Hypolipemická léčba u akutního koronárního syndromu (AKS): Antitrombotické účinky

Klinický stav bude hodnocen během hospitalizace a následně ambulantně. Všechny kardiovaskulární příhody (fatální nebo nefatální infarkt myokardu, nestabilní angina pectoris, náhlá srdeční smrt, úmrtí ze všech příčin, cévní mozková příhoda, TIA) budou zaznamenávány a pacientům, kteří podstoupili akutní PCI, bude provedena kontrolní koronarografie podle aktuálních doporučení. Klinická analýza však není hlavním cílem této studie.

Vyšetřovatelé plánují vyhodnotit následující parametry:

• Morfologie plné krve, kreatinin, glukóza, sodík, draslík, urea, lipidový profil, CK, AST, fibrinogen, standardními metodami v nemocniční laboratoři.
• Markery zánětu - fibrinogen (nefelometrie, Dade Behring) vysoce citlivý C-reaktivní protein (nefelometrie, Dade Behring); interleukin 6 (ELISA, R&D Systems).
• Markery tvorby trombinu v periferní krvi - trombin-antitrombinové komplexy [TAT] (ELISA, Dade Behring); protrombinové fragmenty 1+2 [F1+2] (ELISA, Dade Behring).
• Permeace fibrinové sraženiny a náchylnost k lýze - měření Darcyho konstanty (rozměry pórů ve struktuře sraženiny) měřením objemu pufru (0,05 mol/l Tris HCl s 0,15 mol/l NaCl) pronikajícího skrz fibrinový gel vyrobený v polystyrénových trubkách o průměru 1,3 mm se 100 ul citrátové plazmy a po přidání 1 U/ml lidského trombinu a 20 mmol/l chloridu vápenatého při teplotě místnosti během 120 minut podle metodologie popsané Millsem a kol.
• Fibrinová gelová turbidimetrie - plazma smíchaná s Tris pufrem připraveným výše uvedeným způsobem v poměru 2:3, po přidání 1 U/ml trombinu a 16 mmol/l chloridu vápenatého bude analyzována v UV spektrometru (vlnová délka 405 nm). Budou měřeny následující proměnné: doba iniciace, doba zvýšení absorpce a hodnota absorpce v plató, přibližně 10 minut po přidání trombinu do směsi. Po 2 hodinách se provede spektrofotometrické vyhodnocení sraženiny (400 až 800 nm), aby se změřila velikost pórů a tloušťka fibrinových vláken pomocí Carrovy rovnice upravené Wolbergem. Poté bude pomocí turbidimetrie měřena fibrinolýza fibrinového gelu. Další test lýzy založený na měření hladin D-dimeru v odtoku protékajícím fibrinovými gely bude proveden podle metody Collet et al.
• Aktivace koagulačního systému v modelu "minimálně modifikované krve" podle Randa et al. Neantikoagulovaná krev bude rozdělena do 10 1ml vzorků přidaných do zkumavek s TF a fosfolipidy a následně bude srážení zastaveno antikoagulačním koktejlem. Ve vzorcích supernatantu se provede Western blot a HPLC analýza fibrinopeptidů, jak bylo popsáno dříve.

U 40 náhodně přidělených pacientů vyhodnotíme aktivaci koagulačního systému pomocí modelu cévního poranění podle námi vyvinutého postupu.

Budeme měřit:

• Aktivace protrombinu
• Přeměna fibrinogenu na fibrin
• Aktivace faktoru V a inaktivace faktoru Va
• Aktivace faktoru XIII
• Aktivace TAFI
• Generace trombinu

Genetická analýza Výzkumníci určí polymorfismus PlA1 PlA2 v genu integrinu β3 pomocí techniky PCR ve vzorcích DNA odebraných z leukocytů periferní krve.

Kromě toho budeme hledat polymorfismus promotorové oblasti IL-6 /G-174C také pomocí PCR v DNA odebrané z leukocytů periferní krve pomocí primerů 5'-AAT CTT TGT TGG AGG GTG AG a 5' - ACA TGC CAA GTG CTG AGT CA a restrikční endonukleáza Sfa NI na 2% agarózovém gelu.