Zelfbemonstering voor de studie van COVID-19

3.1.1 Studiepopulatie: De onderzoekers zullen patiënten opnemen in een grotere klinische validatiestudie van de iAMP®-test tegen de gouden standaard (de door de CDC aanbevolen test) totdat we prospectief in totaal 100 positieve gevallen hebben verzameld. De huidige positiviteit in de regio is ongeveer 20%, daarom zijn er ongeveer 500 monsters nodig. De opnamecriteria zijn als volgt: Patiënten ouder dan 18 jaar die zich presenteren voor COVID-19-testen, in staat zijn om nasofaryngeale uitstrijkjes te verdragen en instructies voor zelfafname kunnen volgen. Uitsluitingscriteria zijn als volgt: niet in staat of bereid om geïnformeerde toestemming en/of betrouwbare contactgegevens te geven.

3.1.2 Klinisch bezoek: Symptomatische patiënten zullen worden benaderd door een onderzoeksaanbieder die persoonlijke beschermingsmiddelen draagt. De studie zal worden uitgelegd en als de patiënt ermee instemt, zullen ze ermee instemmen. Patiënten mogen toestemming geven voor alleen de twee nasofaryngeale uitstrijkjes of voor alle vijf uitstrijkjes. Na toestemming wordt elke patiënt getest met gelijktijdige plaatsing van twee nasofaryngeale uitstrijkjes door een arts voor grootschalige klinische validatie. Eén wordt droog in een buis bewaard en één wordt in viraal verzamelmedium geplaatst. Patiënten die instemmen met het zelfafnameonderzoek zullen naar een privéruimte worden gebracht voor het verzamelen van drie verschillende monsters. Na het ontvangen van schriftelijke instructies en het bekijken van een korte instructievideo, wordt het midden van de neusschelpmonster door de patiënt verzameld onder toezicht van een arts. De clinicus gaat dan weg en de patiënt neemt zelf monsters van de voorste neusgaten en het speeksel. Alle monsters worden droog bewaard. Wanneer de patiënt de monsters terugstuurt naar de onderzoekscoördinator, wordt hem gevraagd naar eventuele bijwerkingen of bijwerkingen van het middenturbinaatmonster.

3.1.3 Laboratoriumtesten: Er wordt een droog uitstrijkje genomen van twee van de drie iAMP®-zelfafnamelocaties - midden neusschelp en voorste neus - en in een flesje met de eigen buffer (hierna aangeduid als monsterbuffer A). Voor speeksel wordt een steriele opvangbeker gebruikt voor de monsterafname en monsterbuffer A wordt rechtstreeks aan de steriele opvangbeker toegevoegd. Elk van de drie monsters met de toegevoegde monsterbuffer A wordt gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd. Een gepatenteerd multiplexmengsel (mastermix) wordt bereid in een reageerbuis en 10 microliter van het monster uit de flacon (midden neusschelp en neus) of beker (speeksel) wordt aan de reageerbuis toegevoegd. De reageerbuis wordt vervolgens in de RT-PCR-machine geplaatst en uitgevoerd totdat de test is voltooid. Het resultaat van de assay is positief, negatief of ongeldig (test moet worden herhaald) en het resultaat wordt vergeleken met het geanonimiseerde resultaat van de nasofaryngeale testrun met de door de CDC aanbevolen NAAT-assay.

Instructies voor proefpersonen over het correct verzamelen van de uitstrijkjes van elke locatie. [Wattenstaafjes moeten gevlokt en taps toelopend zijn].

Midden-turbinate:

• Was en droog de handen grondig
• Neem een ​​steriel wattenstaafje en houd het bij het steeltje in je dominante hand
• Open het lege iAMP-verzamelflesje en houd het in de andere hand
• Kantel uw hoofd naar achteren zodat de kin ongeveer evenwijdig aan de grond is (~70º)
• Steek het wattenstaafje tot aan de markering op de steel (één inch, of ~2 cm) en draai het wattenstaafje 3 keer volledig (360º).
• Verwijder het wattenstaafje en herhaal het proces aan de andere kant zonder het wattenstaafje aan te raken met hetzelfde wattenstaafje
• Verwijder het wattenstaafje uit de neus, raak het wattenstaafje niet aan en plaats het wattenstaafje eerst in de flacon
• Breek de bovenste steel van het wattenstaafje af
• Plaats de dop terug op de injectieflacon en sluit deze goed af
• Geef de gesloten flacon aan het onderzoekspersoneel

Voorste neusgaten:

• Was en droog de handen grondig
• Neem een ​​steriel wattenstaafje en houd het bij het steeltje in je dominante hand
• Open het lege iAMP®-verzamelflesje en houd het in de andere hand
• Steek het wattenstaafje in één neusgat totdat het wattenstaafje niet meer zichtbaar is (~ 0,5 inch of 1 cm)
• Draai het 3 keer volledig in de neus (360º) en laat het 10-15 seconden op zijn plaats
• Verwijder het wattenstaafje en zonder het wattenstaafje aan te raken, herhaalt u het proces in het andere neusgat, waarbij u het wattenstaafje opnieuw inbrengt totdat het wattenstaafje niet meer zichtbaar is, 3 keer ronddraait en 10-15 seconden op zijn plaats laat
• Verwijder het wattenstaafje, raak het wattenstaafje niet aan en plaats het wattenstaafje, het wattenstaafje eerst, in de flacon
• Breek de bovenste steel van het wattenstaafje af
• Plaats de dop terug op de injectieflacon en sluit deze goed af
• Geef de gesloten flacon aan het onderzoekspersoneel

Speeksel:

• Eet, drink, rook of kauwgom niet binnen 30 minuten na het verzamelen
• Neem een ​​steriele urinebeker en spuug er herhaaldelijk in totdat er 2-3 milliliter vloeistof is (exclusief luchtbellen). Zie onderstaande afbeelding voor een voorbeeld van de benodigde hoeveelheid speeksel
• Houd de binnenkant van de beker steriel door NIETS (vingers, voorwerpen enz.) in de beker te plaatsen
• Zodra er voldoende speeksel is verzameld, plaatst u de dop op de bovenkant van de beker en sluit u deze stevig
• Gesloten beker aan onderzoekspersoneel geven

3.1.4 Statistische onderbouwing Ervan uitgaande dat 20% van de met de NAAT-assay geteste monsters COVID-19-positief zal zijn, levert een onderzoek van 500 opeenvolgende monsters 100 COVID-19-gevallen op die door de NAAT-assay worden gedetecteerd. Deze studie zal in staat zijn om het 95% betrouwbaarheidsinterval (BI) voor sensitiviteit en specificiteit te schatten zoals aangegeven in de onderstaande tabel voor echte sensitiviteit en specificiteit variërend van 50% tot 95%. De precisie verbetert hoe verder de gevoeligheid en specificiteit verschillen van 50%.

Tabel 1: 95% betrouwbaarheidsintervallen voor het detecteren van sensitiviteit en specificiteit Ware gevoeligheid Sensitiviteit 95% BI Ware specificiteit Specificiteit 95% BI 50% 39,8% - 60,2% 50% 45,0% - 55,0% 70% 60,0% - 78,8% 70% 65,2% - 74,5% 90% 82,4% - 95,1% 90% 86,6% - 92,8% 95% 88,7% - 98,4% 95% 92,3% - 96,9%

3.1.5 Risico's/Veiligheid Het enige risico van dit onderzoek is de extra blootstelling van het laboratoriumpersoneel dat de test uitvoert. Alle betrokken laboranten zijn getraind in het omgaan met besmettelijke agentia zoals COVID-19. Alle standaard voorzorgsmaatregelen zullen worden gebruikt voor het hanteren van de monsters, inclusief het aliquoteren van monsters in een bioveiligheidskap en het gebruik van persoonlijke beschermingsmiddelen. De vertrouwelijkheid van de patiënt wordt gewaarborgd door het anonimiseren van patiëntmonsters, zoals eerder goedgekeurd door de MCW IRB.

3.1.6 Analyse. Gevoeligheid en specificiteit worden geschat voor elke iAMP®-test, evenals de bijbehorende 95% exacte betrouwbaarheidsintervallen met behulp van de NAAT-assay als referentiestandaard.

3.1.7 Potentiële klinische beperkingen

1. Alternatieve anatomische plaatsen zullen een lagere gevoeligheid hebben dan nasofaryngeale uitstrijkjes. Het is mogelijk dat de zelf afgenomen uitstrijkjes aanzienlijk minder gevoelig zijn dan nasofaryngeale uitstrijkjes. Dit is waarschijnlijk niet het geval omdat de virale belasting met dit nieuwe virus erg hoog is
2. Proefpersonen kunnen weigeren om meerdere uitstrijkjes te laten nemen. Patiënten kunnen weigeren om 5 monsters af te staan. Aangezien het onwaarschijnlijk is dat de zelf verzamelde sites ongemak veroorzaken, verwachten we dat de meeste deelnemers zullen instemmen met deelname aan de studie. Zelfs als veel patiënten niet akkoord gaan om deel te nemen, zijn er 700 patiënten per dag met symptomen die een grote pool van potentiële deelnemers mogelijk maken, wat het haalbaar zal maken om ons doel te bereiken. De onderzoekers moeten mogelijk doorgaan met inschrijven totdat er 100 zelf verzamelde COVID-19 + -proefpersonen zijn als sommige proefpersonen aanvullende tests weigeren.

3.2 Specifiek doel 2. Evalueer de incidentie van ongewenste voorvallen in een zelf afgenomen monster uit de midden van de neusschelp. Volgens de gebruiksaanwijzing (IFU) moeten uitstrijkjes in het midden van de neusschelp worden afgenomen onder medisch toezicht,13 wat door de CDC wordt bekrachtigd. Er zijn meerdere onderzoeken geweest die hebben aangetoond dat monsters uit het midden van de neusschelp effectief zijn voor het opsporen van andere aandoeningen van de luchtwegen.14-17 Aangezien het verzamelen van de neusschelpen in het midden van de neusschelp mogelijk gevoeliger is dan het testen van de voorste neusgaten of speeksel, is het belangrijk om aan te tonen dat het veilig kan worden verzameld zonder klinisch toezicht. Hoewel sommige patiënten mogelijk een mid-turbinaatverzameling kunnen uitvoeren via een telehealth-bezoek, zou dit een belemmering vormen voor grootschalige opschaling. Zo zullen de onderzoekers patiënten in staat stellen zelf een monster uit het midden van de neusschelp af te nemen met een uitstrijkje. Het wattenstaafje heeft een indicatielijn die de gemiddelde lengte aangeeft om het midden van de neusschelp te bereiken bij volwassenen (ongeveer 1 inch of 2 cm). De zorgverlener zal de patiënt dan evalueren op eventuele bijwerkingen die verband houden met de zelfinzameling door de patiënt, zoals pijn en/of bloeding. Als de incidentie van bijwerkingen afwezig is of erg laag is (minder dan 5%) en de gevoeligheid van het midden van de neusschelp superieur is aan die van de voorste neusholten, kunnen patiënten toestemming krijgen om hun eigen midden van de neusschelp te bemonsteren zonder medisch toezicht. Het percentage deelnemers dat elk type bijwerking ervaart, wordt geschat samen met een overeenkomstig 95% exact betrouwbaarheidsinterval.

4.0 Samenvatting De Covid-19-pandemie heeft een wereldwijde crisis veroorzaakt die alle sectoren van de samenleving treft. Om de catastrofale economische en gezondheidseffecten van dit virus te verminderen, is de beschikbaarheid van veilige, goedkope en betrouwbare tests noodzakelijk. Dit project heeft tot doel de zelfafname te bestuderen van een goedkope, snelle test (iAMP®) in drie anatomische gebieden - het midden van de neusschelp, de neusgaten en het speeksel - die, indien gevalideerd, kan helpen om wijdverbreide testen een reële mogelijkheid te maken. Het secundaire doel is om te laten zien dat al deze gebieden veilig zelf kunnen worden verzameld zonder toezicht van een arts. Het verminderen van de belemmeringen voor het testen en verwerken van Covid-19 zal helpen om deze crisis te verzachten en de terugkeer naar normale activiteiten mogelijk te maken.