Vlastní odběr vzorků pro studii COVID-19

3.1.1 Populace studie: Vyšetřovatelé zařadí pacienty do větší klinické validační studie testu iAMP® proti zlatému standardu (test doporučený CDC), dokud prospektivně neshromáždíme celkem 100 pozitivních případů. Současná pozitivita v regionu je přibližně 20 %, bude tedy potřeba přibližně 500 vzorků. Kritéria pro zařazení jsou následující: Pacienti starší 18 let, kteří se hlásí k testování na COVID-19, jsou schopni tolerovat výtěry z nosohltanu a jsou schopni dodržovat pokyny pro vlastní odběr. Kritéria vyloučení jsou následující: neschopnost nebo ochota poskytnout informovaný souhlas a/nebo spolehlivé kontaktní informace.

3.1.2 Klinická návštěva: K symptomatickým pacientům bude přistupovat poskytovatel studie s PPE. Studie bude vysvětlena, a pokud pacient souhlasí, bude souhlas. Pacienti budou moci souhlasit pouze se dvěma výtěry z nosohltanu nebo se všemi pěti výtěry. Po souhlasu podstoupí každý pacient testování se současným umístěním dvou nazofaryngeálních výtěrů lékařem pro rozsáhlé klinické ověření. Jeden bude skladován suchý ve zkumavce a jeden bude umístěn do virového sběrného média. Pacienti, kteří souhlasí se studií s vlastním odběrem vzorků, budou převezeni do soukromé oblasti pro odběr tří různých vzorků. Po obdržení písemných instrukcí a zhlédnutí krátkého instruktážního videa bude pacientovi pod dohledem klinického lékaře odebrán vzorek ze střední turbiny. Lékař poté odejde a pacient si sám odebere vzorky z předních nosních dutin a slin. Všechny vzorky budou skladovány v suchu. Když pacient vrátí vzorky koordinátorovi výzkumu, bude dotázán na jakékoli vedlejší účinky nebo nežádoucí příhody ze vzorku ve střední části turbíny.

3.1.3 Laboratorní testování: Suchý tampon se odebere ze dvou ze tří míst odběru vzorků iAMP® – střední turbiny a předních nosů – a umístí se do lahvičky s proprietárním pufrem (dále jen Sample Buffer A). Pro sliny bude pro odběr vzorku použit sterilní odběrový kelímek a Sample Buffer A bude přidán přímo do sterilního odběrového kelímku. Každý ze tří vzorků s přidaným vzorkovým pufrem A bude inkubován při pokojové teplotě po dobu 15 minut. Ve zkumavce bude připravena patentovaná multiplexní směs (master mix) a do zkumavky se přidá 10 mikrolitrů vzorku z lahvičky (střední skořepina a nos) nebo pohárku (sliny). Zkumavka se poté umístí do přístroje RT-PCR a provede se až do dokončení testu. Výsledek testu bude buď pozitivní, negativní nebo neplatný (test se bude opakovat) a výsledek bude porovnán s anonymizovaným výsledkem testu nasofaryngu s testem NAAT doporučeným CDC.

Pokyny pro subjekty, jak správně odebrat tampony z každého místa. [Vatové tampony by měly být sevřené a zúžené].

Střední turbína:

• Důkladně si umyjte a osušte ruce
• Vezměte sterilní vatový tampon a držte jej za stopku v dominantní ruce
• Otevřete prázdnou lahvičku na odběr iAMP a držte ji v druhé ruce
• Nakloňte hlavu dozadu tak, aby brada byla zhruba rovnoběžná se zemí (~70º)
• Vložte vatový tampon ke značce na stonku (jeden palec nebo ~2 cm) a 3krát vatovým tamponem zcela otočte (360º).
• Odstraňte tampon a aniž byste se dotkli vatového tamponu, opakujte proces na druhé straně se stejným vatovým tamponem
• Odstraňte tampón z nosu, nedotýkejte se vatové špičky a vložte tampon, vatovou špičkou napřed, do lahvičky
• Odlomte horní stonku vatového tamponu
• Nasaďte víčko na lahvičku a bezpečně ji uzavřete
• Dejte uzavřenou lahvičku výzkumnému personálu

Přední nosy:

• Důkladně si umyjte a osušte ruce
• Vezměte sterilní vatový tampon a držte jej za stopku v dominantní ruce
• Otevřete prázdnou lahvičku na odběr iAMP® a držte ji v druhé ruce
• Vložte vatový tampon do jedné nosní dírky tak dlouho, dokud bavlněná špička již není viditelná (~0,5 palce nebo 1 cm)
• Otočte jej úplně uvnitř nosu (360º) 3krát a nechte jej na místě po dobu 10-15 sekund
• Vyjměte tampón a aniž byste se dotkli vatové špičky, opakujte proces v druhé nosní dírce, opět zasuňte vatovou tyčinku pouze do té doby, než přestane být vidět vatová špička, otočte jím 3x a nechte na místě 10-15 sekund
• Vyjměte tampón, nedotýkejte se vatové špičky a vložte tampon, vatovou špičkou napřed, do lahvičky
• Odlomte horní stonku vatového tamponu
• Nasaďte víčko na lahvičku a bezpečně ji uzavřete
• Dejte uzavřenou lahvičku výzkumnému personálu

Sliny:

• Nejezte, nepijte, nekuřte ani nežvýkejte žvýkačku do 30 minut po odběru
• Vezměte sterilní kalíšek na moč a opakovaně do něj plivete, dokud nezůstanou 2–3 mililitry tekutiny (kromě bublin). Příklad potřebného množství slin viz obrázek níže
• Udržujte vnitřek kalíšku sterilní tím, že do kalíšku NEVKLÁDÁTE nic (prsty, předměty atd.).
• Jakmile se shromáždí dostatečné množství slin, umístěte uzávěr na horní část šálku a bezpečně jej uzavřete
• Dejte uzavřený pohár výzkumnému personálu

3.1.4 Statistické zdůvodnění Za předpokladu, že 20 % vzorků testovaných testem NAAT bude pozitivních na COVID-19, studie 500 po sobě jdoucích vzorků poskytne 100 případů COVID-19 detekovaných testem NAAT. Tato studie bude schopna odhadnout 95% interval spolehlivosti (CI) pro senzitivitu a specificitu uvedenou v tabulce níže pro skutečnou senzitivitu a specificitu v rozmezí od 50 % do 95 %. Přesnost se zlepšuje, čím více se citlivost a specificita liší od 50 %.

Tabulka 1: 95% intervaly spolehlivosti pro detekci citlivosti a specificity Skutečná citlivost Senzitivita 95 % CI Skutečná specificita Specificita 95 % CI 50 % 39,8 % - 60,2 % 50 % 45,0 % - 55,0 % 70 % 60,0 % - 78,85 % 70 % 74,5 % 90 % 82,4 % – 95,1 % 90 % 86,6 % – 92,8 % 95 % 88,7 % – 98,4 % 95 % 92,3 % – 96,9 %

3.1.5 Rizika/bezpečnost Jediným rizikem této studie je další expozice laboratorního personálu provádějícího test. Všichni zúčastnění laboranti jsou vyškoleni v zacházení s infekčními agens, jako je COVID-19. Při manipulaci se vzorky budou použita všechna standardní opatření, včetně alikvotních vzorků v digestoři pro biologickou bezpečnost a použití osobních ochranných prostředků. Důvěrnost pacienta bude zajištěna anonymizací vzorků pacientů, jak bylo dříve schváleno MCW IRB.

3.1.6 Analýza. Citlivost a specificita budou odhadnuty pro každý test iAMP®, stejně jako odpovídající 95% přesné intervaly spolehlivosti s použitím testu NAAT jako referenčního standardu.

3.1.7 Potenciální klinická omezení

1. Alternativní anatomická místa budou mít nižší citlivost než výtěry z nosohltanu. Je možné, že vlastnoručně odebrané výtěry budou mít výrazně nižší citlivost než výtěry z nosohltanu. Je nepravděpodobné, že tomu tak bude, protože virová zátěž tímto novým virem je velmi vysoká
2. Subjekty mohou odmítnout provedení několika výtěrů. Pacienti mohou odmítnout podat 5 vzorků. Vzhledem k tomu, že je nepravděpodobné, že by samoshromážděné stránky způsobovaly nepohodlí, očekáváme, že většina účastníků bude souhlasit s účastí ve studii. I když mnoho pacientů nesouhlasí s účastí, 700 pacientů denně vykazuje příznaky, což je velká skupina potenciálních účastníků, díky nimž bude možné dosáhnout našeho cíle. Vyšetřovatelé možná budou muset pokračovat v zápisu, dokud nebude mít 100 osob s COVID-19 +, které si sami shromáždili, pokud některé subjekty odmítnou další testy.

3.2 Konkrétní cíl 2. Vyhodnoťte výskyt nežádoucích příhod u samostatně odebraného vzorku střední turbináty. Podle návodu k použití (IFU) je nutné odebírat výtěry ze středních turbinátů pod lékařským dohledem,13 který CDC posiluje. Bylo provedeno několik studií, které prokázaly, že vzorky ze středních turbinátů jsou účinné pro detekci jiných respiračních onemocnění.14-17 Vzhledem k tomu, že odběr středních turbinátů může mít vyšší senzitivitu než testování předních nosů nebo slin, je důležité prokázat, že je lze bezpečně odebrat bez klinického dohledu. Ačkoli někteří pacienti mohou být schopni provést odběr v polovině turbinátu prostřednictvím telehealth návštěvy, bylo by to překážkou širokého rozsahu. Vyšetřovatelé tak umožní pacientům, aby si sami odebrali vzorek ze střední turbiny pomocí odběrového tamponu. Tampon bude mít indikační čáru signalizující průměrnou délku k dosažení oblasti střední turbiny u dospělých (přibližně 1 palec nebo 2 cm). Poskytovatel zdravotní péče pak pacienta vyhodnotí z hlediska jakýchkoli nežádoucích příhod souvisejících s vlastním odběrem pacienta, jako je bolest a/nebo krvácení. Pokud výskyt nežádoucích příhod chybí nebo je velmi nízký (méně než 5 %) a citlivost vzorku ve střední části nosu je lepší než u předních nosních dutin, může být pacientům umožněno odebírat vzorky ze své vlastní oblasti uprostřed nosu bez lékařského dohledu. Podíl účastníků, u kterých se vyskytl každý typ nežádoucí příhody, bude odhadnut spolu s odpovídajícím 95% přesným intervalem spolehlivosti.

4.0 Shrnutí Pandemie Covid-19 vyvolala globální krizi, která zasahuje všechny sektory společnosti. Aby se snížily katastrofální ekonomické a zdravotní dopady tohoto viru, bude nezbytná dostupnost bezpečného, ​​levného a spolehlivého testování. Tento projekt si klade za cíl studovat samosběr levného rychlého testu (iAMP®) ve třech anatomických oblastech – střední skořepina, nos a sliny – které, pokud budou ověřeny, mohou pomoci učinit z rozsáhlého testování skutečnou možnost. Sekundárním cílem je ukázat, že všechny tyto oblasti lze bezpečně odebrat sami bez nutnosti dohledu lékaře. Snížení překážek testování a zpracování Covid-19 pomůže zmírnit tuto krizi a umožní návrat k běžným činnostem.