脂肪干细胞治疗糖尿病足的临床研究

研究设计：设计了一项随机对照试验。 根据既定的纳入标准/排除标准，采用随机数字表法将研究对象随机分为两组。 根据样本量的估计结果，每组接受脂肪来源的间充质干细胞（MSCs）和常规糖尿病足治疗。 进行了三盲随机对照研究。 受试者是盲人，干预是盲人，评估者是盲人。 受试者随机分组并由协调员协助。 术后7天、1、3、6、12个月5个时间点进行随访，评价受试者的疼痛和功能变化，评价安全性和有效性。

将执行受试者纳入、排除标准和分配方法进入标准和排除标准。

分配分组方法：

进行了三盲随机对照研究。 受试者是盲人，干预是盲人，评估者是盲人。 受试者随机分组并由协调员协助。 收到随机数后，测试标本和注射剂将标有研究编号，而不是受试者姓名。 注射干细胞或生理盐水由计算机系统随机决定，不会向受试者透露。 受试者组不会告诉干预者每次注射都是由助手准备的，注射器上盖着黑布。 操作者和参与者都不知道注射了哪种药物。 评价由第三方完成，分组情况不会向评价者透露。经初步筛选符合条件的受试者，经研究单位签署知情同意书并核实进入/排除标准，确认符合入选条件准，根据随机系统的结果，严格按照随机结果进行受试者分配。 、参会人员报名身份证明表和备案表。 所有与研究相关的测试表都需要附在研究者保存的原始记录表上。 原始记录表也是本研究的原始记录，按照药品临床试验质量管理规范（GCP）原则进行监测。

所需案例数：

为检验干细胞疗法治疗糖尿病患者下肢缺血性坏死的有效性，将受试者随机分为干细胞治疗组和对照组。 两组均接受常规治疗，干细胞治疗组接受干细胞治疗。 根据卢德斌等的研究结果，干细胞治疗糖尿病患者下肢缺血坏死的有效率可达83.3%，而对照组的有效率仅为45%。 本研究采用双侧检验，取alpha=0.05，beta=0.1，根据以下公式计算样本量。N=(Ualpha+Ubeta)22P(1-P)/(P1-P )2 N 是每个治疗组所需的样本量。 本研究将样本量分为两组，每组样本量相同。

Ualpha和Ubeta分别是alpha和beta对应的标准正态差。 查看正态分布的分位数表，我们可以看到Ualpha(0.05)=1.65， Ubeta(0.1)=1.28。

P 0 和P 1 分别代表对照组和干细胞治疗组的有效率。 在本研究中，P 0 = 45%，P 1 = 83.3%； P = (P 0 + P 1) / 2 = (0.45 + 0.8333) / 2 = 0.6416，将以上参数和数值引入公式计算。

N=(1.65+1.28)2*2*0.6416(1-0.6416)/(0.833-0.45)2=26.8732≈27 两组共54例患者。 考虑到部分患者可能退出研究，将原样本量增加到样本量的10%，最终研究样本量为60。

干细胞制剂的用途、用量、时间和疗程：

1. 干细胞制备：来源于自体脂肪的干细胞。
2. 用法：下肢肌肉注射。 脂肪干细胞移植麻醉采用腰麻；纯化后的脂肪干细胞以3cm的间隔肌肉注射到下肢，可注射约50个点，每点0.5ml干细胞悬液，约1×106个细胞，下肢25个点，足底25个点和幸福感，移植细胞总数约为1×108； （同时清创感染的溃疡，保留约1ml细胞悬液。） 溃疡基底部及周围皮下注射，即创面局部注射。
3. 剂量：将细胞（1 x 108 个细胞）混合在 25 mL 盐水中。
4. 疗程：一次性肌肉注射。

中止和终止临床研究的标准：

1. 研究中止 1.1 受试者在不影响进一步治疗的情况下，随时自愿退出研究。

   1.2 发生以下不良事件（主要参照美国国家癌症研究所不良事件通用术语标准（NCI-CTCAE））。 （1）不明原因的发热、晕厥、出汗、呕吐等全身症状； (2)不明原因的胃肠道功能障碍、食欲不振、恶心、腹胀、便秘或腹泻； (3)头痛、乏力、不明原因的肌肉疼痛、不适和睡眠改变；精神症状如焦虑、易激惹、不明原因的视力障碍、肌肉震颤、排尿困难等。局部表现如皮肤斑点、红斑等。局部疼痛加重或活动范围缩小，急性中毒症状或死亡。

   1.3 研究者认为存在严重违反研究方案或错误分组的。

   1.4 研究人员认为研究项目存在安全问题。 1.5 受试者未接受采访。 如果参与者提前中断治疗，中断原因必须记录在病例报告表（CRF）中，但需要随访直至研究结束并填写研究表。

2. 研究终点 2.1 严重的治疗相关不良事件发生在治疗结束和随访结束之间。

2.2 随访结束时与对照组比较，溃疡愈合、保肢率、Ruthford分级、无痛步行时间、踝臂指数（ABI）、经皮氧分压（TcPO2）、实验室检查及血管磁共振成像 (MRA) 显着改善，表明有效性（具有统计学差异）：评价疗效的标准

与对照组比较，溃疡愈合率、保肢率、下肢血管超声、踝臂指数（ABI）、经皮氧分压（TcPO2）、多层螺旋CT血管造影（CTA）、Rutherford分级、受试者的 Wong-Baker Faces 疼痛评分较对照组明显改善，说明有效（有统计学差异）：

主要评价指标：

1.计算溃疡愈合和截肢。 溃疡愈合率=创面完全愈合例数/本组溃疡总数；截肢率=截肢次数/本组病例总数。

2 二级观察指标 下肢血管超声、踝肱指数（ABI）、经皮氧分压（TcPO2）、多层螺旋CT血管造影（CTA）、Rutherford分级、Wong-Baker Faces疼痛评分。

不良事件的记录要求及严重不良事件的报告方式和处理措施 实验开始前制定详细规范的《干细胞临床研究风险管理机制和损害事件处理办法》。 所有接受下肢肌肉干细胞注射的受试者均成为安全性分析的有效人群。 研究人员会如实记录受试者的副作用和不良事件，并分析原因。

1. 不良事件定义为在治疗和随访期间发生的不良和意外的医疗事件，包括：（1）不明原因的全身症状，如发热、晕厥、出汗和呕吐； (2)不明原因的胃肠功能障碍、厌食、恶心、腹胀、便秘或腹泻； (3)头痛、乏力、不明原因的肌肉疼痛、不适应和睡眠改变等。 (4)不明原因的焦虑、烦躁不安等精神症状； (5)视力障碍、肌肉震颤、排尿困难等。 (5)皮肤出现斑点、红斑等局部表现； (5)局部疼痛加重或活动范围缩小； (五)出现急性中毒症状或死亡。
2. 严重不良事件（SAEs）定义为需要住院治疗、延长住院治疗、残疾、影响工作能力、危及生命或死亡、先天性畸形等事件。 不良事件的严重程度必须根据 CTCAE 标准进行记录和分级。 应根据以下定义评估 SAE 与治疗之间的关系。 (1) 无关：有证据表明不良事件的原因不是关节内注射治疗（如既往情况、潜在疾病、并发症）； 2）相关性：不良事件与药物关节内注射具有时间相关性，已知或怀疑下肢肌肉注射药物可引起该不良事件； 3）无法评估。 不良事件需要记录在Case report form(CRF)相关部分，需要描述为：开始日期和结束日期；不良事件结果；它们是否导致退出研究；是否与下肢肌肉注射药物有关；以及它们是否是严重的不良事件。

严重不良事件的报告

申报时限：

在观察者知道严重不良事件发生时间的 24 小时内。 报告方式 电话或传真，填写《严重不良事件备案表》，发送给主要研究者、申报单位、伦理委员会和国家食品药品监督管理总局