Набор для комбинированного обнаружения метилирования генов KCNA3 и OTOP2 (метод флуоресцентной ПЦР)

Рак пищевода обусловлен аномальной гиперплазией плоского или железистого эпителия, основными патологическими типами являются плоскоклеточный рак и аденокарцинома. Во всем мире рак пищевода занимает седьмое место по заболеваемости и шестое место среди причин смерти от рака. Статистика показала, что в 2020 году было зарегистрировано 604 000 новых случаев рака пищевода и 54,4 случая смерти.

Показатели 5-летней выживаемости достоверно различались при карциномах пищевода разных стадий, например, при Iа стадии 84,9%, Iб стадии 70,9%, IIа стадии 56,2%, IIб стадии 43,3%, IIIа стадии 37,9%, 23,3% для стадии IIIb, 12,9% для стадии IIIc и 3,4% для стадии IV. Поэтому ранняя диагностика и лечение являются наиболее эффективной стратегией снижения заболеваемости и смертности от рака пищевода.

Эндоскопия и патологическая биопсия в настоящее время являются «золотым стандартом» диагностики рака пищевода, однако, ограниченные медицинскими ресурсами, переносимостью и другими проблемами, скрининг населения с помощью эндоскопии не является экономически эффективным и неприменимым. Не существует признанного и эффективного серологического маркера для выявления ранней карциномы пищевода и предраковых поражений, эффект комбинированного обнаружения нескольких серологических маркеров лучше, чем у одиночных маркеров, а точность составляет 74–85%, но это все еще субоптимально. .

Метилирование промоторной области гена-супрессора опухоли CpG-острова является наиболее распространенным изменением во время онкогенеза, исследования показали, что события метилирования могут происходить на ранних стадиях рака пищевода.

Циркулирующая опухолевая ДНК (цтДНК) происходит из фрагментов ДНК, образующихся в результате апоптоза, некроза или секреции опухолевых клеток, которые являются частью циркулирующей свободной (вкДНК). ЦтДНК содержит те же генные дефекты, что и ее исходная опухолевая ДНК, такие как точковая мутация, перестройка, амплификация, микросателлитное изменение, эпигенетическая модификация и т. д.

KCNA3 является членом семейства белков, кодирующих калиевые каналы и в основном влияющих на вязкость клеток. OTOP2 является членом семейства белков, кодирующих каналы транспорта протонов, некоторые исследования показали, что уровни метилирования двух генов в тканях рака пищевода были значительно выше, чем в соседних тканях, и их можно использовать в качестве потенциального маркера для диагностики рака пищевода. рак пищевода.

Этот набор основан на технологии флуоресцентной ПЦР в реальном времени для качественного обнаружения метилирования KCNA3 и OTOP2 в образцах плазмы. Перед ПЦР-амплификацией вкДНК трансформировали бисульфитом, а ген ACTB (β-актин) использовали в качестве внутреннего стандарта.