Önmintavétel a COVID-19 vizsgálatához

3.1.1 Vizsgálati populáció: A vizsgálók bevonják a betegeket az iAMP®-teszt nagyobb klinikai validálási vizsgálatába az arany standarddal szemben (a CDC által javasolt teszt), amíg nem gyűjtünk össze összesen 100 pozitív esetet. A jelenlegi pozitivitás a régióban megközelítőleg 20%, ezért kb. 500 mintára lesz szükség. A felvételi kritériumok a következők: 18 évesnél idősebb betegek, akik COVID-19-tesztre jelentkeztek, elviselik az orrgarat-tamponokat, és képesek követni az öngyűjtésre vonatkozó utasításokat. A kizárási kritériumok a következők: nem tud vagy nem hajlandó tájékozott hozzájárulást és/vagy megbízható kapcsolattartási adatokat adni.

3.1.2 Klinikai látogatás: A tünetekkel járó betegeket PPE-t viselő vizsgálati szolgáltató keresi fel. A vizsgálatot elmagyarázzák, és ha a beteg beleegyezik, beleegyezik. A betegek csak a két nasopharyngeális tampon vagy mind az öt mintavételhez járulhatnak hozzá. A beleegyezés után minden pácienst tesztelésnek vetnek alá, és egy klinikus két nasopharyngeális tampont helyez egyidejűleg a nagyszabású klinikai validálás érdekében. Az egyiket szárazon egy csőben, a másikat pedig vírusgyűjtő táptalajba helyezik. Azok a betegek, akik beleegyeznek az önmintavételes vizsgálatba, egy privát területre kerülnek három különböző minta gyűjtése céljából. Írásbeli utasítások kézhezvétele és egy rövid oktatóvideó megtekintése után a páciens a középső turbinamintát egy klinikus felügyelete mellett veszi. A klinikus ezután távozik, és a páciens önállóan mintát vesz az elülső orrból és a nyálból. Minden mintát szárazon kell tárolni. Amikor a páciens visszaküldi a mintákat a kutatási koordinátornak, megkérdezik, hogy milyen mellékhatások vagy nemkívánatos események a középső turbina mintájából származnak.

3.1.3 Laboratóriumi vizsgálat: A három iAMP® önmintavételi hely közül kettőből – a középső és az elülső orrból – száraz tampont gyűjtenek, és a szabadalmaztatott puffert tartalmazó fiolába helyezik (a továbbiakban: A mintapuffer). A nyálhoz steril gyűjtőpoharat használnak a mintavételhez, és az A mintapuffert közvetlenül a steril gyűjtőpohárba kell hozzáadni. A hozzáadott A mintapufferrel ellátott három minta mindegyike szobahőmérsékleten 15 percig inkubálódik. Egy szabadalmaztatott multiplex keveréket (master mix) készítenek egy kémcsőben, és 10 mikroliter mintát adnak a fiolából (középső turbina és nyálkahártya) vagy csésze (nyál) a kémcsőbe. A kémcsövet ezután az RT-PCR gépbe helyezik, és lefuttatják a vizsgálat befejezéséig. A vizsgálat eredménye pozitív, negatív vagy érvénytelen (a tesztet meg kell ismételni), és az eredményt összehasonlítják a CDC által javasolt NAAT assay-vel végzett orrgarat-teszt anonimizált eredményével.

Útmutató az alanyok számára, hogyan kell helyesen gyűjteni a tamponokat az egyes helyszínekről. [A vattapálcikákat pelyhesíteni és elvékonyodni kell].

Középső turbina:

• Alaposan mosson kezet és szárítsa meg
• Vegyünk egy steril vattapamacsot, és tartsuk a száránál fogva domináns kezünkben
• Nyissa ki az üres iAMP gyűjtőüveget, és tartsa a másik kezében
• Döntse hátra a fejét úgy, hogy az álla nagyjából párhuzamos legyen a talajjal (~70º)
• Helyezze be a vattapamacsot a száron lévő jelig (egy hüvelyk vagy ~2 cm), és forgassa el teljesen (360º) háromszor.
• Távolítsa el a pálcikát, és anélkül, hogy megérintené a pamut hegyét, ismételje meg a folyamatot a másik oldalon ugyanazzal a vattacsomóval
• Távolítsa el a pálcikát az orrról, ne érintse meg a pamut hegyét, és helyezze a tampont, először a pamut hegyét az injekciós üvegbe
• Törje le a vattapamacs felső szárát
• Helyezze vissza a kupakot az injekciós üvegre, és szorosan zárja le
• Adja át a lezárt injekciós üveget a kutatószemélyzetnek

Elülső orr:

• Alaposan mosson kezet és szárítsa meg
• Vegyünk egy steril vattapamacsot, és tartsuk a száránál fogva domináns kezünkben
• Nyissa ki az üres iAMP® gyűjtőüveget, és tartsa a másik kezében
• Helyezze a vattacsomót az egyik orrlyukba, amíg a pamut hegye már nem látszik (~0,5 hüvelyk vagy 1 cm)
• Fordítsa el teljesen az orrban (360º) 3-szor, és hagyja a helyén 10-15 másodpercig
• Távolítsa el a pálcikát, és anélkül, hogy megérintené a pamut hegyét, ismételje meg a folyamatot a másik orrlyukban, ismét csak addig helyezze be a vattapálcikát, amíg a vattacsúcs már nem látható, forgassa el 3-szor, és hagyja a helyén 10-15 másodpercig.
• Távolítsa el a pálcikát, ne érintse meg a pamut hegyét, és helyezze a pálcikát, először a pamut hegyét az injekciós üvegbe
• Törje le a vattapamacs felső szárát
• Helyezze vissza a kupakot az injekciós üvegre, és szorosan zárja le
• Adja át a lezárt injekciós üveget a kutatószemélyzetnek

Nyál:

• A begyűjtést követő 30 percen belül ne egyen, igyon, dohányozzon vagy rágjon rágógumit
• Vegyünk egy steril vizelettartó csészét, és köpjünk bele többször, amíg 2-3 milliliter folyadék nem lesz (a buborékok nélkül). A szükséges nyál mennyiségét lásd az alábbi képen
• Tartsa a csésze belsejét sterilen úgy, hogy NE tegyen semmit (ujjakat, tárgyakat stb.) a csészébe
• Ha megfelelő mennyiségű nyál gyűlt össze, helyezze a kupakot a csésze tetejére, és szorosan zárja le
• Adjon zárt poharat a kutatószemélyzetnek

3.1.4 Statisztikai indoklás Feltételezve, hogy a NAAT assay-vel tesztelt minták 20%-a lesz COVID-19 pozitív, egy 500 egymást követő mintát tartalmazó vizsgálat 100 COVID-19 esetet mutat ki a NAAT vizsgálattal. Ez a vizsgálat képes lesz megbecsülni az alábbi táblázatban feltüntetett érzékenység és specificitás 95%-os konfidencia intervallumát (CI) az 50% és 95% közötti valódi szenzitivitásra és specificitásra. A pontosság annál javul, minél jobban eltér az érzékenység és a specificitás az 50%-tól.

1. táblázat: 95%-os konfidencia intervallumok az érzékenység és specificitás kimutatására Valódi érzékenység Érzékenység 95% CI Valódi Specificitás Specificitás 95% CI 50% 39,8% - 60,2% 50% 45,0% - 55,0% 70% 60,0% - 7 - 6 74,5% 90% 82,4% - 95,1% 90% 86,6% - 92,8% 95% 88,7% - 98,4% 95% 92,3% - 96,9%

3.1.5 Kockázatok/Biztonság A vizsgálat egyetlen kockázata a vizsgálatot végző laboratóriumi személyzet további expozíciója. Az összes érintett laboratóriumi szakember képzett a fertőző ágensek, például a COVID-19 kezelésében. A minták kezelése során minden szokásos óvintézkedést be kell tartani, beleértve a minták aliquot részekre osztását egy biológiai biztonsági burkolatban és az egyéni védőfelszerelés használatát. A betegek bizalmas kezelését a betegminták anonimizálása biztosítja, amint azt az MCW IRB korábban jóváhagyta.

3.1.6 Elemzés. A szenzitivitást és a specificitást minden iAMP® tesztnél, valamint a megfelelő 95%-os pontos konfidencia intervallumokat becsüljük meg, referencia standardként a NAAT vizsgálatot használva.

3.1.7 Lehetséges klinikai korlátok

1. Az alternatív anatómiai helyek érzékenyebbek, mint a nasopharyngealis tamponok. Lehetséges, hogy a saját kezűleg gyűjtött tamponok érzékenysége lényegesen alacsonyabb lesz, mint a nasopharyngealis tamponoké. Nem valószínű, hogy ez a helyzet, mert ennek az új vírusnak a vírusterhelése nagyon magas
2. Az alanyok megtagadhatják több mintavételt. A betegek 5 minta adását megtagadhatják. Mivel a saját maga által gyűjtött oldalak valószínűleg nem okoznak kényelmetlenséget, arra számítunk, hogy a legtöbb résztvevő beleegyezik a tanulmányi részvételbe. Még ha sok beteg nem is hajlandó részt venni a részvételben, naponta 700 beteg jelentkezik tünetekkel, amely potenciális résztvevők nagy csoportja lehetővé teszi célunk elérését. Lehetséges, hogy a vizsgálóknak addig kell folytatniuk a beiratkozást, amíg nem lesz 100 saját maguk által összegyűjtött COVID-19+ alany, ha egyes alanyok megtagadják a további vizsgálatokat.

3.2 Konkrét cél 2. Értékelje a nemkívánatos események előfordulását egy saját gyűjtött középső turbina mintában. A használati utasítás (IFU) szerint a középső turbinájú tamponokat orvosi felügyelet mellett kell gyűjteni,13 amit a CDC megerősít. Számos tanulmány kimutatta, hogy a turbina közepén vett minták hatékonyak más légúti megbetegedések kimutatására.14-17 Mivel a turbina közepén végzett gyűjtés érzékenyebb lehet, mint az elülső orr vagy a nyál vizsgálata, fontos bizonyítani, hogy biztonságosan gyűjthető klinikai felügyelet nélkül. Bár egyes betegek képesek lehetnek egy középső gyűjtést végezni egy távegészségügyi látogatáson keresztül, ez akadályozná a széles körű fellépést. Így a vizsgálók lehetővé teszik a betegek számára, hogy maguktól gyűjtsenek egy közepesen turbinált mintát egy gyűjtőtampon segítségével. A tampon egy jelzővonal van, amely jelzi a középső turbina régió elérésének átlagos hosszát felnőtteknél (körülbelül 1 hüvelyk vagy 2 cm). Az egészségügyi szolgáltató ezt követően értékeli a pácienst a beteg öngyűjtésével kapcsolatos nemkívánatos eseményekre, mint például a fájdalom és/vagy vérzés. Ha a nemkívánatos események előfordulási gyakorisága hiányzik vagy nagyon alacsony (kevesebb, mint 5%), és a középső turbina minta érzékenysége jobb, mint az elülső orra, a betegek megengedhetik, hogy orvosi felügyelet nélkül vegyenek mintát saját középső turbina régiójukból. Az egyes típusú nemkívánatos eseményeket átélő résztvevők arányát a megfelelő 95%-os pontos konfidenciaintervallummal együtt becsüljük meg.

4.0 Összegzés A Covid-19 világjárvány globális válságot hozott létre, amely a társadalom minden szektorát érinti. A vírus katasztrofális gazdasági és egészségügyi hatásainak csökkentése érdekében biztonságos, olcsó és megbízható vizsgálatokra lesz szükség. A projekt célja egy alacsony költségű, gyorsteszt (iAMP®) öngyűjtésének tanulmányozása három anatómiai területen – a középső turbina, az orrnyálkahártya és a nyál –, amelyek validálása esetén a széles körű tesztelést valós lehetőséggé tehetik. A másodlagos cél annak bemutatása, hogy ezek a területek biztonságosan begyűjthetők, anélkül, hogy orvosi felügyeletre lenne szükség. A Covid-19 tesztelése és feldolgozása előtt álló akadályok csökkentése segít enyhíteni ezt a válságot, és lehetővé teszi a normál tevékenységhez való visszatérést.