Самостоятельный отбор образцов для изучения COVID-19

3.1.1 Исследуемая группа: Исследователи будут включать пациентов в более крупное клиническое проверочное исследование теста iAMP® по сравнению с золотым стандартом (тест, рекомендованный CDC), пока мы не соберем в общей сложности 100 положительных случаев. Текущая позитивность в регионе составляет примерно 20%, поэтому потребуется примерно 500 проб. Критерии включения следующие: пациенты старше 18 лет, поступающие на тестирование на COVID-19, способные переносить мазки из носоглотки и способные следовать инструкциям по самостоятельному сбору. Критерии исключения следующие: неспособность или нежелание предоставить информированное согласие и/или достоверную контактную информацию.

3.1.2 Клинический визит: К пациентам с симптомами будет подходить поставщик исследования, одетый в СИЗ. Исследование будет объяснено, и, если пациент согласится, он получит согласие. Пациентам будет разрешено дать согласие только на два мазка из носоглотки или на все пять мазков. После согласия каждый пациент будет проходить тестирование с одновременным взятием врачом двух мазков из носоглотки для широкомасштабной клинической валидации. Один будет храниться в сухом виде в пробирке, а другой будет помещен в среду для сбора вирусов. Пациенты, давшие согласие на самостоятельное исследование, будут доставлены в частную зону для сбора трех разных образцов. После получения письменных инструкций и просмотра короткого обучающего видео пациент будет брать образец из средней носовой раковины под наблюдением врача. Затем клиницист уходит, а пациент самостоятельно собирает образцы из носовых ходов и слюны. Все образцы будут храниться в сухом виде. Когда пациент возвращает образцы координатору исследования, его спросят о любых побочных эффектах или нежелательных явлениях, связанных с образцом из средней носовой раковины.

3.1.3 Лабораторные исследования: сухой мазок будет взят из двух из трех мест самостоятельного взятия проб iAMP® — средней носовой раковины и передней части ноздрей — и помещен во флакон с патентованным буфером (далее именуемый буфером для образцов A). Что касается слюны, для сбора образца будет использоваться стерильная чашка для сбора, а буфер для образцов A будет добавлен непосредственно в стерильную чашку для сбора. Каждый из трех образцов с добавленным буфером для образцов А будет инкубироваться при комнатной температуре в течение 15 минут. Запатентованная мультиплексная смесь (мастер-микс) будет приготовлена ​​в пробирке, и в пробирку будет добавлено 10 мкл образца из флакона (средняя носовая раковина и ноздри) или чашки (слюна). Затем пробирку помещают в машину для ОТ-ПЦР и проводят до завершения анализа. Результат анализа будет либо положительным, либо отрицательным, либо недействительным (тест будет повторен), а результат будет сравнен с анонимным результатом назофарингеального теста, проведенного с помощью анализа NAAT, рекомендованного CDC.

Инструкции для испытуемых о том, как правильно собирать мазки с каждого участка. [Ватные тампоны должны быть флокированы и иметь коническую форму].

Средняя носовая раковина:

• Тщательно вымойте и высушите руки
• Возьмите стерильный ватный тампон и держите его за стержень доминирующей рукой.
• Откройте пустой флакон для сбора iAMP и держите его в другой руке.
• Наклоните голову назад, чтобы подбородок был примерно параллелен земле (~ 70º).
• Вставьте ватный тампон до отметки на стержне (один дюйм или ~ 2 см) и полностью поверните ватный тампон (360º) 3 раза.
• Снимите тампон и, не касаясь ватного наконечника, повторите процесс с другой стороны тем же ватным тампоном.
• Удалите тампон из носа, не касаясь ватного наконечника, и поместите тампон ватным наконечником вперед во флакон.
• Отломите верхний стержень ватного тампона
• Наденьте колпачок на флакон, надежно закрыв его.
• Отдайте закрытый флакон исследовательскому персоналу.

Передние ноздри:

• Тщательно вымойте и высушите руки
• Возьмите стерильный ватный тампон и держите его за стержень доминирующей рукой.
• Откройте пустой флакон для сбора iAMP® и держите его в другой руке.
• Вставьте ватный тампон в одну ноздрю до тех пор, пока ватный наконечник не перестанет быть виден (~ 0,5 дюйма или 1 см).
• Полностью поверните его внутри носа (360º) 3 раза и оставьте на месте на 10-15 секунд.
• Выньте тампон и, не касаясь ватного наконечника, повторите процесс в другой ноздре, снова вставляя ватный тампон только до тех пор, пока ватный наконечник не перестанет быть виден, вращая его 3 раза и оставляя на месте на 10-15 секунд.
• Выньте тампон, не касаясь ватного наконечника, и поместите тампон ватным наконечником вперед во флакон.
• Отломите верхний стержень ватного тампона
• Наденьте колпачок на флакон, надежно закрыв его.
• Отдайте закрытый флакон исследовательскому персоналу.

Слюна:

• Не ешьте, не пейте, не курите и не жуйте жвачку в течение 30 минут после сбора.
• Возьмите стерильную емкость для мочи и несколько раз сплюньте в нее, пока не будет 2-3 миллилитра жидкости (исключая пузырьки). См. изображение ниже для примера необходимого количества слюны.
• Поддерживайте стерильность внутри чашки, НЕ помещая ничего (пальцы, предметы и т. д.) в чашку.
• Как только будет собрано достаточное количество слюны, поместите крышку на верхнюю часть чашки и надежно закройте ее.
• Дайте закрытую чашку исследовательскому персоналу

3.1.4 Статистическое обоснование Если предположить, что 20% образцов, протестированных с помощью анализа МАНК, будут положительными на COVID-19, исследование 500 последовательных образцов даст 100 случаев COVID-19, обнаруженных с помощью анализа МАНК. Это исследование позволит оценить 95% доверительный интервал (ДИ) для чувствительности и специфичности, указанные в таблице ниже, для истинной чувствительности и специфичности в диапазоне от 50% до 95%. Точность тем выше, чем дальше чувствительность и специфичность отклоняются от 50%.

Таблица 1: 95% доверительные интервалы для определения чувствительности и специфичности Истинная чувствительность Чувствительность 95% ДИ Истинная специфичность Специфичность 95% ДИ 50% 39,8% - 60,2% 50% 45,0% - 55,0% 70% 60,0% - 78,8% 70% 65,2% - 74,5% 90% 82,4% - 95,1% 90% 86,6% - 92,8% 95% 88,7% - 98,4% 95% 92,3% - 96,9%

3.1.5 Риски/безопасность Единственным риском данного исследования является дополнительное воздействие на лабораторный персонал, выполняющий анализ. Все задействованные лаборанты обучены работе с инфекционными агентами, такими как COVID-19. При работе с образцами будут применяться все стандартные меры предосторожности, включая разделение образцов на аликвоты в боксе биобезопасности и использование средств индивидуальной защиты. Конфиденциальность пациентов будет обеспечена анонимностью образцов пациентов, как это ранее было одобрено IRB MCW.

3.1.6 Анализ. Чувствительность и специфичность будут оцениваться для каждого теста iAMP®, а также соответствующие 95% точные доверительные интервалы с использованием анализа NAAT в качестве эталонного стандарта.

3.1.7 Потенциальные клинические ограничения

1. Альтернативные анатомические участки будут иметь более низкую чувствительность, чем мазки из носоглотки. Не исключено, что самостоятельно взятые мазки будут иметь значительно меньшую чувствительность, чем мазки из носоглотки. Это маловероятно, потому что вирусная нагрузка этого нового вируса очень высока.
2. Субъекты могут отказаться от взятия нескольких мазков. Пациенты могут отказаться сдавать 5 проб. Поскольку сайты, собранные самостоятельно, вряд ли вызовут дискомфорт, мы ожидаем, что большинство участников согласятся на участие в исследовании. Даже если многие пациенты не соглашаются участвовать, каждый день у 700 пациентов проявляются симптомы, что является большим пулом потенциальных участников, которые сделают возможным достижение нашей цели. Исследователям, возможно, придется продолжать регистрацию до тех пор, пока не будет 100 самостоятельных пациентов с COVID-19 +, если некоторые субъекты отказываются от дополнительных тестов.

3.2 Конкретная цель 2. Оценить частоту нежелательных явлений в самостоятельно собранном образце из средней носовой раковины. Согласно инструкции по применению (IFU), мазки из средней носовой раковины должны браться под наблюдением врача,13 что подтверждает CDC. Было проведено несколько исследований, которые показали, что образцы из средней носовой раковины эффективны для выявления других респираторных заболеваний.14-17 Поскольку сбор из средней носовой раковины может иметь более высокую чувствительность, чем исследование носовых ходов или анализ слюны, важно продемонстрировать, что его можно безопасно собрать без медицинского наблюдения. Несмотря на то, что некоторые пациенты могут выполнить сбор данных из средней носовой раковины с помощью телемедицинского визита, это будет препятствием для широкого расширения масштабов. Таким образом, исследователи позволят пациентам самостоятельно собрать образец из средней носовой раковины с помощью тампона для сбора. Тампон будет иметь индикаторную линию, указывающую на среднюю длину до области средней носовой раковины у взрослых (примерно 1 дюйм или 2 см). Затем поставщик медицинских услуг оценит пациента на наличие любых нежелательных явлений, связанных с самостоятельным сбором материала пациентом, таких как боль и/или кровотечение. Если частота нежелательных явлений отсутствует или очень низка (менее 5%), а чувствительность образца из средней носовой раковины выше, чем из передней части носа, пациентам может быть разрешено взять образец из собственной области средней носовой раковины без медицинского наблюдения. Доля участников, испытывающих каждый тип нежелательных явлений, будет оцениваться вместе с соответствующим 95% точным доверительным интервалом.

4.0 Резюме Пандемия Covid-19 вызвала глобальный кризис, который затронул все слои общества. Чтобы уменьшить катастрофические последствия этого вируса для экономики и здравоохранения, потребуется доступность безопасных, недорогих и надежных тестов. Этот проект направлен на изучение самостоятельного сбора недорогого экспресс-теста (iAMP®) в трех анатомических областях — средней носовой раковине, носовых пазухах и слюне — который, если он будет подтвержден, может помочь сделать широкомасштабное тестирование реальной возможностью. Вторая цель — показать, что все эти области можно безопасно собрать самостоятельно без необходимости наблюдения врача. Снижение барьеров для тестирования и обработки Covid-19 поможет смягчить этот кризис и позволит вернуться к нормальной деятельности.