COVID-19 koagulopátia kiterjesztése

1. Háttér és tudományos indoklás:

   A SARS-CoV-2 új koronavírussal való fertőzés, amelyet először a kínai Vuhanban azonosítottak 2019 végén, globális világjárványsá vált, amely több mint 209 országot és területet érint. A SARS-CoV-2 által okozott betegség COVID-19 kategóriába tartozik. 2021. augusztus 23-ig több mint 212 millió COVID-19-es esetet jelentettek több mint 220 országban, ami több mint 4,4 millió ember halálát okozta. Az Egyesült Államokban van messze a legtöbb megbetegedett eset (>38 millió), a halálozási arány 1,67%. Bár sok betegnek csak enyhe felső légúti tünetei lehetnek, egyes COVID-19-betegek súlyosan megbetegednek légzési elégtelenséggel, ami több szervi elégtelenségbe való progresszió és a disszeminált intravaszkuláris koagulációhoz (DIC) hasonló jellemzőkkel rendelkező szisztémás koagulopátia kockázatával jár.1 A COVID-19-hez kapcsolódó koagulopátia patofiziológiája összetettnek és többtényezősnek tűnik, beleértve a hemosztatikus rendszer sejtes és plazmatikus elemeit is. A coagulopathia kialakulása a COVID-19.2-ben szenvedő betegek mortalitási előrejelzője Ennek ellenére nincs közvetlen mechanikus kapcsolat a SARS-CoV-2 fertőzés és a koagulopátia vagy trombózis között.

   Az Iowai Egyetemen a kutatók többközpontú, randomizált klinikai vizsgálatot vezettek, amelyben a standard profilaktikus dózist a közepes dózisú enoxaparinnal hasonlították össze COVID-19 (NCT04360824) kórházi betegeknél.3 A vizsgálat feltáró biomarker-komponensének részeként a vizsgálók vérmintákat gyűjtöttek a kórházban lévő COVID-19-betegektől a felvételkor és hetente a kórházi kezelés időtartama alatt legfeljebb 30 napig. Kísérleti eredményeink, valamint más csoportok jelentései azt mutatják, hogy a COVID-19-betegek plazmájában megnövekedett a trombinképződés lehetősége. A COVID-19 betegcsoportunkban a vizsgálók azt figyelték meg, hogy a megnövekedett trombinképződési potenciál legalább 30 napig fennmaradt a kórházi kezelés után. A kutatók most azt javasolják, hogy vizsgálják meg a vérsejtek (mint például a vérlemezkék és a neutrofilek), a mikrorészecskék, az extracelluláris hisztonok, az interleukin-6 (IL6) és a galectin-3 (Gal-3) aktiválásának mechanisztikus szerepét, mint a fokozott trombinképződés mediátorait. COVID-19-ben szenvedő betegek. A vizsgálat elrendezése egy longitudinális kohorszvizsgálat lesz, amely lehetővé teszi számunkra, hogy meghatározzuk a megnövekedett trombinképződési potenciál időbeli lefutását a klinikai eredményekhez és a sejtaktiváció markereinek változásaihoz viszonyítva COVID-19 betegektől vett sorozatmintákban legfeljebb 3 évig. SARS-CoV-2 fertőzés után. Ez a tanulmány támpontokat adhat arra vonatkozóan, hogy a COVID-19-betegek egy részében miért jelentkeznek késői trombózisos szövődmények még a SARS-CoV-2 fertőzésből való látszólagos felépülés után is. Így ennek a projektnek erős tudományos indoka van, közvetlen klinikai vonatkozásokkal, különös tekintettel a SARS-CoV-2-változatok megjelenésére, mint például a delta és az omikron, amelyek meghosszabbíthatják a járványt és/vagy a COVID-19 megugrását okozhatják a következő hónapokban.

2. Célok:

   2.1 Elsődleges célok 2.1.1 Határozza meg a fokozott trombinképződési potenciál időbeli lefolyását COVID-19-ben szenvedő betegeknél.

   2.1.2 Tesztelje azt a hipotézist, hogy a vérlemezkék, neutrofilek és endothelsejtek COVID-19-betegek plazmája általi aktiválását a Gal-3, az IL6 és/vagy a hisztonok közvetítik.

   2.1.3 Határozza meg a neutrofilek, a vérlemezkék és az endothel sejtek szerepét a megnövekedett trombinképződés közvetítésében, és hogy az IL6, Gal-3 vagy hisztonok megcélzása csökkenti-e a trombinképződési potenciált a COVID-19 betegek plazmamintáiban.

   2.2 Másodlagos célok 2.2.1 Határozza meg az IL6, sIL6R, H3Cit és Gal-3 plazmaszintjének változásait a COVID-19-ben szenvedő betegeknél.

   2.2.2 Határozza meg az IL6, sIL6R, H3Cit és Gal-3 plazmaszintjének összefüggését a COVID-19-ben szenvedő betegek trombinképző képességével.

   2.3 Kutatási célok 2.3.1 Kísérleti vénás trombózis egérmodelljei segítségével határozza meg, hogy a COVID-19 beteg plazmájából izolált plazma vagy mikrovezikulák infúziója fokozza-e a trombózist, és hogy a semlegesítő hisztonok védelmet nyújtanak-e.

   2.3.2 Határozza meg, hogy a plazma trombinképződési potenciálja vagy az IL6, sIL6R, Gal-3 vagy H3Cit plazmaszintje előrejelzi-e a klinikai kimeneteleket a COVID-19 miatti kórházi kezelést követő 3 éven belül.

3. Dizájnt tanulni:

   3.1. Egyközpontos longitudinális kohorsz vizsgálat COVID-19-ben (laboratóriumilag megerősített SARS-CoV-2 fertőzésben) szenvedő betegeken.

4. A tantárgyak kiválasztása:

   4.1 Bevételi kritériumok Az alanyoknak meg kell felelniük minden felvételi feltételnek ahhoz, hogy részt vegyenek ebben a vizsgálatban

   • Laboratóriumi vizsgálat igazolta a SARS-CoV-2 fertőzést
   • Életkor ≥18 év
   • Kórházi felvétel az UIHC-be a COVID-19 vagy a COVID-19 szövődményeinek klinikai kezelése céljából 4.2 Kizárási kritériumok Azok az alanyok, akik az alapszűréskor megfelelnek a kizárási feltételek bármelyikének, kizárásra kerülnek
   • Jelenlegi terhesség
   • Rab
   • Vérzési rendellenesség anamnézisében
   • Aktív rák

5. Tanulmányi eljárások és értékelések:

   5.1 Szűrés és felvétel: A potenciálisan jogosult betegeket egészségügyi szakember azonosítja az intézmény adatvédelmi szabályzata szerint. Az egészségügyi szakember a laboratóriumi eredményeket is tartalmazó diagram áttekintésével értékeli a beteg alkalmasságát. Csak azokat a betegeket kérik fel, akik megfelelnek az összes felvételi és kizárási kritériumnak. Miután szóbeli beleegyezését kapta a pácienstől, hogy kapcsolatba kerüljön a vizsgálattal, a kutatószemélyzet egy tagja felkeresi a pácienst, hogy részt vegyen a vizsgálatban. A kutatószemélyzet tájékozott beleegyezését kéri a betegtől vagy a törvényes képviselőtől (LAR), mielőtt bármilyen adatot gyűjtene és bármilyen eljárást végrehajtana.

   5.2 Vérminta vétel:

   • Vérmintákat vesznek a kiinduláskor (a beiratkozást követő 24 órán belül), ezt követően hetente a kórházi kezeléstől számított 30 napig, és 3 havonta (± 30 napon belül) a felvételtől számított 3 éven keresztül.

   • Minden vérminta a következőket tartalmazza (teljes vértérfogat 17 ml):

     • Két 4,5 ml-es citrátcső
     • Egy 3,0 ml-es EDTA cső
     • Egy 5,0 ml-es szérumleválasztó cső
   • Minden vérmintát a gyűjtést követő egy órán belül feldolgoznak. Egy csövet citrált vérből 2000 g-vel 10 percig centrifugálunk, majd a vérlemezke-szegény plazmát (PPP) aliquot részekre osztjuk, és azonnal lefagyasztjuk a citokinek és a sejtaktiváció markereinek vizsgálatához. A trombinképző vizsgálatokhoz kijelölt PPP-mintákat ismét 10 000 g-vel centrifugáljuk 10 percig, aliquot részekre osztjuk, és gyorsfagyasztjuk. A mikrovezikulákat kétszer centrifugált plazmából izoláljuk 20 000 g-vel 30 percig végzett centrifugálással. A vérlemezkék izolálására citráttartalmú vért használnak. Az EDTA-ban gyűjtött vért a teljes vérkép mérésére és a leukociták izolálására használják fel. Az immunglobulinok és más biomarkerek mérésére szérummintákat használnak majd.

   5.3 Klinikai adatok rögzítése:

   • A klinikai és demográfiai adatokat az UIHC orvosi feljegyzések áttekintése és a betegek interjúja gyűjti össze a beiratkozáskor és minden egyes utánkövetési látogatáskor, és rögzíti az UIHC RedCap-be.

   • Gyűjtendő adatok:

     • Kor
     • Nem
     • Faj/etnikai hovatartozás (saját bevallása szerint)
     • Magasság, súly és testtömeg-index
     • A COVID-19 oltás története
     • Gyógyszerek
     • Egyéb egészségügyi állapotok / korábbi kórtörténet
     • A trombózis története
     • A cigarettázás története
     • Jelenlegi tünetek (láz, hidegrázás, fáradtság, fejfájás, izomfájdalmak, izom- vagy testfájdalmak), légszomj, köhögés, anosmia (részleges vagy teljes szaglásvesztés), dysguesia (megváltozott ízérzékelés), hányinger, Hasmenés, szédülés, egyéb tünetek
     • Különös érdeklődésre számot tartó klinikai eredmények (minden ok miatti mortalitás, trombózis, képalkotó vizsgálattal igazolt artériás trombózis, képalkotó vizsgálattal igazolt vénás thromboembolia)
     • Vérzés
   • Jelentős vérzés, az ISTH kritériumai szerint meghatározott.5
   • Kisebb vérzés: olyan vérzési esemény, amely nem felel meg a súlyos vérzés ISTH kritériumainak

6. Elállás vagy felmondás:

   Bármely résztvevő, aki ki kíván lépni a vizsgálatból, ezt bármikor megteheti. Ha egy résztvevő úgy dönt, hogy kilép a vizsgálatból, a résztvevőről nem gyűjtenek új adatokat tanulmányi célokra. A résztvevő visszavonhatja a már összegyűjtött adatainak (a visszavonás nyomon követéséhez szükséges adatok kivételével, ideértve a demográfiai adatokat) felhasználására vonatkozó engedélyt is, de ezt a résztvevőnek írásban kell megtennie a telephely vezető kutatójának. .

   A vizsgálatot a vezető kutató bármikor megszakíthatja, ha úgy ítéli meg, hogy a protokoll folytatása nem eredményez statisztikailag vagy tudományosan hasznos adatokat.

7. Statisztikai analízis:

   Összefoglaló statisztikát biztosítunk minden laboratóriumi mérésről. A kategorikus mértékek számok és százalékok formájában jelennek meg. A folyamatos mérési eloszlásokat a D'Agostino-Pearson omnibusz teszt segítségével értékeljük, és az eloszlás normalitásától függően átlagokként és szórásokként vagy mediánokként és IQR-ként jelenítjük meg.

   A soros minták és az alapminták közötti különbségek vizsgálata Fisher pontos Student-féle t- vagy Mann-Whitney U-tesztjét követi, a változó típusától és eloszlásától függően. Az idő múlásával végzett elemzések az általánosított lineáris vegyes modellezési (GLMM) keretrendszert fogják használni, amely az ismételt mérési adatokat és a különböző kimeneti változók eloszlását tartalmazza. Minden modell tartalmaz majd időt, mint előrejelzőt a csoporton belüli és a csoportok közötti különbségek tesztelésére. A kiigazítatlan értékeléseken túlmenően olyan módosító tényezőket is figyelembe kell venni, mint az életkor és a nem, hogy beépítsék a modellekbe az optimális prediktorkészletet. Minden eredmény esetében a legkisebb Akaike információs feltétellel (AIC) rendelkező többváltozós modellt tekintjük az optimális előrejelző halmaznak. Az optimális modell főbb hatásainak és kölcsönhatásainak statisztikai szignifikanciájára vonatkozó összes tesztet alfa = 0,05 értéknél kell elvégezni, és követni kell a Bonferroni-korrekciót a modell-előrejelzők száma alapján, hogy figyelembe vegyék a többszörös összehasonlítást.

   Kísérleti adataink alapján és legalább 1,54-es hatásméretet feltételezve összesen 46 alanyra van szükség ahhoz, hogy 80%-nál nagyobb teljesítményt kapjon, amikor az alfa = 0,00625 értéknél vizsgáljuk a különbségeket (Bonferroni-korrekció, 0,05/8). Egyes mintákkal kapcsolatos technikai problémákra vagy a betegek longitudinális mintagyűjtésben való részvételének megszűnésére számítva a vizsgálók 60 alany toborzását javasolják, hogy technikailag megfelelő sorozatmintákat kapjanak.

8. Tanulmánymenedzsment:

Várhatóan az IRB megfelelő képviselettel és funkcióval rendelkezik majd a szövetségi előírásoknak megfelelően. Az IRB-nek jóvá kell hagynia a hozzájárulási űrlapot és a jegyzőkönyvet. A tájékozott beleegyezés megszerzése és dokumentálása során a vizsgálónak meg kell felelnie a vonatkozó szabályozási követelményeknek, és be kell tartania a helyes klinikai gyakorlatot (GCP) és az etikai elveket, amelyek a Helsinki Nyilatkozatból származnak. A vizsgálatba való felvétel és beiratkozás előtt a páciens teljes körű magyarázatot kap a vizsgálatról, és lehetőséget kap a beleegyezési űrlap áttekintésére. Minden beleegyezési űrlapnak tartalmaznia kell az FDA-rendeletek és a helyi vagy állami szabályozás által jelenleg megkövetelt összes vonatkozó elemet. Miután ezt az alapvető információt a beteg rendelkezésére bocsátották, és a vizsgáló meggyőződött arról, hogy a páciens megérti a vizsgálatban való részvétel következményeit, a pácienst felkérik, hogy adjon beleegyezését a vizsgálatban való részvételhez az IRB által jóváhagyott beleegyezési űrlap aláírásával. A betegnek a vizsgálatban való részvétele előtt az írásos beleegyező nyilatkozatot alá kell írnia, és személyesen kelteznie kell a betegnek vagy a beteg jogilag elfogadható képviselőjének, valamint a beleegyező nyilatkozatot lefolytató személynek.