocą Peritron 8000 (Proflow) i wyraża w µl. Jeden pasek zawiera około 0,1-0,4 µL wysięku. Paski przenosi się następnie do plastikowych probówek i przechowuje w temperaturze -80°C do dalszej analizy.

Pobieranie rozmazu bakteryjnego: zostaną pobrane cztery rozmazy bakteryjne. Sterylny wymaz zostanie przeprowadzony przez ranę, umieszczony w plastikowej probówce i przechowywany w temperaturze -80°C do dalszej analizy. Rozmazy zostaną poddane konwencjonalnej hodowli mikrobiologicznej w celu wykrycia obecności/nieobecności i zliczenia gatunków bakterii powszechnie związanych z opóźnionym gojeniem się ran (paciorkowce β-hemolityczne i S. aureus).

Postrzeganie bólu i dyskomfortu: na początku każdego okresu wstępnego uczestnikom zostanie wręczony jednostronicowy dziennik, aby mogli zarejestrować przyjmowanie tabletek i własne postrzeganie bólu i dyskomfortu zgodnie ze skalą VAS. Uczestnik jest również zachęcany do zarejestrowania czynników, które mogą mieć wpływ na wynik (aktywność fizyczna i ilość wypijanych napojów alkoholowych). Uczestnik zostanie poproszony o przyniesienie wypełnionego dziennika na koniec okresu interwencji.

Postrzegany stres i ogólny stan zdrowia: pod koniec okresu interwencji uczestnik zostanie poproszony o wypełnienie zatwierdzonego Ogólnego Kwestionariusza Zdrowia GHQ-12 (10) oraz zatwierdzonej Skali Postrzeganego Stresu (11). Wiadomo, że te czynniki (samopostrzeganie stresu i ogólny stan zdrowia) mogą być współzałożycielami wyników gojenia się ran.

Zgodność: na początku każdego okresu interwencji uczestnicy otrzymają tabletki wystarczające na 16 dni oraz olejek do stosowania miejscowego wystarczający na dziewięć dni stosowania. Zgodność zostanie sprawdzona poprzez wypełnienie przez uczestnika dziennika, w którym odnotowuje się dzienne spożycie tabletek i zastosowanie oleju. Na ostatnią wizytę uczestnicy zostaną poproszeni o przyniesienie pozostałych tabletek i oleju do liczenia/oszacowania.

Analiza danych: wszystkie dane będą przetwarzane za pomocą oprogramowania statystycznego „R” typu open source i kontrolowane pod kątem normalnej dystrybucji. Wielowymiarowa i jednoczynnikowa analiza wariancji (MANOVA i ANOVA) zostanie wykorzystana do oceny zmian wewnątrzobiektowych w czasie. Wartość p mniejsza niż 0,05 zostanie uznana za istotną statystycznie. Uzyskane wyniki zostaną opublikowane w uznanym międzynarodowo czasopiśmie. W przypadku braku możliwości opublikowania wyników w czasopiśmie, będą one dostępne na stronie internetowej Instytutu Stomatologii UW. Kładziemy nacisk na publikowanie wyników pozytywnych, negatywnych i niejednoznacznych.

Zarządzanie danymi: wszystkie zebrane dane będą przetwarzane zgodnie z ustawą o przetwarzaniu danych osobowych i „Prawem zdrowotnym”. Przy włączeniu uczestnicy otrzymają unikalny numer oraz odrębny protokół bez osobistego numeru identyfikacyjnego. To badanie nie zostanie zgłoszone do „Datatilsynet”, ponieważ jest to prywatny projekt naukowy dotyczący zdrowia