Leczenie hipolipemii w ostrym zespole wieńcowym (ACS): działanie przeciwzakrzepowe

Stan kliniczny będzie oceniany w trakcie hospitalizacji, a następnie ambulatoryjnie. Wszystkie zdarzenia sercowo-naczyniowe (zawał mięśnia sercowego zakończony lub niezakończony zgonem, niestabilna dusznica bolesna, nagła śmierć sercowa, zgon z jakiejkolwiek przyczyny, udar mózgu, TIA) będą rejestrowane, a pacjenci po ostrej PCI będą mieli wykonaną kontrolną koronarografię zgodnie z aktualnymi zaleceniami. Jednak analiza kliniczna nie jest głównym celem tego badania.

Badacze planują ocenić następujące parametry:

• Morfologia krwi pełnej, kreatynina, glukoza, sód, potas, mocznik, profil lipidowy, CK, AST, fibrynogen, standardowymi metodami w laboratorium szpitalnym.
• Markery stanu zapalnego - fibrynogen (nefelometria, Dade Behring) białko C-reaktywne o wysokiej czułości (nefelometria, Dade Behring); interleukina 6 (ELISA, R&D Systems).
• Markery generacji trombiny we krwi obwodowej - kompleksy trombina-antytrombina [TAT] (ELISA, Dade Behring); fragmenty protrombiny 1+2 [F1+2] (ELISA, Dade Behring).
• Przenikanie skrzepu fibrynowego i podatność na lizę - pomiar stałej Darcy'ego (wymiarów porów w strukturze skrzepu) poprzez pomiar objętości buforu (0,05 mol/l Tris HCl z 0,15 mol/l NaCl) przenikającego przez żel fibrynowy przygotowany w rurkach polistyrenowych o średnicy 1,3 mm, z 100 ul osocza cytrynianowego i po dodaniu 1U/ml ludzkiej trombiny i 20 mmol/l chlorku wapnia w temperaturze pokojowej w ciągu 120 minut zgodnie z metodologią opisaną przez Mills i in.
• Turbidymetria w żelu fibrynowym - osocze zmieszane z buforem Tris przygotowanym jak wyżej w stosunku 2:3, po dodaniu 1 U/ml trombiny i 16 mmol/l chlorku wapnia będzie analizowane w spektrometrze UV ​​(długość fali 405 nm). Zmierzone zostaną następujące zmienne: czas inicjacji, czas narastania absorpcji oraz wartość absorpcji w plateau, około 10 minut po dodaniu trombiny do mieszaniny. Po 2 godzinach zostanie przeprowadzona ocena spektrofotometryczna skrzepu (400 do 800 nm) w celu zmierzenia wielkości porów i grubości włókien fibryny przy użyciu równania Carra zmodyfikowanego przez Wolberga. Następnie fibrynoliza żelu fibrynowego zostanie zmierzona za pomocą turbidymetrii. Kolejny test lizy oparty na pomiarze poziomów D-dimerów w ścieku przepływającym przez żele fibrynowe zostanie przeprowadzony zgodnie z metodą Colleta i in.
• Aktywacja układu krzepnięcia w modelu „minimalnie zmodyfikowanej krwi” według Rand et al. Krew nieantykoagulowana zostanie podzielona na 10 1-ml próbek, które zostaną dodane do probówek z TF i fosfolipidami, a następnie krzepnięcie zostanie zatrzymane koktajlem antykoagulacyjnym. W próbkach supernatantu przeprowadza się analizę Western blotting i HPLC fibrynopeptydów, jak opisano wcześniej.

U 40 losowo przydzielonych pacjentów dokonamy oceny aktywacji układu krzepnięcia za pomocą modelu uszkodzenia naczyń według opracowanej przez nas procedury.

Zmierzymy:

• Aktywacja protrombiny
• Konwersja fibrynogenu do fibryny
• Aktywacja czynnika V i inaktywacja czynnika Va
• Aktywacja czynnika XIII
• Aktywacja TAFI
• Pokolenie trombiny

Analiza genetyczna Badacze określą polimorfizm PlA1 PlA2 w genie integryny β3 za pomocą techniki PCR w próbkach DNA pobranych z leukocytów krwi obwodowej.

Dodatkowo będziemy poszukiwać polimorfizmu regionu promotora IL-6/G-174C również metodą PCR w DNA pobranym z leukocytów krwi obwodowej, stosując startery 5'-AAT CTT TGT TGG AGG GTG AG i 5' - ACA TGC CAA GTG CTG AGT CA i endonukleaza restrykcyjna Sfa NI na 2% żelu agarozowym.