ジンバブエ大学保健科学部 (UZ-CHS) BIRTH COHORT 研究 (UZ-CHS-BC)

サハラ以南のアフリカでは、毎年 100 万人以上の乳児が HIV-1 に感染した女性から生まれています。 ジンバブエでは、年間の出生数は 379,000 に達し、生涯にわたる高活性抗レトロ ウイルス療法 (HAART) を受けている HIV-1 感染女性から毎年約 48,000 人の乳児が生まれています。 HIV-1 に感染している女性から生まれた、HIV-1 に曝露されているが感染していない (HEU) 乳児の一般的な健康と発達の結果について懸念が表明されています。 HIV 陰性であるにもかかわらず、HEU の子供は、生後 1 年目と 2 年目で、HIV にさらされておらず、感染していない (HUU) 乳児よりも、それぞれ 3.9 倍と 2.0 倍高い死亡率を示します。 HUU の子どもたちと比較して、HEU の子どもたちの出生結果は好ましくなく、成長や発達の障害、その他の健康上の欠陥がある可能性があります。 これは、成人期に低出生体重児 (LBW) で生まれた乳児が、高血圧、脳卒中、2 型糖尿病などの非感染性疾患 (NCD) で死亡する可能性が高いため、重大な公衆衛生上の懸念です。 ジンバブエでは、HEU 乳児は HAART 以前の時代によく研究されてきました。ただし、現代の証拠が不足しています。 さらに、以前の研究では妊娠中の女性の特徴が明らかにされておらず、早産、低体重児、授乳期間、貧困、母親の心理社会的ストレッサーなどの追加の危険因子を含む、他の一般的な出生前の感染性病原体の結果は制御されていません。 したがって、HEU 乳児の詳細かつ包括的な特性評価は、HIV 感染を回避するためだけでなく、暴露された人々の短期的および長期的な健康転帰を改善するためにも必要です。

妊娠中の HAART のリスク ジンバブエでは、HIV の母子感染 (MTCT) を防ぐための HIV 感染女性に対する現在の標準治療は、テノホビル、ラミブジン、およびエファビレンツ (TENOLAM-E) で構成されています。 しかし、抗レトロウイルス薬は羊水に蓄積する可能性があり、デリケートな胚および胎児の発育中にリスクをもたらす可能性があります。 南アフリカの研究では、受胎前にジドブジン ベースの HAART を開始した母親は、受胎後に HAART を開始した母親と比較して早産の確率が 2 倍であることを示したため、HAART のタイミングも重要である可能性があります。 抗 HIV 薬の毒性メカニズムには、ミトコンドリア毒性と母親およびおそらく乳児のミトコンドリア DNA 変異が含まれます。 ミトコンドリアの機能不全は、活性酸素種の産生と IL-1 産生の活性化を増加させます。 脂質代謝の干渉は、HAART 毒性のもう 1 つのメカニズムです。 エファビレンツ ベースの HAART への早期曝露は、行動障害につながる可能性のある神経発達および社会的感情的課題と​​関連しています。 さらに、持続感染、社会経済的地位の有害な影響、およびダイオキシンや塩素系殺虫剤などの母親の食事汚染物質も役割を果たす可能性があります。

HEU 乳児の健康への悪影響が観察された理由は、免疫系の状態の変化に関連している可能性があります。 ただし、HEU の子供の 1 年を超える免疫プロファイルは、ほとんど未調査のままです。 ジンバブエでは、予防接種の拡大プログラム (EPI) を通じて、乳児の積極的な予防接種のための予防接種キャンペーンが推進されています。 一部の EPI ワクチン接種後のピーク抗体価は HEU 乳児では正常ですが、これらの免疫応答の寿命に関する研究はありません。 子宮内での HIV 曝露は、胎盤細胞によって産生される炎症誘発性サイトカインのレベルを増加させます。 ケニアのHEU新生児（母体の同時感染が多い）は、米国での研究からのHEU対照よりも炎症性血漿マーカーのレベルが高かったため、同時感染は重要であると思われます. さらに、HEU 乳児は CMV 負荷が高く、これは母体のウイルス血症によって部分的に引き起こされる可能性があり、免疫活性化に寄与する可能性があります。 したがって、HEU の乳児はベースラインの炎症を持ち続けており、これは短期および長期の転帰不良に関連している可能性があり、抗炎症介入により乳児の健康が改善される可能性があります。 妊娠中の女性における HAART 治療による介入研究は、倫理的に困難です。しかし、神経/免疫の発達に対する HAART の影響は、UZ-CHS 出生コホートのような研究で評価することができます。このコホートでは、経済的な問題により、母親が出産前に本を書くのが遅くなることが多く、妊娠後期に HAART を受けていない人もいます。 HEU 乳児の短期および長期転帰に対するオプション B+ 時代の HAART 曝露のリスクに関する証拠は、依然として限られています。 しかし、私たちの知る限りでは、母体の羊水、尿、血漿、および縦断母乳中のHAARTレベルを相関させ、妊娠の悪影響、乳児の成長、代謝、および（免疫/神経）発達に関連する研究はありません.

方法 ジンバブエ大学保健科学大学 (UZ-CHS) 出生コホート研究は、ハラレ一次医療ポリクリニックの高密度西部郊外のリソースの少ない環境で、HIV 感染女性と HIV 非感染女性から生まれた乳児を比較する前向き観察コホート研究です。 . 2016 年 1 月から 2019 年 6 月まで、妊娠後期の 1,200 人の妊婦 (HIV に感染した母親 600 人と HIV に感染していない対照 600 人) が登録されました。 参加者は、生後 6、10、14、24、48、72、および 96 週の生後 10 日以内に、出生時の母子ペアとして追跡されます。 訪問のたびに、健康と環境要因の影響を評価するために臨床検査が使用されています。 さらに、アンケートが管理され、臨床検査用の生体サンプルが提供されます。 この研究のデザインは非介入コホートですが、参加者には健康と衛生に関するアドバイスが提供されています。

研究の目的 この研究の目的は、母体の HIV 状態、子宮内および母乳育児中の累積 HAART 曝露、免疫抑制と免疫活性化、環境変数が低リソース環境の乳児の短期および長期転帰に及ぼす影響を調べることです。 私たちの研究は、HEU乳児の死亡率と罹患率に焦点を当てており、以前のコホートから確立された危険因子をテストしています。 データと生体材料は、妊娠から 2 歳までの母親と乳児から前向きに収集され、同じコミュニティの HEU 乳児と HUU 乳児を比較しています。 包括的な評価のために、母体の社会的経済的地位、家庭要因、サイトメガロウイルス (CMV)、b/c 型肝炎 (HBV)/(HCV)、梅毒や結核などの細菌性疾患などの持続性ウイルスとの同時感染を含む合併症の役割(TB)、腸内蠕虫、妊娠糖尿病 (GDM) や高血圧性疾患などの新たな NCD、および妊娠転帰に関する母親の栄養状態、乳児の死亡率と発達、免疫と健康がテストされます。 UZ-CHS は、将来の患者の臨床使用のために、妊娠の転帰が良好な妊婦のさまざまなサブグループに対して、現在利用できない参照範囲を確立する機会を提供します。

調査場所と地方自治体の関与 ハラレの自治体は 12 のポリクリニックを設立し、それぞれがプライマリー ヘルスケア、産科、産後ケア、および家族医療サービスのユニットで構成されています。 医療サービスには、HIV カウンセリング、迅速検査、HAART の開始と投与が含まれます。 GDM や動脈性高血圧症などの他の慢性疾患のモニタリングとフォローアップも提供されます。 医師は、複雑なケースに対応するために、サイトごとに週に 2 回来ます。 マタニティ サービスには、産前ケア、経過観察、HIV および梅毒のスクリーニングと治療が含まれます。 母親が出産後 10 日まで出産前サービスにアクセスするには 25 米ドルかかりますが、5 歳までの乳児の健康サービスは無料です。 母親は妊娠初期（4～12 週）に予約し、配偶者と一緒に HIV 検査を受けることをお勧めします。 現在、社会経済的な問題により、ほとんどの妊婦は妊娠が進んだ段階にあるときにポリクリニックで出生前登録を行います。この状況では、胎児が HIV 感染のリスクにさらされ、貧困と HIV 感染の悪循環が永続します。 調査前のサイト実現可能性評価に続いて、12 のポリクリニックのうち、クワザナ、ジヴァレセクワ (ルジェコ)、グレンビュー、およびブディリロが、母子保健サービスの量が多いこと、HIV 陽性の頻度が高いこと、および、同じ人口。 選択された 4 つのポリクリニックの集水域には、賃貸住宅を頻繁に変更することのない比較的安定したコミュニティがあります。 これらの施設では、市の看護師や助産師が、深夜に発生する出産時のデータ収集などの研究手順を支援します。 すべての参加者は、ハラレの南西部の高密度地域に住んでいます。 このコミュニティの住民は、失業率が高く、社会経済的地位が比較的劣っています。 ほとんどの人は、通常、1 日 3 回の適切な食事をする余裕がありません。 ほとんどの家族 (72%) は 1 日 1 ドル未満で生活しており、家の周りで小規模なガーデニングを行って食事を補っています。 家族は同様の構造と大きさの家に住んでいます (200 平方メートル)。 平均して 2 ～ 6 家族がこれらの比較的小さな家に住んでおり、極端な状況では最大 5 家族が 1 つの部屋を共有しています。 水の供給は不安定で、200 ～ 1,500 メートル離れた共同井戸を使用する必要があります。 この手で汲み上げた水は、飲料、調理、入浴、トイレの洗浄に使用されます。 下水バーストは一般的であり、ボアホールの近くで発生する可能性があります。 私たちの 4 つの研究サイトのうち、ブディリロとグレンビューの 2 つの汚染されたボアホールは、最近の 2018 年のコレラ流行の震源地でした。 これらの高密度地域の住民は、同じ都市の低密度地域に住む人々と比較して、感染症と NCDs の両方の不均衡な負担を共有しています。

サンプルサイズと統計的検出力 私たちの研究の主要なエンドポイントは、HEU 対 HUU 乳児の 2 歳までの乳児死亡率の比較です。 ジンバブエでは、生後 1 年で 50 人の幼児が死亡し、生後 2 年で 5 人の幼児が死亡すると予想されています。 HAART以前の時代では、3.2～3.9倍 生後 1 年目の死亡率は高く、生後 2 年目の死亡率は 2 倍高いと予想されていました。 より効率的な HIV 治療を備えた HAART 時代の HEU の死亡率は現在改善されている可能性があり、保守的な見積もりでは、生後 2 年以内の HEU 乳児の死亡率が 2 倍に増加すると仮定しました。 したがって、HUU 乳児の死亡率は 5.5%、HEU 乳児の死亡率は 11% と予想されました。 G*Power3 を使用した検出力分析によると、両側分析で 90% の検出力と 0.05 の有意水準でこのような差を検出するには、1,198 人の女性のサンプル サイズが必要でした。 そのため、HIV 感染者 600 人と感染していない 600 人の母親 1,200 人のサンプル サイズを選択しました。 潜在的な参加者は、ハラレ市の 4 つのポリクリニックのいずれかで定期的な産前ケア (ANC) の訪問中に特定されました。 潜在的な参加者は研究について説明を受け、口頭で参加に同意した人には、参加者が最もよく理解できる言語を使用して研究の目的と活動を完全に理解できるように、英語またはショナ語に翻訳された参加者情報シートが渡されました。 参加は任意であり、女性は研究の過程でいつでも参加を取りやめる機会が与えられます。 識字率はジンバブエではほぼ普遍的であり、すべての潜在的な参加者はインフォームド コンセント フォームを読んで理解できる必要があります。

母親のアンケートの手順と測定 登録時に、すべての母親は、包括的な臨床的、行動的、および環境的特徴付けを目的とした構造化されたアンケートに回答しました。 具体的な質問は、性感染症や避妊の使用を含む性行動と生殖に関する健康問題に対処します。 一般的な健康状態、健康を求める行動、母親のストレス、薬物/ハーブの使用が評価されます。 HIV陽性の母親では、HAARTの使用と期間、併存疾患、およびHIVステータスの開示とスティグマに関連する問題が記録されます。

衛生、衛生に関する具体的な質問 (トイレの種類と数、下水道)、飲料水、使用されるエネルギーの種類 (屋内汚染)、家の種類、家族が寝るために使用する部屋の数、および共有する個人の数一人部屋を聞かれます。 雇用状況、家族の月収、食料安全保障、食事、食費、健康管理、調理用燃料、貯蓄などの経済情報が評価されます。 ラジオ、テレビ、携帯電話/固定電話、冷蔵庫、自転車、オートバイ/スクーター、車などの農地または家庭用資産の所有は、社会経済的地位に関する追加情報を提供します。 さらに質問では、アルコールの使用、喫煙、睡眠習慣、身体活動、家庭内暴力、知識、信念、慣行などのパートナーからのサポートなど、母親のライフ スタイルについて説明します。

身体検査およびポイントオブケア検査 登録時に、研究助産師は完全な身体検査、血圧チェック、浮腫の評価および人体測定を行った。 WHO の臨床病期分類は、すべての HIV 陽性の女性に対して行われます。 栄養状態の評価は、ボディマス指数 (BMI) を含む標準的な人体測定指数を使用して行われます。 中上腕周囲 (MUAC) は、栄養失調または肥満の指標として使用されます。 MUAC は、肩峰と肘頭の間の中点距離で測定されます。 南アフリカの研究では、MUAC が 23 cm 未満の場合、妊娠前の BMI は 18.5 kg/m2 未満と予測されることが示されました。 実際的な理由から、母体の MUAC カットオフ ≤25 cm が栄養失調のマーカーとして使用されます。

母親を少なくとも5分間休ませた後、血圧（BP）を測定します。 腕の長さの少なくとも半分をカバーする通常または大きなカフを備えた Tenso MED BP マシンが使用されています。 妊娠中の高血圧は、妊娠中いつでも、4 時間間隔で少なくとも 2 回の別々の測定で 140/90 mmHg 以上の血圧によって定義されます。 140-159 mmHg の収縮期血圧または 90-109 mmHg の拡張期血圧としての軽度から中等度の高血圧は、重度の高血圧を伴い、少なくとも 160 mmHg の収縮期血圧または少なくとも 110 mmHg の拡張期血圧を指します。 慢性高血圧症は、妊娠 20 週前に診断された高血圧、または妊娠中に最初に診断され、産後 12 週を超えて持続する高血圧によって定義されます。 尿ディップスティックに基づくタンパク尿のあるすべての母親は、子癇前症の調査のために病院に紹介されます。 子癇前症の診断は確立された基準に従う。

母子のフォローアップ訪問 母親は、電話またはテキスト メッセージで、今後のフォローアップ訪問について通知されます。 参加者が予定された訪問の 7 日間のウィンドウ期間内に現れれば、訪問を逃した場合でもデータを収集できます。 母親が予定されたフォローアップの予約に来ない場合、登録時に文書化された母親の好みに厳密に従って、電話で彼女または彼女の近親者に連絡する試みおよび/または研究看護師による家庭訪問が行われます. 病気の乳児は、研究小児科医によって見られます。 分娩場所、分娩日、分娩方法に関する情報、乳児への長期的な授乳方法、健康、発育、環境に関する包括的な情報が収集されます。 登録と同様の詳細なアンケートは、6、12、18、および 24 か月後に再実施されます。 母親と乳児の健康診断は、母親は 6 週まで、乳児は受診のたびに実施されます。 研究手順には、血液、母乳、便の広範なバイオサンプリングも含まれます。 訪問のたびに、診療所への出席に対する交通費の払い戻しと、いくつかの軽食が提供されます。 母親は、何の理由も連絡もなく、少なくとも 2 回連続して予定された研究訪問に出席できない場合、中止するよう求められる場合があります。

乳児死亡率 この研究の主要な結果は、複合エンドポイントの「乳児死亡」であり、死産 (出生時の在胎週数が 20 週以上) および生後 2 年以内に死亡した乳児と定義されます。 新生児死亡 (0 ～ 364 日) は、さらに 3 つのサブグループに分類されます: 早期新生児死亡 (0 ～ 6 日)、後期新生児死亡 (7 ～ 27 日)、および新生児後死亡 (28 ～ 364 日)。 後期死亡 (365 ～ 730 日) も記録されます。 死亡率は、HIV曝露および感染（HEI）、HEU、およびHUUの乳児で個別に評価されます。

分娩時の有害転帰には、早産が含まれます。 妊娠期間は、早期早産 ≤ 31 週、後期早産 (32 ～ 36 週)、正期産 (少なくとも 37 週)、および満期産 (> 妊娠 42 週) に分けられます。 有害な出生転帰には、出生時仮死または呼吸窮迫症候群による出生時の蘇生の必要性が含まれます。 出生時仮死は、出生前、出生中、または出生直後の新生児への酸素供給の減少または中断に起因する病状として定義されます。 追加の有害転帰は、5 分間のスコアでアプガーが低い (<7)、妊娠期間に対して小さい、すなわち、妊娠期間の 10 パーセンタイル未満の体重/体長、LBW (<2,500g、生後 1 時間以内に体重を測定)、非常に LBW (<1,000) です。 g)、胎児巨人症 (出生時体重 > 4,000g、平均から 2 SD 未満の小頭症、先天性欠損症 (奇形、余分な指) および多胎出生。

乳児の成長 成長は、WHO の定義に従って Z スコアとして表されます。 ）。 成長の結果は、連続変数 (達成された Z スコアと訪問間の Z スコアの変化) として評価されます。 さらに、カテゴリ別の結果。中程度の消耗、発育阻害、重度の発育阻害、低体重および小頭症は、HAZ <-2、HAZ <-3、WAZ <-2 として評価されます。および HCAZ <-2、それぞれ。 乳児の成長の生物学的マーカーとして、ミネアポリスのR&D SystemsのELISAを使用して、6週齢で血漿インスリン様成長因子-1の血清レベルを測定します。

乳児 MUAC は生後 6 週から測定され、生後 0 ～ 6 か月未満の HEI、HEU、および HUU 乳児の発育阻害、低体重、消耗、貧血、有害な神経発達について、MUAC の感度、特異性、陽性適中率、および陰性適中率が測定されます。 、6～<12か月、12～24か月が決定されます。 WHZ は廃棄のゴールド スタンダードとして使用されます。

乳児罹患率の評価 罹患率日誌は、分娩時に母親に発行されます。 医療専門家は、病気の訪問または入院中に罹患日記に医療レポートを記録します。 これらには以下が含まれます：新生児低血糖、新生児黄疸、乳児貧血、皮膚発疹、先天性感染症、2年間にわたる感染の垂直感染、入院（頻度と期間）、病気の訪問（日付と期間）、文書化された地元の入院治療、発育阻害、消耗および異常な神経発達。 病気のエピソードの後、フォローアップのメモが日記に記録されます。 母親はまた、乳児の健康状態を継続的に主観的に評価し、包括的な記録のために日記に子供の病気を記録することをお勧めします。 日記は、24 か月で終了時に研究に提出されます。

乳児の発達 デンバーIIスクリーニングツールを使用して、6週間から2歳までの神経発達の結果を評価します。 このツールは、大まかな運動能力と細かい運動能力、言語の発達、社会的スキル、注意力の持続時間、一般的なコンプライアンスと恐怖心を評価します。 さらに、乳児の発達のマイルストーン (例: 歯が生える時間、最初に座る時間、歩く時間、話す時間など）が記録されます。

母体の生体サンプル 全血、血漿および血清、尿、および母乳を含む生体標本は、すべての来院時に収集されます。分娩時に便、臍帯血、羊水、胎盤を採取します。 敏感なサンプル (糞便、牛乳、尿) は、処理前に 4 時間以内に 4°C に置かれます。 すべてのサンプルは、取得後最大6時間以内に-80°Cのバイオバンクに保存されます。

母体の糞便サンプルは、直接湿式マウント顕微鏡法とホルマールエーテル濃縮技術を使用して、腸の原生動物と蠕虫の栄養型と卵子についてスクリーニングされます。

母体の全血球数の決定 全血球数（FBC）の評価のために、バキュテナーシステムによって5mlのエチレンジアミン四酢酸（EDTA）チューブに静脈血を採取し、Mindray© Hematology 3部差分、16パラメーターBC3600アナライザーを使用して分析します。中国全血使用。 妊娠中の貧血の診断に関する WHO の定義が使用されます (ヘモグロビン濃度 < 11.0 g/dl.)。 乳児の血液サンプル 乳児の静脈血は、FBC のために 7 ～ 10 日に可能な限り採取されます。 可能な限り、血漿サンプルを保管します。 採取される血液の量は、乳児の体重に応じて推奨される量の範囲内になります (つまり、 24時間で総血液量の1～5%以下、8週間で10%以下)。 重度の病気の乳児および臨床評価に従って重度の貧血が疑われる乳児からは採血されません。 乾燥した血液スポットは、全血サンプルまたはかかとの針刺しを使用して、訪問ごとに収集されます。 3 ～ 5 滴の血液を採取し、Whatman ろ紙で乾燥させ、摂氏 -80 度で保存します。

母親の血糖値 血清非絶食時ランダム血糖値を使用した妊娠糖尿病のスクリーニングは、グリコシル化ヘモグロブリン（HbA1c）レベルを含むMindray BS200 Chemistry Analyzer（Mindray、中国）を使用して、登録時に女性のサブグループに対して行われます。 WHO のガイドラインによると、HbA1c のカットオフが 6.5% であれば未診断の糖尿病が特定されますが、HbA1c が 5.6% 以上であれば将来の糖尿病のリスクが高い個人がマークされます。

母体の腎臓および肝機能プロファイル クレアチニン、尿素、および電解質 (ナトリウム、カリウム、および塩化物) は、ドイツの Beckman Coulter AU680 化学分析装置を使用して、母親の血清サンプルで行われます。 クレアチニンレベルを使用して、腎疾患の食事の修正式を使用して母体の糸球体濾過率を推定します。 肝機能と胆汁うっ滞は、血清アルブミン、フィブリノーゲン、ビリルビン、乳酸脱水素酵素（LDH）、アラニントランスアミナーゼ（ALT）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（AST）、アルカリホスファターゼ（ALP）、ガンマグルタミルトランスフェラーゼ（GGT）を使用して評価されます。

乳児の肝臓および腎機能検査は、十分な材料が利用可能であれば、6 か月および 24 か月のすべての乳児で評価されます。

母体の脂質および骨のプロファイル 高密度リポタンパク質コレステロール（HDL-C）、低密度リポタンパク質コレステロール（LDL-C）、総コレステロール（TC）、およびベースラインでのTC / HDL-C比は、登録時および24か月の血清を使用して決定されますファローアップ。 TC は、濃度が 4.4 mmol/L 未満の場合に LDL-C を計算するために使用されます。 母体の骨プロファイルについては、妊娠中および離乳時の血清イオン化カルシウム、リン、アルブミン、および ALP レベルの長期測定が行われます。

HIV の母体診断 HIV 感染の母体スクリーニングは、HIV 検査とカウンセリングに関するジンバブエ国家ガイドラインに従って、一連の検査アルゴリズムを使用して行われます。 定性的迅速免疫クロマトグラフィーアッセイ、標準診断 (SD) Bioline HIV-1/2 3.0 (SD Inc.、京畿道、韓国) が初期スクリーニングに使用されています。 Alere IdentifyTM HIV-1/2 キット (Abbott Diagnostics, USA. ウェスタンブロッティングは不確定な検査結果に使用されています。 HIVに感染していない母親のHIV検査は、血清変換者を特定するために6か月間隔で繰り返されます。

乳児 HIV の診断 HIV に曝露したすべての乳児では、メーカーの指示に従って、COBAS1 AmpliPrep/COBAS1 TaqMan1 HIV-1 定性検査 (Roche Molecular System) を使用して、HIV の早期検出が行われています。 検査は、分娩から離乳またはHIV感染の診断まで、毎回の来院時に行われます。

ＨＩＶ－１ ＲＮＡ負荷の定量化 製造業者の指示に従って、自動化されたＴａｑＭａｎ Ｃｏｂａｓ ＡｍｐｌｉＰｒｅｐ Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｂｒａｎｃｈｂｕｒｇ ＮＪ）を使用して、それぞれ登録時および２４ヶ月時に母体および乳児血漿サンプルをＨＩＶ－１ ＲＮＡ負荷について定量化する。 アッセイの検出下限は 20 コピー/mL です。

母子免疫状態の評価 母体の絶対ＣＤ４＋Ｔリンパ球数は、登録時および１２ヶ月間隔でドイツのＰａｒｔｅｃ Ｃｙｆｌｏｗカウンターを使用して、すべてのＨＩＶ陽性のＥＤＴＡ血液サンプルで計数される。 分析は、採血から6時間以内に行われます。

HAARTレベル 血漿、母乳、尿、羊水などのさまざまな母体区画におけるエファビレンツ、ラミブジン、およびテノホビルのレベルは、高速液体クロマトグラフィーを使用して測定されます。

母体の同時感染の評価 すべての母親とすべての暴露された乳児のHBVスクリーニングは、HBV表面抗原（HBsAg）を測定することによって行われ、抗HBsAgおよび抗コア抗体は、メーカーの指示に従って、免疫クロマトグラフィー、Pointecare Diagnostics、USAキットを使用して検出されます. ＱＩＡａｍｐ ＭｉｎＥｌｕｔｅ Ｖｉｒｕｓ Ｓｐｉｎ Ｋｉｔ Ｇｅｒｍａｎｙを使用してウイルスＤＮＡを単離した後、ＲｅａｌＳｔａｒ ＣＭＶ ＰＣＲ ｋｉｔ ｖ１．０ Ｇｅｒｍａｎｙを使用して、母体血清ＣＭＶ ＤＮＡ量および先天性ＣＭＶを測定する。

乳児の乾燥血液スポットは、暴露されたすべての乳児の感染マーカー、CMV、HBV、HCV、および HIV について評価されます。 抗トレポネマ・パリダム抗体アイソタイプは、SD Bioline 3.0定性免疫クロマトグラフィーキットを使用した母体梅毒プロファイリングに使用されます。 ラピッド プラズマ レアギン (RPR) テストは、微粒子炭素を含む性病研究所 (VDRL) 抗原の検出に使用されます。 梅毒の血清学は、SD Bioline 3.0定性免疫クロマトグラフィーキットを使用して、暴露された乳児の24か月の乳児血漿で行われます。

HIV および同時感染に対する感受性の免疫遺伝学 ヒト白血球抗原 (HLA) およびキラー細胞免疫グロブリン様受容体 (KIR) のタイピングは、DNA 配列決定および配列特異的プライマー ポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) を使用して、母体および乳児の DNA サンプルに対して実行されます。以前に以前に説明した。 HLA および KIR バリアントは、母体のウイルス学的状態、免疫状態、および臨床転帰と相関します。

EPI ワクチンに対する乳児の体液性免疫応答 HEU 乳児の感染症に対する免疫の相関関係は、まだよくわかっていません。 はしか、風疹、ロタウイルス、ポリオウイルス、B型肝炎ウイルス（HBV）、ジフテリア、破傷風トキソイド、百日咳、肺炎球菌、およびヘモフィルスインフルエンザb型（Hib）に対する抗体価は、市販のELISAベースの方法を使用して測定されます。 測定は、12、18、および/または24か月のワクチン接種後に行われます。 保護と相関する血清力価（例： 抗ロタウイルス免疫グロブリン A ≥20 U/mL は、HUU、HEI、および HEU 乳児で評価されます。

乳児のアトピー症状と感作の評価 アトピー性皮膚炎の原因と時期については、SSA ではまだ十分に説明されていません。 妊娠第三期の母親のアレルギー状態は、食物への渇望、母親の薬物使用、アレルギーおよび腸の症状を含む母親の食事に関する詳細なアンケートによって評価されます。 分娩時から、研究助産師または研究看護師は、かゆみを伴う発疹および/または目に見える屈曲性皮膚炎の存在によって定義されるアトピー性皮膚炎の存在について、すべての乳児を物理的に検査します。 おむつかぶれ、目の周りの発疹、および/または頭皮の鱗屑は、湿疹の診断とは見なされません. 選択した乳児血液サンプル中の総および特異的血清免疫グロブリンE（IgE）を免疫アッセイアナライザー（Thermofisher、フライブルク、ドイツ）で測定して、前述のアトピー状態の臨床診断をサポートします。 具体的には、鶏卵、牛乳、ピーナッツ、空気アレルゲン、草花粉、猫、犬のフケ、ハウスダストダニに対する IgE 抗体を評価します。 テストされた食品または吸入アレルゲンの1つ以上に対して特定の血清IgEレベルが0.3 IU / mlを超える乳児は、感作されていると見なされます。 食物アレルギーは、乳児の罹患率、出産前の薬物使用、および妊娠中に母親が切望する食物を含む栄養と相関します.

サブスタディのまとめ

1. 腸内細菌叢のサブスタディ このサブスタディは、HIV 感染と HAART の使用が腸内細菌叢の成熟にどのように影響するかを評価し、環境性腸管機能不全 (EED. 妊娠から 24 か月までの連続した母子便サンプルを使用して、16 個の小サブユニット (S) リボソーム リボ核酸 (rRNA) シーケンスを実行し、97% 以上の配列同一性を備えた門および操作上の分類単位の組成を評価します。多様性。 選択されたサンプルでは、​​細菌の全ゲノム メタゲノミクス ショットガン シーケンスが実行され、微生物叢の代謝の可能性が特定されます。 さらに、リポ多糖類（LPS）やエンドトキシンコア抗体（EndoCAb）、腸細胞のマーカーとしての腸脂肪酸結合タンパク質（I-FABP）などの損傷した腸壁を横切る微生物移動のマーカーの評価を含む、メタボロームの質量分析が行われます。ダメージ。 微生物叢と代謝産物のマーカーは、乳児の成長、発達、および感染症に対する感受性と相関します。
2. 免疫メタボロミクスのサブスタディ このサブスタディは、Luminex 技術による ELISA ベースのマルチプレックス テストを使用して、少なくとも 24 の血漿炎症性免疫活性化マーカーを調査することを目的としており、HIV 感染女性における有害な妊娠転帰およびその後の乳児の成長と発達の障害の危険因子として使用されます。 この調査研究では、長期（> 7か月）、中期（1-7か月）、および非/短期（非または<1か月）のHAART曝露および非感染の50人以上のHIV感染女性を選択しますコントロールとしての女性。 メタボロームとミトコンドリアの機能不全を評価するために、質量分析技術を使用して、アミノ酸、活性酸素種、トリグリセリド、ジアシルグリセリド、コレステロール、リン脂質、脂肪酸、過酸化脂質、オキシ脂質などの幅広い代謝物を測定します。
3. 細胞性免疫サブスタディ NK 細胞の数と機能の変化が HEU 乳児で発生し、持続性ウイルスに関連する重度の感染症と悪性腫瘍の素因となる可能性があるという仮説を立てています。 十分な血液量が 2 mL 以上の乳児では、T 細胞と NK の数と機能を決定するために、24 か月で母体が短期、中期、長期の HAART 曝露を受けた HUU および HEU 乳児から末梢血由来の単核細胞を分離します。セルは前述のとおりです。
4. 潜在性結核の同時感染サブスタディ 未診断の潜在性結核は、リソースの少ない環境での乳児死亡率の増加を部分的に説明できるという仮説を立てています。 TST は潜伏結核のスクリーニングに使用されています。ただし、ジンバブエで定期的に投与されている BCG ワクチンとの相互作用により、TST 特異性が研究集団で大幅に低下する可能性があります。 TB、IGRA) を使用して、妊娠中および出産後 6 週間のサブグループの女性の潜在性 TB をテストし、TST に対して評価します。 さらに、結核炎症を示唆する組織学的病変について胎盤サンプルを試験する。 IGRA の測定値と TST 病変のサイズは、母体および乳児の有害転帰と相関しています。
5. 母親のストレスのサブスタディ これは、登録時および出産後 6 週間の知覚ストレスアンケートを使用して、母親のストレスの有病率、危険因子、および対処メカニズムを評価します。
6. HIV/HAART 曝露と神経発達転帰 このサブ研究では、HIV 感染に関連する潜在的な長期神経発達後遺症と、Mullen ツールを使用して 12 か月および 24 か月で HAART 曝露の延長を評価しています。

将来の研究では、乳児から思春期まで追跡する可能性があります。 現在の都市ベースの研究に関連する家庭および環境の交絡因子を制御するには、農村部の並行観察コホートが望ましい。