GnRH-a e tasso di gravidanza nei cicli di fecondazione in vitro (IVF).

Questo studio prospettico randomizzato con gruppo di controllo è stato condotto presso il Dipartimento di Ostetricia e Ginecologia, Scuola di Medicina dell'Università di Ioannina (Ioannina, Grecia). La popolazione dello studio era composta da 120 donne infertili (più di un anno di tentativi sessuali), di età compresa tra 29 e 38 anni, con endometriosi documentata laparoscopicamente, indirizzate all'Unità di fecondazione in vitro (IVF) del Dipartimento per il trattamento dell'infertilità durante un periodo di 7 anni (da maggio 2004 a settembre 2010). Inoltre, nel presente studio, abbiamo utilizzato 60 donne con infertilità tubarica, documentata dalla laparoscopia, senza precedente storia di chirurgia ovarica, idrosalpinge e/o endometriosi come gruppo di controllo. Questo gruppo è stato utilizzato per vedere se l'endometriosi influisce sulla fertilità delle donne. L'iscrizione del partecipante è stata effettuata da tre seguenti autori A.K., K.Z. e M.P. Durante la laparoscopia, l'endoscopista ha documentato l'estensione della malattia, la distribuzione delle lesioni endometriosiche nella cavità peritoneale e la presenza/assenza di lesioni endometriosiche attive (aree vascolarizzate rosse). Tutte le lesioni endometriosiche attive visibili sono state cauterizzate con diatermia bipolare. Le donne con evidenza ecografica di endometrioma ovarico > 2 cm di diametro medio, con livelli sierici di ormone follicolare iniziale (FSH) > 12 mIU/ml sono state escluse dallo studio. Sono stati esclusi dallo studio anche i casi di infertilità da fattore maschile definita come concentrazione di spermatozoi mobili inferiore a 10 x 106/ml e spermatozoi con morfologia normale inferiore al 4% (Kruger, criteri rigorosi).

Tutte le donne che hanno deciso di sottoporsi a un tentativo di IVF-Embryo Transfer (ET) sono state randomizzate in due gruppi in base alla somministrazione o meno del trattamento con GnRH-a, post-laparoscopica. La randomizzazione viene eseguita accedendo a un programma di randomizzazione centrale basato su Internet. La sequenza di assegnazione casuale e l'assegnazione dei partecipanti agli interventi sono state effettuate dal primo autore dello studio (A.K.). Il primo gruppo (Gruppo A) era composto da 60 donne che hanno ricevuto una preparazione depot di un GnRH-a, 3,75 mg s.c, (leuprolide, Daronda depot, 3,75, Abbott, Hellas) ogni 28 giorni per tre iniezioni. I ricercatori hanno preferito pretrattare i pazienti dello studio con un GnRH-a a lunga durata d'azione per un periodo di 3 mesi perché ha già riportato che i tassi di gravidanza dopo IVF-ET sono simili nei pazienti con endometriosi che sono pretrattati con un GnRH- a da 10 a 90 giorni o più di 90 giorni (Caruso 1997; Surrey et al., 2002). In questo gruppo, le laparoscopie sono state eseguite da 4 a 6 mesi prima dell'inizio di qualsiasi ciclo per l'infertilità. Il secondo gruppo (Gruppo B) era composto da 60 donne infertili con endometriosi che non avevano ricevuto il GnRH-a a lunga durata d'azione. Tutte le donne erano comparabili per quanto riguarda l'età media, il BMI e la durata dell'infertilità.

Tutte le donne di controllo e del gruppo B sono state sottoposte a iperstimolazione ovarica controllata (COH) dopo down-regulation con un GnRH-a (leuprolide, 20 UI/die, Daronda, 2.8, Abbott, Hellas) in un lungo protocollo con un inizio. La somministrazione dell'ormone follicolo-stimolante ricombinante (rFSH, Gonal-F, Serono, Ginevra, Svizzera) è stata iniziata dopo almeno 14 giorni di terapia con leuprolide e quando l'estradiolo sierico (E2) era inferiore a 100 pmol/l e quando lo spessore del l'endometrio era inferiore a 5 mm. La down-regulation nelle donne del gruppo A è stata avviata da 30 a 45 giorni dopo la terza iniezione di GnRH-a. Una dose iniziale di 150 UI di ormone follicolo-stimolante (rFSH, Gonal-F, Serono, Ginevra, Svizzera) è stata aggiustata individualmente dal giorno 6 del ciclo in base ai valori di estradiolo (E2) e alle misurazioni follicolari ecografiche. Una dose ovulatoria di gonadotropina corionica umana (HGG) (Pregnyl, Organon, Oss, Paesi Bassi) di 5.000-10.000 UI è stata somministrata per via intramuscolare quando il diametro medio di una media di 2-4 follicoli era superiore a 16 mm e la concentrazione plasmatica di estradiolo era superiore a 1500 pmol/l.

A tutte le donne è stato fornito il supporto della fase luteale con progesterone micronizzato naturale (Ultrogestan, Faran, Atene, Grecia), 600 mgr al giorno per via vaginale in tre dosaggi divisi, a partire dal giorno dopo il trasferimento degli embrioni.

Campioni di liquido follicolare, prelievo di ovociti e fecondazione in vitro Campioni di liquido follicolare (FF) sono stati raccolti durante il prelievo di ovociti. Da ciascun paziente è stato prelevato il fluido follicolare dal primo a tre follicoli maturi, aventi un diametro di 18-20 mm. Il fattore di necrosi tumorale (TNF)-a, l'interleuchina (IL)-1β, IL-6, IL-8 e IL-1-ra sono stati misurati nel FF di tutte le donne (misure di esito secondarie). Per prevenire eventuali alterazioni delle citochine, sono stati utilizzati solo campioni privi di sangue. La fecondazione in vitro è stata eseguita in tutti i casi. I tassi di fecondazione sono stati stimati per ogni donna 24 ore dopo il prelievo degli ovociti (misura di esito primaria).

Classificazione e trasferimento dell'embrione Anche la qualità dell'embrione e il tasso di gravidanza clinica erano misure di esito primarie. Lo sviluppo dell'embrione è stato valutato 2 giorni dopo il prelievo degli ovociti. Per la valutazione sono stati utilizzati il ​​numero di blastomeri e la proporzione del volume embrionale occupato dai frammenti. Gli embrioni con frammenti < 10%, < 10-20%, < 20-30% e > 30% sono stati stimati rispettivamente di grado 1,2,3 e 4. In ogni ciclo sono stati trasferiti tre embrioni con il più alto numero di blastomeri e la migliore morfologia. I restanti embrioni di alto grado sono stati crioconservati lo stesso giorno.

La gravidanza è stata diagnosticata mediante β-hCG quantitativa, due settimane dopo il trasferimento degli embrioni. La gravidanza clinica è stata confermata osservando l'attività cardiaca fetale sull'ecografia transvaginale quattro settimane dopo un test di gravidanza positivo. Il tasso di gravidanza clinica e la qualità degli embrioni sono stati stimati in tutte le donne. Il tasso di gravidanza è stato definito come la presenza di attività cardiaca visualizzata ecograficamente per ciclo iniziato.