Klinická studie kmenových buněk derivovaných z tukové tkáně při léčbě diabetické nohy

design výzkumu: Byla navržena randomizovaná kontrolovaná studie. Podle stanovených kritérií pro zařazení/kritérií pro vyloučení byly subjekty náhodně rozděleny do dvou skupin pomocí tabulky náhodných čísel. Každá skupina obdržela mezenchymální kmenové buňky (MSC) z tukových zdrojů a konvenční léčbu diabetické nohy podle odhadovaných výsledků velikosti vzorku. Byla provedena randomizovaná kontrolovaná studie se třemi slepými pokusy. Subjekty byly slepé, intervence slepé a hodnotitelé slepí. Subjekty byly náhodně seskupeny a asistovali jim koordinátoři. Sledování bylo provedeno v 5 časových bodech 7 dní, 1, 3, 6 a 12 měsíců po operaci, aby se vyhodnotila bolest a funkční změny subjektů a vyhodnotila se bezpečnost a účinnost.

Budou provedena kritéria pro zařazení předmětu, kritéria vyloučení a metody přidělování vstupní kritéria a kritéria vyloučení.

Způsob přidělování a seskupování:

Byla provedena randomizovaná kontrolovaná studie se třemi slepými pokusy. Subjekty byly slepé, intervence slepé a hodnotitelé slepí. Subjekty byly náhodně seskupeny a asistovali jim koordinátoři. Po obdržení náhodného čísla jsou zkušební vzorky a injekce označeny výzkumným číslem, nikoli jmény subjektů. Injekce kmenových buněk nebo fyziologického roztoku jsou náhodně určeny počítačovým systémem a nebudou subjektům sdělovány. Subjektové skupiny neinformovaly intervenující, že každou injekci připravil asistent a stříkačka byla překryta černou látkou. Operátor ani účastníci by nevěděli, která droga byla injekčně aplikována. Hodnocení provádí třetí strana a seskupení nebude hodnotiteli sděleno. Po předběžném screeningu kvalifikovaných subjektů, po podpisu informovaného souhlasu a ověření vstupních/vylučovacích kritérií výzkumnou jednotkou a potvrzení, že splňují výběr kritérií, podle výsledků náhodného systému, rozdělení předmětů je striktně prováděno podle náhodných výsledků. Záznamy o vstupu předmětu: Výzkumníci by měli vyplnit odpovídající záznamové formuláře podle pořadí přihlášených účastníků, včetně screeningového formuláře , identifikační formulář a evidenční formulář o zápisu účastníků. Všechny zkušební listy týkající se výzkumu je třeba přiložit k originálnímu záznamovému listu, který si výzkumník vede. Původní tabulka záznamů je také původním záznamem této studie, která je monitorována podle principu správné klinické praxe (GCP).

Počet požadovaných případů:

Pro testování účinnosti terapie kmenovými buňkami v léčbě ischemické nekrózy dolních končetin u diabetických pacientů byly subjekty náhodně rozděleny do skupiny léčené kmenovými buňkami a kontrolní skupiny. Obě skupiny dostávaly rutinní léčbu, zatímco skupina léčená kmenovými buňkami by dostávala terapii kmenovými buňkami. Podle výsledků Lu Debin et al. může efektivní míra terapie kmenovými buňkami u ischemické nekrózy dolních končetin u diabetických pacientů dosáhnout 83,3 %, zatímco efektivní míra v kontrolní skupině je 45 %. V této studii bude použit oboustranný test, přičemž se vezme alfa = 0,05, beta = 0,1 a velikost vzorku se vypočítá podle následujícího vzorce .N=(Ualpha+Ubeta)22P(1-P)/(P1-P )2N je velikost vzorku požadovaná pro každou léčebnou skupinu. V této studii byla velikost vzorku rozdělena do dvou skupin a velikost vzorku každé skupiny byla stejná.

Ualpha a Ubeta jsou standardní normální odchylky odpovídající alfa a beta. Při pohledu na kvantilovou tabulku normálního rozdělení můžeme vidět, že Ualpha(0,05)=1,65, Ubeta(0,1)=1,28.

P° a P1 představují účinné rychlosti kontrolní skupiny a skupiny léčené kmenovými buňkami, v daném pořadí. V této studii P° = 45 %, P1 = 83,3 %; P = (P 0 + P 1) / 2 = (0,45 + 0,8333) / 2 = 0,6416, Výše ​​uvedené parametry a číselné hodnoty jsou zavedeny do výpočtu vzorce.

N=(1,65+1,28)2*2*0,6416(1-0,6416)/(0,833-0,45)2=26,8732≈27 Ve dvou skupinách bylo 54 pacientů. Vzhledem k tomu, že někteří pacienti mohou ze studie odstoupit, byla původní velikost vzorku přidána k 10 % velikosti vzorku a konečná velikost vzorku studie byla 60.

Použití, dávkování, doba a průběh léčby preparáty z kmenových buněk:

1. Preparace kmenových buněk: kmenové buňky získané z autologního tuku.
2. Použití: Injekce svalů dolních končetin. Anestezie po transplantaci tukových kmenových buněk byla provedena lumbální anestezií; purifikované tukové kmenové buňky byly intramuskulárně injikovány do dolních končetin v intervalech 3 cm, které mohly být injikovány do přibližně 50 bodů, 0,5 ml suspenze kmenových buněk v každém bodě, přibližně 1 x 106 buněk, 25 bodů do dolních končetin, 25 bodů do chodidla a dobrý pocit a celkový počet transplantovaných buněk byl přibližně 1 x 108; (Současně byl odstraněn vřed s infekcí a byl zadržen asi 1 ml buněčné suspenze.) Byla provedena subkutánní injekce vředu na spodině a kolem vředu, tj. lokální injekce povrchu rány.
3. dávka: Buňky (1 x 108 buněk) byly smíchány ve 25 ml fyziologického roztoku.
4. průběh léčby: jednorázová intramuskulární injekce.

Kritéria pro přerušení a ukončení klinického výzkumu:

1. Přerušení výzkumu 1.1 Subjekty dobrovolně odstoupí ze studie kdykoli, aniž by to ovlivnilo další léčbu.

   1.2 Vyskytly se následující nežádoucí příhody (hlavně odkazující na Common Terminology Criteria for Adverse Events (NCI-CTCAE) National Cancer Institute).(1) horečka, synkopa, pocení, zvracení a další systémové příznaky s neznámými příčinami; (2) dysfunkce gastrointestinálního traktu s neznámými příčinami, ztráta chuti k jídlu, nevolnost, abdominální distenze, zácpa nebo průjem; (3) bolest hlavy, únava, nevysvětlitelná bolest svalů, nepohodlí a změny spánku; Psychické příznaky jako úzkost, podrážděnost, nevysvětlitelné poruchy zraku, svalový třes, dysurie atd. Lokální projevy jako kožní makula, erytém atd. Místní zhoršení bolesti nebo snížený rozsah aktivity, _Akutní příznaky otravy nebo smrt.

   1.3 Výzkumníci se domnívají, že dochází k závažnému porušování výzkumných programů nebo nesprávnému seskupování.

   1.4 Výzkumníci se domnívají, že výzkumný program má bezpečnostní problémy. 1,5 subjektů nebylo dotazováno. Pokud účastníci přeruší léčbu předem, musí být příčina přerušení zdokumentována ve formuláři Case report form (CRF), ale je nutné sledování až do konce studie a vyplnění studijního formuláře.

2. Koncový bod studie 2.1 Mezi koncem léčby a koncem sledování se vyskytly závažné nežádoucí účinky související s léčbou.

2.2 Na konci sledování, ve srovnání s kontrolní skupinou, hojení vředů, míra záchrany končetiny, Ruthfordův stupeň, doba bezbolestné chůze, kotník-pažní index (ABI), transkutánní parciální tlak kyslíku (TcPO2), laboratorní vyšetření a vaskulární magnetická rezonance (MRA) se výrazně zlepšila, což ukazuje na účinnost (se statistickými rozdíly): Kritéria pro hodnocení účinnosti

Ve srovnání s kontrolní skupinou, rychlost hojení vředů, míra záchrany končetin, ultrazvuk cév dolních končetin, kotník-pažní index (ABI), perkutánní parciální tlak kyslíku (TcPO2), víceřezová spirální CT angiografie (CTA), Rutherford grading, Skóre bolesti Wong-Baker Faces u subjektů se významně zlepšilo ve srovnání s kontrolní skupinou, což ukazuje na účinnost (se statistickými rozdíly):

Hlavní ukazatele hodnocení:

1. Bylo vypočteno hojení a amputace vředů. Míra hojení vředů = počet případů úplného zhojení ran / celkový počet vředů v této skupině; amputace = počet amputací / celkový počet případů v této skupině.

2 Sekundární observační indikátory Ultrazvuk cév dolních končetin, kotníkový index (ABI), perkutánní parciální tlak kyslíku (TcPO2), spirální CT angiografie s více řezy (CTA), Rutherfordova klasifikace, skóre bolesti Wong-Baker Faces.

Požadavky na zaznamenávání nežádoucích příhod a metody hlášení a opatření pro řešení závažných nežádoucích příhod Před zahájením experimentu formulujte podrobné a standardizované "Mechanismy řízení rizik a opatření pro zpracování událostí poškození pro klinický výzkum kmenových buněk". Všechny subjekty, které dostaly injekci kmenových buněk do svalu dolní končetiny, se stanou účinnou populací pro analýzu bezpečnosti. Vědci budou věrně zaznamenávat vedlejší účinky a nežádoucí příhody subjektů a analyzovat příčiny.

1. Nežádoucí příhody jsou definovány jako nežádoucí a neočekávané zdravotní příhody během léčby a sledování, včetně: (1) systémových příznaků, jako je horečka, synkopa, pocení a zvracení s neznámými příčinami; (2) gastrointestinální dysfunkce s neznámými příčinami, anorexie, nauzea, abdominální distenze, zácpa nebo průjem; a (3) bolest hlavy, únava, nevysvětlitelná bolest svalů, Ne. Vhodnost a změny ve spánku atd. (4) Mentální symptomy, jako je nevysvětlitelná úzkost, neklid a neklid; (5) Zrakové postižení, svalový třes, dysurie atd. (5) Lokální projevy jako kožní makula a erytém; (5) lokální zhoršení bolesti nebo snížený rozsah aktivity; a (5) příznaky akutní otravy nebo smrt.
2. Závažné nežádoucí příhody (SAE) jsou definovány jako příhody vyžadující hospitalizaci, prodloužení hospitalizace, invaliditu, ovlivňující pracovní schopnost, ohrožující život nebo smrt, vrozené vývojové vady atd. Závažnost nežádoucích účinků musí být zaznamenána a odstupňována podle kritérií CTCAE. Vztah mezi SAE a léčbou by měl být hodnocen podle následujících definic. (1) Irelevantní: Existují důkazy, že příčinou nežádoucích účinků není intraartikulární injekční terapie (jako jsou minulé stavy, potenciální onemocnění, komplikace); 2) související: nežádoucí příhody souvisejí s časem s intraartikulární injekcí léků a je známo nebo existuje podezření, že intramuskulární injekce léků do dolních končetin může způsobit nežádoucí příhody; 3) neumím posoudit. Nežádoucí příhody je nutné zaznamenat do příslušných částí formuláře Case report form (CRF), které je třeba popsat jako: datum zahájení a ukončení; nežádoucí účinky; zda vedou k vystoupení ze studie; zda souvisí s intramuskulárními injekcemi léků do dolních končetin; a zda se jedná o závažné nežádoucí účinky.

Hlášení závažných nežádoucích příhod

Časový limit hlášení:

Do 24 hodin od doby, kdy se pozorovatelé dozvěděli o čase závažných nežádoucích příhod. Režim hlášení Telefonicky nebo faxem a vyplňte Formulář záznamu o závažných nežádoucích příhodách a odešlete jej hlavním výzkumníkům, deklaračním jednotkám, etickým komisím a Státnímu úřadu pro kontrolu potravin a léčiv