Samodzielne pobieranie próbek do badania COVID-19

3.1.1 Badana populacja: Badacze będą włączać pacjentów do większego klinicznego badania walidacyjnego testu iAMP® w stosunku do złotego standardu (test zalecany przez CDC), dopóki nie zbierzemy prospektywnie łącznie 100 pozytywnych przypadków. Obecna pozytywność w regionie wynosi około 20%, dlatego potrzebnych będzie około 500 próbek. Kryteria włączenia są następujące: Pacjenci w wieku powyżej 18 lat zgłaszający się na badanie w kierunku COVID-19, tolerujący wymazy z nosogardzieli i zdolni do samodzielnego pobrania wymazów zgodnie z instrukcjami. Kryteria wykluczenia są następujące: niezdolność lub niechęć do wyrażenia świadomej zgody i/lub wiarygodnych informacji kontaktowych.

3.1.2 Wizyta kliniczna: Do pacjentów z objawami podchodzi prowadzący badanie noszący środki ochrony indywidualnej. Badanie zostanie wyjaśnione, a jeśli pacjent wyrazi zgodę, uzyska zgodę. Pacjenci będą mogli wyrazić zgodę tylko na dwa wymazy z jamy nosowo-gardłowej lub na wszystkie pięć wymazów. Po wyrażeniu zgody każdy pacjent zostanie poddany badaniu z jednoczesnym umieszczeniem przez lekarza dwóch wymazów z nosogardzieli w celu walidacji klinicznej na dużą skalę. Jeden będzie przechowywany na sucho w probówce, a drugi w pożywce do zbierania wirusów. Pacjenci, którzy wyrażą zgodę na samodzielne pobieranie próbek, zostaną zabrani do prywatnej strefy w celu pobrania trzech różnych próbek. Po otrzymaniu pisemnych instrukcji i obejrzeniu krótkiego filmu instruktażowego próbka małżowiny środkowej zostanie pobrana przez pacjenta pod nadzorem klinicysty. Następnie lekarz wyjdzie, a pacjent sam pobierze próbki z przednich nozdrzy i śliny. Wszystkie próbki będą przechowywane w stanie suchym. Gdy pacjent zwróci próbki do koordynatora badań, zostanie zapytany o ewentualne skutki uboczne lub zdarzenia niepożądane z próbki z małżowiny środkowej.

3.1.3 Testy laboratoryjne: Suchy wymaz zostanie pobrany z dwóch z trzech miejsc samopobierania próbki iAMP® — małżowiny środkowej i nozdrzy przednich — i umieszczony w fiolce z zastrzeżonym buforem (zwanym dalej buforem do próbek A). W przypadku śliny do pobrania próbki zostanie użyty sterylny pojemnik do pobierania próbek, a bufor próbki A zostanie dodany bezpośrednio do sterylnego pojemnika do pobierania próbek. Każda z trzech próbek z dodanym buforem próbki A będzie inkubowana w temperaturze pokojowej przez 15 minut. Zastrzeżona mieszanka multipleksowa (master mix) zostanie przygotowana w probówce i 10 mikrolitrów próbki z fiolki (małżowiny środkowe i nozdrza) lub kubka (ślina) zostanie dodanych do probówki. Probówka zostanie następnie umieszczona w urządzeniu RT-PCR i prowadzona do zakończenia testu. Wynik testu będzie pozytywny, negatywny lub nieważny (test należy powtórzyć), a wynik zostanie porównany z anonimowym wynikiem testu nosowo-gardłowego przeprowadzonego za pomocą zalecanego przez CDC testu NAAT.

Instrukcje dla pacjentów dotyczące prawidłowego pobierania wymazów z każdego miejsca. [Waciki powinny być flokowane i zwężane].

małżowina środkowa:

• Dokładnie umyj i osusz ręce
• Weź sterylny wacik i trzymaj go za łodygę w dominującej dłoni
• Otwórz pustą fiolkę do pobierania iAMP i przytrzymaj ją drugą ręką
• Odchyl głowę do tyłu, tak aby podbródek był mniej więcej równoległy do ​​podłoża (~70º)
• Włóż wacik do oznaczenia na łodydze (1 cal lub ~2 cm) i obróć wacik całkowicie (360º) 3 razy.
• Wyjmij wacik i nie dotykając wacika, powtórz proces z drugiej strony tym samym wacikiem
• Wyjąć wacik z nosa, nie dotykając wacika i umieścić wacik w fiolce, zaczynając od wacika
• Odłam górną łodygę wacika
• Założyć nasadkę na fiolkę, dokładnie ją zamykając
• Przekaż zamkniętą fiolkę personelowi badawczemu

nozdrza przednie:

• Dokładnie umyj i osusz ręce
• Weź sterylny wacik i trzymaj go za łodygę w dominującej dłoni
• Otwórz pustą fiolkę do pobierania iAMP® i przytrzymaj ją drugą ręką
• Włóż bawełniany wacik do jednego nozdrza, aż bawełniana końcówka nie będzie już widoczna (~ 0,5 cala lub 1 cm)
• Obróć go całkowicie w nosie (360º) 3 razy i pozostaw na miejscu przez 10-15 sekund
• Wyjmij wacik i nie dotykając wacika, powtórz proces w drugim nozdrzu, ponownie wkładając wacik tylko do momentu, aż wacik nie będzie już widoczny, obracając go 3 razy i pozostawiając na miejscu przez 10-15 sekund
• Wyjąć wacik, nie dotykając wacika i umieścić wacik w fiolce, najpierw wacikiem
• Odłam górną łodygę wacika
• Założyć nasadkę na fiolkę, dokładnie ją zamykając
• Przekaż zamkniętą fiolkę personelowi badawczemu

Ślina:

• Nie jeść, nie pić, nie palić ani nie żuć gumy w ciągu 30 minut od pobrania
• Weź sterylny pojemnik na mocz i pluj do niego wielokrotnie, aż pozostanie 2-3 mililitry płynu (bez bąbelków). Zobacz zdjęcie poniżej, aby zobaczyć przykładową ilość potrzebnej śliny
• Utrzymuj wnętrze kubka w stanie sterylnym, NIE wkładając niczego (palców, przedmiotów itp.) do kubka
• Po zebraniu odpowiedniej ilości śliny umieść nasadkę na górze kubka i dokładnie ją zamknij
• Podaj zamknięty kubek personelowi badawczemu

3.1.4 Uzasadnienie statystyczne Zakładając, że 20% próbek przebadanych testem NAAT będzie dodatnich pod względem COVID-19, badanie 500 kolejnych próbek da 100 przypadków COVID-19 wykrytych testem NAAT. To badanie będzie w stanie oszacować 95% przedział ufności (CI) dla czułości i swoistości wskazany w poniższej tabeli dla prawdziwej czułości i swoistości w zakresie od 50% do 95%. Precyzja jest tym lepsza, im bardziej czułość i specyficzność różnią się od 50%.

Tabela 1: 95% przedziały ufności dla wykrywania czułości i swoistości Czułość rzeczywista Czułość 95% CI Rzeczywista swoistość Swoistość 95% CI 50% 39,8% - 60,2% 50% 45,0% - 55,0% 70% 60,0% - 78,8% 70% 65,2% - 74,5% 90% 82,4% - 95,1% 90% 86,6% - 92,8% 95% 88,7% - 98,4% 95% 92,3% - 96,9%

3.1.5 Zagrożenia/Bezpieczeństwo Jedynym ryzykiem związanym z tym badaniem jest dodatkowe narażenie personelu laboratoryjnego wykonującego oznaczenie. Wszyscy zaangażowani laboranci są przeszkoleni w zakresie postępowania z czynnikami zakaźnymi, takimi jak COVID-19. Podczas obchodzenia się z próbkami zostaną zastosowane wszystkie standardowe środki ostrożności, w tym podzielenie próbek pod kapturkiem bezpieczeństwa biologicznego i użycie osobistego wyposażenia ochronnego. Poufność danych pacjentów zostanie zapewniona dzięki anonimizacji próbek pacjentów, zgodnie z wcześniejszą zgodą MCW IRB.

3.1.6 Analiza. Czułość i swoistość zostaną oszacowane dla każdego testu iAMP®, jak również odpowiadające im dokładne 95% przedziały ufności przy użyciu testu NAAT jako standardu odniesienia.

3.1.7 Potencjalne ograniczenia kliniczne

1. Alternatywne miejsca anatomiczne będą miały niższą czułość niż wymazy z nosogardzieli. Możliwe, że wymazy pobrane samodzielnie będą miały znacznie niższą czułość niż wymazy z nosogardzieli. Jest to mało prawdopodobne, ponieważ miano wirusa w przypadku tego nowego wirusa jest bardzo wysokie
2. Pacjenci mogą odmówić pobrania wielu wymazów. Pacjenci mogą odmówić oddania 5 próbek. Ponieważ jest mało prawdopodobne, aby strony zebrane samodzielnie powodowały dyskomfort, oczekujemy, że większość uczestników zgodzi się na udział w badaniu. Nawet jeśli wielu pacjentów nie wyrazi zgody na udział, dziennie 700 pacjentów zgłasza objawy, co stanowi dużą pulę potencjalnych uczestników, co umożliwi osiągnięcie naszego celu. Badacze mogą być zmuszeni do kontynuowania rekrutacji, dopóki nie będzie 100 samodzielnie pobranych pacjentów z COVID-19 +, jeśli niektórzy z nich odmówią wykonania dodatkowych testów.

3.2 Cel szczegółowy 2. Ocena częstości występowania zdarzeń niepożądanych w samodzielnie pobranej próbce małżowiny środkowej. Zgodnie z instrukcją obsługi (IFU) wymazy z małżowiny środkowej muszą być pobierane pod nadzorem lekarza13, co potwierdza CDC. Przeprowadzono wiele badań, które wykazały, że próbki małżowiny środkowej są skuteczne w wykrywaniu innych chorób układu oddechowego.14-17 Ponieważ pobieranie z małżowin środkowych może charakteryzować się większą czułością niż badanie nozdrzy przednich lub badanie śliny, ważne jest wykazanie, że można je bezpiecznie pobrać bez nadzoru klinicznego. Chociaż niektórzy pacjenci mogą być w stanie wykonać zbiór małżowin środkowych podczas wizyty telezdrowotnej, stanowiłoby to barierę dla rozszerzenia na szeroką skalę. W ten sposób badacze pozwolą pacjentom samodzielnie pobrać próbkę z małżowiny środkowej za pomocą wymazówki. Wymaz będzie miał linię wskazującą średnią długość dotarcia do okolicy małżowiny środkowej u dorosłych (około 1 cal lub 2 cm). Pracownik służby zdrowia oceni następnie pacjenta pod kątem wszelkich zdarzeń niepożądanych związanych z samodzielnym pobieraniem krwi przez pacjenta, takich jak ból i/lub krwawienie. Jeśli częstość występowania zdarzeń niepożądanych jest nieobecna lub bardzo niska (mniej niż 5%), a czułość próbki środkowej małżowiny nosowej jest lepsza niż w przypadku przednich nozdrzy, pacjentom można pozwolić na pobranie próbki z własnego obszaru małżowiny środkowej bez nadzoru lekarza. Odsetek uczestników, u których wystąpią zdarzenia niepożądane każdego typu, zostanie oszacowany wraz z odpowiednim 95% przedziałem ufności.

4.0 Podsumowanie Pandemia Covid-19 doprowadziła do globalnego kryzysu, który dotyka wszystkie sektory społeczeństwa. Aby zmniejszyć katastrofalne skutki gospodarcze i zdrowotne tego wirusa, konieczna będzie dostępność bezpiecznych, niedrogich i niezawodnych testów. Projekt ten ma na celu zbadanie samodzielnego pobrania taniego, szybkiego testu (iAMP®) w trzech obszarach anatomicznych – małżowinie środkowej, nozdrzach i ślinie – który, jeśli zostanie zwalidowany, może pomóc w urzeczywistnieniu powszechnych testów. Celem drugorzędnym jest pokazanie, że wszystkie te obszary mogą być bezpiecznie zbierane samodzielnie, bez potrzeby nadzoru lekarza. Zmniejszenie barier w testowaniu i przetwarzaniu Covid-19 pomoże złagodzić ten kryzys i pozwoli na powrót do normalnej działalności.