University of Zimbabwe College of Health Science (UZ-CHS) BIRTH COHORT Study (UZ-CHS-BC)

Over én million spedbarn blir født av HIV-1-infiserte kvinner hvert år i Afrika sør for Sahara. I Zimbabwe er det 379 000 årlige fødsler, med omtrent 48 000 spedbarn som blir født hvert år av HIV-1-infiserte kvinner på livslang høyaktiv antiretroviral terapi (HAART). Det er uttrykt bekymringer for de generelle helse- og utviklingsresultatene til HIV-1-eksponerte, men uinfiserte (HEU) spedbarn født av HIV-1-infiserte kvinner. Til tross for at de er HIV-negative, har HEU-barn 3,9 og 2,0 ganger høyere dødelighet enn HIV-ueksponerte og uinfiserte (HUU) spedbarn i løpet av henholdsvis første og andre leveår. Sammenlignet med deres HUU-kolleger, kan HEU-barn ha ugunstige fødselsutfall, svekket vekst, utvikling og andre helseproblemer. Dette er et betydelig folkehelseproblem, siden spedbarn født med lav fødselsvekt (LBW) i voksen alder er mer sannsynlig å dø av ikke-smittsomme sykdommer (NCD) som hypertensjon, hjerneslag og type 2 diabetes. I Zimbabwe har HEU-spedbarn blitt godt studert under pre-HAART-tiden; men samtidig mangler bevis. I tillegg har tidligere studier ikke karakterisert kvinner i svangerskapet, og utfallet har ikke blitt kontrollert for andre vanlige prenatale infeksjonspatogener, inkludert ytterligere risikofaktorer som for tidlig fødsel, LBW, varighet av amming, fattigdom og mors psykososiale stressfaktorer. Derfor er det nødvendig med en dyptgående og omfattende karakterisering av HEU-spedbarn, ikke bare for å unngå HIV-infeksjon, men også for å forbedre kort- og langsiktige helseutfall for de utsatte.

Risikoer ved HAART under graviditet I Zimbabwe består dagens standard for omsorg for HIV-infiserte kvinner for å forhindre mor-til-barn-overføring (MTCT) av HIV av Tenofovir, Lamivudine og Efavirenz (TENOLAM-E). Imidlertid kan antiretrovirale legemidler hope seg opp i fostervannet, og dermed utgjøre en risiko under delikat embryonal og fosterutvikling. Timing av HAART kan også være viktig, siden en sørafrikansk studie viste at mødre som startet zidovudinbasert HAART før unnfangelsen hadde dobbelt så høye odds for prematur fødsel sammenlignet med mødre som startet HAART etter unnfangelsen. Toksiske mekanismer for anti-HIV-medisiner inkluderer mitokondriell toksisitet og mitokondrielle DNA-mutasjoner hos mødre og muligens også hos spedbarn. Mitokondriell dysfunksjon vil igjen øke produksjonen av reaktive oksygenarter og aktivering av IL-1-produksjon. Interferens med lipidmetabolisme er en annen mekanisme for HAART-toksisitet. Tidlig eksponering for Efavirenz-basert HAART har vært assosiert med nevroutviklingsmessige og sosio-emosjonelle utfordringer som kan føre til atferdssvikt. I tillegg kan vedvarende infeksjoner, skadelige effekter av sosioøkonomisk status og mors kostholdsforurensninger som dioksiner eller klorerte plantevernmidler også spille en rolle.

Årsakene til de observerte uønskede helseutfallene til HEU-spedbarn kan være relatert til en endret immunsystemtilstand. Imidlertid forblir immunprofiler utover ett år for HEU-barn stort sett uutforsket. I Zimbabwe fremmes vaksinasjonskampanjer for aktiv immunisering av spedbarn via det utvidede immuniseringsprogrammet (EPI). Selv om toppantistofftitre etter enkelte EPI-vaksiner er normale hos HEU-spedbarn, har det ikke vært studier av levetiden til disse immunresponsene. In utero HIV-eksponering øker pro-inflammatoriske cytokinnivåer produsert av placentaceller. Ko-infeksjoner ser ut til å være viktige siden kenyanske HEU-nyfødte (med et høyt antall mors ko-infeksjoner) hadde høyere nivåer av inflammatoriske plasmamarkører enn HEU-kontroller fra studier i USA. Videre har HEU-spedbarn høyere CMV-belastninger, som delvis kan være drevet av maternal viremi og kan bidra til immunaktivering. Dermed fortsetter HEU-spedbarn å ha grunnlinjebetennelse som kan knyttes til dårlige kort- og langsiktige utfall, og antiinflammatoriske intervensjoner kan forbedre spedbarnshelsen. Intervensjonsstudier med HAART-behandling hos gravide kvinner er etisk utfordrende; virkningen av HAART på nevro/immun utvikling kan imidlertid vurderes i studier som UZ-CHS fødselskohort, hvor mødre oftere, på grunn av økonomiske utfordringer, booker for sent til svangerskapsledelsen, og noen er HAART-naive i tredje trimester. Bevis for risikoen for HAART-eksponering i alternativ B+-æra for kort- og langsiktige utfall av HEU-spedbarn er fortsatt begrenset. Så vidt vi vet har imidlertid ingen studier korrelert HAART-nivåer i mors fostervann, urin, plasma og longitudinell morsmelk og relatert til ugunstige graviditetsutfall, spedbarnsvekst, metabolisme og (immun/nevro) utvikling.

Metoder University of Zimbabwe College of Health Science (UZ-CHS) fødselskohortstudie er en prospektiv observasjonskohortstudie som sammenligner spedbarn født av HIV-infiserte og HIV-uinfiserte kvinner i en ressursfattig setting av vestlige forsteder med høy tetthet til Harare primærhelsepoliklinikker. . 1200 gravide kvinner (600 HIV-infiserte mødre og 600 HIV-uinfiserte kontroller) i tredje trimester ble registrert fra januar 2016 til juni 2019. Deltakerne blir fulgt som mor-baby-par ved fødselen, innen 10 dager etter livet 6, 10, 14, 24, 48, 72 og 96 uker gamle. Ved hvert besøk brukes kliniske undersøkelser for å vurdere helse og påvirkning av miljøfaktorer. I tillegg administreres spørreskjemaer og bioprøver for laboratorietester. Utformingen av studien er ikke-intervensjonell kohort, men deltakerne får råd om helse og hygiene.

Målet med studien Denne studien tar sikte på å undersøke virkningen av mors HIV-status, kumulativ HAART-eksponering i livmoren og gjennom amming, immunundertrykkelse og immunaktivering og miljøvariabler på kort- og langsiktige utfall hos spedbarn i et miljø med lav ressurs. Vår studie fokuserer på dødelighet og sykelighet hos HEU-spedbarn, og tester etablerte risikofaktorer fra tidligere kohorter. Data og biomaterialer blir samlet inn prospektivt fra mødre og spedbarn fra graviditet til 2 års alder og sammenligner HEU med HUU-spedbarn fra samme samfunn. For en omfattende vurdering, rollen til mors sosioøkonomiske status, husholdningsfaktorer, komorbiditeter inkludert samtidige infeksjoner med vedvarende virus som cytomegalovirus (CMV), hepatitt b/c (HBV)/(HCV), bakterielle sykdommer som syfilis og tuberkulose (TB), intestinale helminths, nye NCDs, som svangerskapsdiabetes mellitus (GDM) og hypertensive lidelser og mors ernæringsstatus på svangerskapsutfall, spedbarnsdødelighet og utvikling, immunitet og helse vil bli testet. UZ-CHS tilbyr en mulighet til å etablere referanseområder som for øyeblikket ikke er tilgjengelige, for ulike undergrupper av gravide kvinner med et gunstig svangerskapsresultat for klinisk bruk for fremtidige pasienter.

Studiesteder og lokalt kommunalt engasjement Harare kommune har etablert 12 poliklinikker som hver omfatter enheter for primærhelsetjeneste, barsel, fødselshjelp og en familiehelsetjeneste. Medisinske tjenester inkluderer HIV-rådgivning og rask testing og igangsetting og administrering av HAART. Overvåking og oppfølging for andre kroniske tilstander inkludert GDM og arteriell hypertensjon tilbys også. En lege kommer to ganger i uken per sted for å behandle kompliserte tilfeller. Barseltjenester omfatter svangerskapsomsorg, oppfølgingsbesøk og HIV- og syfilisscreening og behandling. Det koster en mor USD 25 for å få tilgang til svangerskapstjenester inntil 10 dager etter fødsel, mens helsetjenester er gratis for spedbarnet inntil 5 år. Mødre oppfordres til å bestille tidlig i svangerskapet (uke 4-12) og teste for hiv sammen med ektefellen. For tiden, på grunn av sosialøkonomiske utfordringer, går de fleste gravide kvinner til registrering ved poliklinikkene når svangerskapet er i avanserte stadier, en situasjon som setter deres ufødte babyer i fare for HIV-overføring, og opprettholder den onde sirkelen av fattigdom og HIV-infeksjon. Etter en gjennomførbarhetsvurdering på stedet ble av de 12 poliklinikkene, Kuwadzana, Dzivaresekwa (Rujeko), Glenview og Budiriro valgt ut basert på de høyere volumene av mødre- og barnehelsetjenester, hyppigheten av HIV-positivitet og fraværet av konkurrerende undersøkelser rettet mot samme befolkning. Opptaksområdene til de fire utvalgte poliklinikkene har relativt stabile lokalsamfunn som ikke ofte bytter utleieboliger. Kommunesykepleiere og jordmødre ved disse anleggene bistår med studieprosedyrer som datainnsamling under fødsel som skjer sent på kvelden. Alle deltakerne bor i sørvestlige områder med høy tetthet i Harare. Innbyggere i dette samfunnet har relativt dårlig sosioøkonomisk status med høye arbeidsledighetstall. De fleste individer har generelt ikke råd til 3 passende måltider per dag. De fleste familier (72%) lever på mindre enn 1 dollar per dag og supplerer kostholdet gjennom småskala hagearbeid rundt husene deres. Familier bor i hus med lignende struktur og størrelse (200 kvadratmeter). I gjennomsnitt bor 2-6 familier i disse relativt små husene og i noen ekstreme situasjoner deler opptil 5 familiemedlemmer et enkeltrom. Vannforsyningen er uregelmessig, noe som gjør bruk av felles borehull på 200-1500 meters avstand nødvendig. Dette manuelt hentede vannet brukes til drikking, matlaging, bading og toalettspyling. Kloakksprengninger er vanlige og kan oppstå nær borehull. Forurensede borehull i to av våre fire studiesteder, Budiriro og Glenview, har vært episentre for den nylige koleraepidemien i 2018. Beboere i disse områdene med høy tetthet deler en uforholdsmessig stor byrde av både smittsomme sykdommer og NCDs i forhold til de som bor i områder med lav tetthet i samme by.

Prøvestørrelse og statistisk kraft Det primære endepunktet for vår studie er sammenligningen av spedbarnsdødelighet frem til to års alder hos HEU versus HUU-spedbarn. I Zimbabwe forventes det 50 spedbarnsdødsfall det første året og 5 spedbarnsdødsfall i det andre leveåret. I pre-HAART-tiden, en 3,2-3,9-dobling Det var forventet høyere dødelighet i første leveår og 2 ganger høyere dødelighet i andre leveår. Dødeligheten av HEU i HAART-tiden med mer effektiv HIV-behandling kan nå forbedres, og i en konservativ vurdering antok vi en 2-dobling av dødeligheten hos HEU-spedbarn i løpet av de to første leveårene. Vi forventet derfor 5,5 % dødelighet hos HUU-spedbarn og 11 % hos HEU-spedbarn. I følge kraftanalysen vår ved bruk av G*Power3 var det nødvendig med en prøvestørrelse på 1198 kvinner for å oppdage en slik forskjell med en styrke på 90 % og et signifikansnivå på 0,05 i en tosidig analyse. Vi valgte derfor en prøvestørrelse på 1200 mødre, 600 med og 600 uten HIV-infeksjon. Potensielle deltakere ble identifisert under rutinemessige fødselsbesøk (ANC) ved noen av de fire City of Harare-poliklinikkene. De potensielle deltakerne ble orientert om studien, og de som muntlig takket ja til å delta, fikk deltakerinformasjonsarket skrevet enten på engelsk eller oversatt til språket Shona-språk for å sikre full forståelse av studiens mål og aktiviteter ved å bruke det språket som deltakeren forstår best. Det er frivillig å delta og kvinner får mulighet til å trekke seg når som helst i løpet av studiet. Leseferdighet er nesten universell i Zimbabwe, og alle potensielle deltakere bør kunne lese og forstå skjemaet for informert samtykke.

Mødres spørreskjemaprosedyrer og målinger Ved innskrivning svarte alle mødre på et strukturert spørreskjema med sikte på en omfattende klinisk, atferdsmessig og miljømessig karakterisering. Spesifikke spørsmål vil ta for seg seksuell atferd og reproduktive helseproblemer, inkludert seksuelt overførbare sykdommer og bruk av prevensjon. Generell helse, helsesøkende atferd, mødres stress og rus-/urtebruk vil bli vurdert. Hos HIV-positive mødre vil HAART-bruk og -varighet, komorbiditeter og problemer knyttet til avsløring av HIV-status og stigma bli registrert.

For å ta opp hygiene, spesifikke spørsmål om sanitærforhold (type og antall toaletter, kloakk), drikkevann, type energi som brukes (innendørs forurensning), hustype, antall rom brukt til å sove av familien og antall personer som deler et enkeltrom vil bli spurt. Økonomisk informasjon som omfatter ansettelsessituasjon, familiens månedlige inntekt, matsikkerhet, kosthold, penger satt av til mat, helsetjenester, matlagingsdrivstoff og sparing vil bli vurdert. Eierskap av jordbruksland eller husholdningsmidler, inkludert radioer, fjernsyn, mobiltelefoner/faste telefoner, kjøleskap, sykler, motorsykler/scootere og biler vil gi ytterligere informasjon om sosial økonomisk status. Ytterligere spørsmål vil ta for seg mors livsstil som alkoholbruk, røyking, sovevaner, fysiske aktiviteter, vold i hjemmet og støtte fra partner, inkludert kunnskap, tro og praksis.

Fysisk undersøkelse og testing på stedet Ved påmelding utførte studiejordmoren en fullstendig fysisk undersøkelse, blodtrykkskontroller, vurdering av ødem og antropometri. WHO klinisk iscenesettelse vil bli utført for alle HIV-positive kvinner. Vurdering av ernæringsstatus vil bli gjort ved å bruke standard antropometriske indekser inkludert kroppsmasseindeks (BMI). Midt øvre armomkrets (MUAC) vil bli brukt som en indikator for underernæring eller fedme. MUAC vil bli målt ved midtpunktsavstanden mellom (acromion og olecranon. En sørafrikansk studie viste at en MUAC på <23 cm, spådde en BMI før graviditet på <18,5 kg/m2. Av praktiske grunner vil en mors MUAC cut-off på ≤25 cm bli brukt som markør for underernæring.

Blodtrykket (BP) vil bli målt etter å ha gitt moren minst 5 minutters hvile. Det brukes en Tenso MED BP-maskin med normal eller stor mansjett som dekker minst halvparten av armlengden. Hypertensjon under graviditet er definert av et blodtrykk på ≥140/90 mmHg ved minst 2 separate målinger med 4 timers mellomrom, når som helst i løpet av svangerskapet. Mild til moderat hypertensjon som systolisk blodtrykk på 140-159 mmHg eller diastolisk blodtrykk på 90-109 mmHg med alvorlig hypertensjon refererer til systolisk blodtrykk på minst 160 mmHg eller diastolisk blodtrykk på minst 110 mmHg. Kronisk hypertensjon er definert av hypertensjon, diagnostisert enten før 20 ukers svangerskap eller første gang diagnostisert under graviditet og vedvarer utover 12 uker postpartum. Alle mødre med proteinuri basert på urinpeilepinner henvises til sykehuset for utredning av svangerskapsforgiftning. Diagnose av svangerskapsforgiftning vil følge etablerte kriterier.

Mødre- og spedbarnsoppfølgingsbesøk Mødre blir påminnet om sine kommende oppfølgingsbesøk på telefon eller sms. Data kan fortsatt samles inn i tilfeller av tapte besøk forutsatt at deltakeren dukker opp innen en periode på syv dager etter de planlagte besøkene. Hvis en mor ikke møter opp til sine planlagte oppfølgingsavtaler, forsøkes kontakt med hennes eller hennes pårørende via telefon og/eller hjemmebesøk av forskningssykepleieren strengt tatt i henhold til mors preferanser dokumentert ved påmelding. Syke spedbarn vil bli sett av studien Barnelege. Informasjon om sted, dato og leveringsmåte, langsgående spedbarnsmatingspraksis og omfattende informasjon om helse, utvikling og miljø vil bli samlet inn. Omfattende spørreskjemaer som ligner på innmelding vil bli administrert på nytt etter 6, 12, 18 og 24 måneder. En fysisk undersøkelse av mødre og deres spedbarn vil bli utført for mødre frem til uke 6 og for babyer ved hvert besøk. Studieprosedyrer inkluderer også omfattende bio-prøvetaking av blod, morsmelk og avføring. Ved hvert besøk gis transportrefusjon for klinikkoppmøte sammen med noen forfriskninger. Moren kan bli bedt om å avbryte dersom hun fortløpende ikke møter opp til minst to påfølgende planlagte studiebesøk uten noen grunn(er) eller kommunikasjon.

Spedbarnsdødelighet Hovedresultatet av denne studien er det sammensatte endepunktet "spedbarnsdød", definert som dødfødsel (gestasjonsalder ved fødsel ≥20 uker) og spedbarn som dør i løpet av de to første leveårene. Nyfødtdødsfall (0-364 dager) vil videre deles inn i tre undergrupper: tidlig neonatal død (0-6 dager), sen neonatal død (7-27 dager) og post-neonatal død (28-364 dager). Sene dødsfall (365-730 dager) vil også bli registrert. Dødeligheten vil bli vurdert separat hos HIV-eksponerte og infiserte (HEI), HEU og HUU spedbarn.

Uønskede utfall ved fødsel inkluderer prematur fødsel. Svangerskapsalder vil deles inn i tidlig prematur ≤31 uker, sen prematur (32-36 uker), termin (minst 37 uker) og post-term fødsel (>42 uker med svangerskap). Uønskede fødselsutfall inkluderer behov for gjenopplivning ved fødsel på grunn av fødselskvelning eller respiratorisk distress-syndrom. Fødselsasfyksi vil bli definert som enhver medisinsk tilstand som følge av redusert eller avbrutt tilførsel av oksygen til et nyfødt spedbarn før, under eller like etter fødselen. Ytterligere uønskede utfall er lav Apgar ved 5 minutters score (<7), liten for svangerskapsalder, dvs. vekt/lengde under 10. persentilen for svangerskapsalder, LBW (<2500g, veid innen den første timen av livet, veldig LBW (<1000) g), fostermakrosomi (fødselsvekt > 4000g, mikrocefali <2 SD fra gjennomsnittet, fødselsdefekter (misdannelser, ekstra siffer) og flerfødsler.

Spedbarnsvekst Vekst vil uttrykkes som Z-skår i henhold til WHOs definisjoner: Vekt-for-alder (WAZ), høyde-for-alder (HAZ), vekt-for-høyde (WHZ) og hode-omkrets-for-alder (HCAZ) ). Vekstresultater vil bli evaluert som kontinuerlige variabler (oppnådd Z-score og endring i Z-score mellom besøk). I tillegg kategoriske utfall; moderat sløsing, stunting, alvorlig stunting, undervekt og mikrocefali vil bli vurdert som HAZ <-2, HAZ <-3, WAZ <-2; og HCAZ <-2, henholdsvis. Som en biologisk markør for spedbarnsvekst, vil serumnivåer av plasma insulinlignende vekstfaktor-1 bli bestemt ved 6 ukers alder ved bruk av ELISA, R&D Systems, Minneapolis.

Spedbarns MUAC blir målt fra 6 ukers alder og sensitivitet, spesifisitet, positiv prediktiv verdi og negative prediktive verdier av MUAC for stunting, undervekt, sløsing, anemi og uønsket nevroutvikling hos HEI, HEU og HUU spedbarn i alderen 0-<6 måneder , 6-<12 måneder og 12-24 måneder vil bli bestemt. WHZ vil bli brukt som gullstandard for sløsing.

Vurdering av spedbarnssykelighet Morbiditetsdagbøker utstedes til mødre ved fødsel. Legepersonell dokumenterer medisinske rapporter i sykedagboken ved sykebesøk eller sykehusinnleggelser. Disse vil inkludere: neonatal hypoglykemi, neonatal gulsott, anemi hos spedbarn, hudutslett, medfødte infeksjoner, vertikal overføring av infeksjon over 2 år, eventuell sykehusinnleggelse (hyppighet og varighet), sykebesøk (datoer og varighet), dokumenterte lokale døgnbehandlinger, stunting , sløsing og unormal nevroutvikling. Etter sykdomsepisoder vil oppfølgingsnotater bli registrert i dagboken. Mødre vil også fortløpende subjektivt vurdere spedbarns trivsel og oppfordres til å dokumentere eventuell barnesykdom i dagboken for utfyllende dokumentasjon. Dagboken vil bli levert til studien ved utgang, ved 24 måneder.

Spedbarns utvikling Nevroutviklingsresultater vil bli evaluert fra seks uker til to års alder ved hjelp av Denver II-screeningsverktøyet. Dette verktøyet vurderer grov- og finmotorikk, utvikling av språk, sosiale ferdigheter, oppmerksomhetsspenn, generell etterlevelse og frykt. I tillegg kan spedbarns utviklingsmilepæler (f.eks. tidspunkt for tenner, første gang du sitter, går eller snakker) vil bli registrert.

Bioprøver fra mor Biologiske prøver inkludert fullblod, plasma og serum, urin og morsmelk vil bli tatt ved alle besøk; avføring, navlestrengsblod, fostervann og morkake samles opp ved fødsel. Sensitive prøver (avføring, melk, urin) plasseres ved 4°C i ikke lenger enn 4 timer før behandling. Alle prøver vil bli lagret i en biobank ved -80°C innen maksimalt 6 timer etter anskaffelse.

Mors avføringsprøver vil bli screenet for intestinale protozoer og helminthes trofozoitter og egg ved hjelp av direkte våtmonteringsmikroskopi og den formelle eterkonsentrasjonsteknikken.

Bestemmelse av mors fullblodtelling For vurdering av fullblodtelling (FBC), vil venøst ​​blod samles opp i 5 ml ethylenediamintetraeddiksyre (EDTA) rør ved hjelp av et vacutainer-system og analyseres med en Mindray© Hematology 3-delt differensial, 16 parametere BC3600 Analyser, Kina bruker fullblod. WHO-definisjonen for diagnostisering av anemi under graviditet vil bli brukt (hemoglobinkonsentrasjon <11,0 g/dl.) Spedbarnsblodprøver Spedbarnsveneblod vil bli tatt når det er mulig etter 7-10 dager for FBC. Når det er mulig, vil plasmaprøver bli lagret. Volumet av blod som samles inn vil være innenfor anbefalte mengder avhengig av vekten til spedbarnet (dvs. ≤1-5 % av totalt blodvolum over 24 timer og ≤ 10 % over 8 uker). Det vil ikke bli tatt blod fra alvorlig syke spedbarn og de med mistanke om alvorlig anemi i henhold til klinisk vurdering. Tørkede blodflekker vil bli samlet ved hvert besøk ved hjelp av fullblodsprøver eller et nålestikk i hælen. 3-5 dråper blod vil bli samlet og tørket på Whatman-filterpapir og lagret ved -80◦ Celsius.

Mors blodsukkernivå Screening for svangerskapsdiabetes ved å bruke serum ikke-fastende tilfeldige blodsukkernivåer vil bli utført for en undergruppe av kvinner ved registrering ved bruk av Mindray BS200 Chemistry Analyzer (Mindray, Kina), inkludert nivåer av glykosylert hemoglobulin (HbA1c). Et cut-off for HbA1c på 6,5 % vil identifisere udiagnostisert diabetes, mens en HbA1c ≥5,6 % vil markere individer med økt risiko for fremtidig diabetes i henhold til WHOs retningslinjer.

Mors nyre- og leverfunksjonsprofiler Kreatinin, urea og elektrolytter (natrium, kalium og klorid) vil bli gjort på mors serumprøver ved å bruke Beckman Coulter AU680 kjemianalysator, Tyskland. Kreatininnivåer vil bli brukt til å estimere mors glomerulære filtrasjonshastighet ved å bruke ligningen Modified for Diet in Renal Disease. Leverfunksjon og kolestase vil bli vurdert ved bruk av serumalbumin, fibrinogen, bilirubin, laktatdehydrogenase (LDH), alanintransaminase (ALT), aspartataminotransferase (AST), alkalisk fosfatase (ALP) og gammaglutamyltransferase (GGT).

Spedbarns lever- og nyrefunksjonstester vil bli vurdert hos alle spedbarn ved 6 og 24 måneder forutsatt at tilstrekkelig materiale var tilgjengelig.

Mors lipid- og benprofiler Høydensitetslipoproteinkolesterol (HDL-C), lavdensitetslipoproteinkolesterol (LDL-C), totalkolesterol (TC) og TC/HDL-C-forhold ved baseline vil bli bestemt ved bruk av serum ved innrullering og etter 24 måneder følge opp. TC vil bli brukt til å beregne LDL-C når konsentrasjoner er under 4,4 mmol/L. For maternelle benprofiler vil det bli utført longitudinelle målinger av serum ionisert kalsium, fosfor, albumin og ALP nivåer i svangerskapet og ved avvenning.

Morsdiagnose av HIV Mors screening for HIV-infeksjon vil bli gjort ved hjelp av serietestingsalgoritmen i henhold til Zimbabwes nasjonale retningslinjer for HIV-testing og rådgivning. Kvalitative raske immunokromatografiske analyser, Standard Diagnostics (SD) Bioline HIV-1/2 3.0 (SD Inc., Kyonggi-Do, Sør-Korea) brukes til innledende screening. Positive tester bekreftes ved bruk av Alere DetermineTM HIV-1/2-settet (Abbott Diagnostics, USA. Western blotting brukes for ubestemte testresultater. HIV-testing av HIV uinfiserte mødre vil bli gjentatt med 6 måneders mellomrom for å identifisere serokonverterere.

Diagnose av spedbarns-HIV Hos alle HIV-eksponerte spedbarn blir tidlig påvisning av HIV gjort ved å bruke COBAS1 AmpliPrep/COBAS1 TaqMan1 HIV-1 kvalitativ test (Roche Molecular System) i henhold til produsentens instruksjoner. Tester utføres ved hvert besøk fra fødsel til avvenning eller diagnostisering av HIV-infeksjon.

Kvantifisering av HIV-1 RNA-belastning Plasmaprøver fra mor og spedbarn vil kvantifiseres for HIV-1-RNA-belastning ved henholdsvis registrering og 24 måneder ved bruk av en automatisert TaqMan Cobas AmpliPrep Roche Diagnostics, Branchburg NJ), i henhold til produsentens instruksjoner. Den nedre deteksjonsgrensen for analysen er 20 kopier/ml.

Vurdering av mors-spedbarns immunstatus Maternal absolutte CD4+ T-lymfocytttellinger telles opp i EDTA-blodprøver for alle HIV-positive ved bruk av Partec Cyflow-teller, Tyskland ved registrering og med 12 måneders mellomrom. Analyser vil bli utført innen 6 timer etter blodprøvetaking.

HAART-nivåer Nivåer av Efavirenz, Lamivudin og Tenofovir i forskjellige morsrom, inkludert plasma, morsmelk, urin og fostervann vil bli målt ved hjelp av høyytelses væskekromatografi.

Vurdering av mors co-infeksjoner HBV-screening av alle mødre og alle eksponerte spedbarn vil bli utført ved å måle HBV overflateantigen (HBsAg), anti-HBsAg og anti-kjerne antistoffer vil bli påvist ved bruk av immunokromatografiske, Pointecare Diagnostics, USA-sett i henhold til produsentens instruksjoner . CMV DNA-belastninger fra mors serum og medfødt CMV vil bli målt ved hjelp av RealStar CMV PCR-settet v1.0 Tyskland, etter isolering av viralt DNA ved bruk av QIAamp MinElute Virus Spin Kit Germany.

Spedbarns tørkede blodflekker vil bli evaluert for infeksjonsmarkører, CMV, HBV, HCV og HIV for alle eksponerte spedbarn. Anti-Treponema pallidum antistoffisotyper vil bli brukt for mors syfilisprofilering ved bruk av SD Bioline 3.0 kvalitativt immunokromatografisk sett. Rapid Plasma Reagin (RPR) test vil bli brukt for påvisning av Venereal disease research laboratory (VDRL) antigen som inneholder mikropartikkelformig karbon. Syfilis-serologi vil bli utført på spedbarnsplasma ved 24 måneder hos eksponerte spedbarn ved bruk av SD Bioline 3.0 kvalitativt immunokromatografisk sett.

Immunogenetikk av mottakelighet for HIV og ko-infeksjoner Humant leukocytt-antigen (HLA) og killercelle-immunoglobulinlignende reseptorer (KIR) vil bli utført på mors- og spedbarns-DNA-prøver ved bruk av DNA-sekvensering og sekvensspesifikk primerpolymerasekjedereaksjon (PCR) som tidligere beskrevet tidligere. HLA- og KIR-varianter vil være korrelert til mors virologiske status, immunstatus og kliniske utfall.

Spedbarns humorale immunresponser på EPI-vaksiner Korrelater av immunitet mot infeksjonssykdommer blant HEU-spedbarn er fortsatt dårlig forstått. Antistofftitere mot meslinger, røde hunder, rotavirus, poliovirus, hepatitt B-virus (HBV), difteri, tetanustoksoid, kikhoste, pneumokokker og Haemophilus influenza type b (Hib), vil bli målt ved bruk av kommersielle ELISA-baserte metoder. Målinger vil bli utført etter vaksinasjon ved 12, 18 og/eller 24 måneder. Serumtitere som korrelerer med beskyttelse (f.eks. anti-rotavirus immunoglobulin A ≥20 U/mL vil bli vurdert hos HUU, HEI og HEU spedbarn.

Vurdering av spedbarns atopiske manifestasjoner og sensibilisering Årsaker og tidspunkt for atopisk dermatitt er fortsatt dårlig beskrevet i SSA. Mors allergiske tilstander i tredje trimester vil bli vurdert ved hjelp av et detaljert spørreskjema angående mors kosthold inkludert matsug, mors medikamentbruk og allergiske og tarmsymptomer. Fra og med fødselen vil forskningsjordmor eller studiesykepleier fysisk undersøke alle spedbarn for tilstedeværelse av atopisk dermatitt definert ved tilstedeværelse av kløende utslett og/eller synlig bøyeeksem. Bleieutslett, utslett rundt øynene og/eller avskalling i hodebunnen vil ikke anses som diagnostisk for eksem. Totalt og spesifikt serumimmunoglobulin E (IgE) i utvalgte spedbarnsblodprøver vil bli målt på en Immuno-assay analysator (Thermofisher, Freiburg, Tyskland) for å støtte den kliniske diagnosen av en atopisk tilstand som tidligere beskrevet. Spesifikt vil IgE-antistoffer mot høneegg, kumelk, peanøtter, aero-allergener, gresspollen, katt, hundefass og husstøvmidd bli vurdert. Spedbarn med spesifikke serum-IgE-nivåer >0,3 IE/ml mot en eller flere av de testede matvarene eller inhalasjonsallergenene vil bli ansett som sensibiliserte. Matallergier vil være korrelert med spedbarnssykelighet, prenatal narkotikabruk og ernæring inkludert maten mødrene ønsket seg i svangerskapet.

Oppsummering av delstudier

1. Tarmmikrobiota-delstudie Denne delstudien tar sikte på å vurdere hvordan HIV-infeksjon og HAART-bruk påvirker tarmmikrobiotamodning for å forstå patogenesen av miljømessig enterisk dysfunksjon (EED. Sekvensielle mor-spedbarns avføringsprøver fra graviditet til 24 måneder vil bli brukt til å utføre 16 små-subenhet (S) ribosomal ribonukleinsyre (rRNA) sekvensering for vurdering av fylum og operasjonell taksonomisk enhetssammensetning med ≥97 % sekvensidentitet, så vel som mikrobiell mangfold. I utvalgte prøver vil bakteriell fullgenommetagenomikk haglesekvensering for å identifisere mikrobiotametabolske potensiale bli utført. Videre vil massespektrometri bli utført for metabolom, inkludert vurdering av markører for mikrobiell translokasjon over den skadede tarmveggen som lipopolysakkarider (LPS) og endotoksinkjerneantistoff (EndoCAb) og intestinalt fettsyrebindende protein (I-FABP) som en markør for enterocytt skader. Mikrobiota og metabolittmarkører vil være korrelert til spedbarns vekst, utvikling og mottakelighet for infeksjonssykdommer.
2. Immunometabolomics sub-studie Denne delstudien tar sikte på å undersøke minst 24 plasma-inflammatoriske immunaktiveringsmarkører, ved bruk av ELISA-basert multiplekstesting med Luminex-teknologi, som risikofaktorer for ugunstige graviditetsutfall hos HIV-infiserte kvinner og påfølgende svekket spedbarns vekst og utvikling. For denne studien vil vi velge ut ≥50 HIV-infiserte kvinner med langvarig (>7 måneder), mellomlang (1-7 måneder) og ingen/kortvarig (ingen eller <1 måneder) HAART eksponering og uinfiserte kvinner som kontroller. For å vurdere metabolomet og mitokondriell dysfunksjon, vil massespektrometriteknikker bli brukt til å måle et bredt spekter av metabolitter inkludert aminosyrer, reaktive oksygenarter, triglyserider, diacylglycerider, kolesterol, fosfolipider, fettsyrer, peroksiderte lipider og oksylipider.
3. Cellemediert immunitetsunderstudie Vi antar at endringer i antall og funksjon i NK-celler kan forekomme hos HEU-spedbarn og disponere dem for alvorlige infeksjoner og maligniteter assosiert med vedvarende virus. Hos spedbarn med tilstrekkelig blodvolum på ≥2 ml, vil vi isolere mononukleære celler fra perifert blod fra HUU og HEU spedbarn med kort-, mellom- og langtids HAART-eksponering for mor etter 24 måneder for å bestemme antall og funksjon av T-celler og NK celler som tidligere beskrevet.
4. Latent TB co-infection sub-studie Vi antar at udiagnostisert latent TB delvis kan forklare økt spedbarnsdødelighet hos spedbarn i lavressursmiljøer. TST har blitt brukt til å screene for latent TB; Men på grunn av en interaksjon med BCG-vaksine som gis rutinemessig i Zimbabwe, kan TST-spesifisiteten være sterkt redusert i vår studiepopulasjon. TB, IGRAs) vil bli brukt til å teste latent TB i en undergruppe av kvinner under graviditet og 6 uker etter fødsel og evaluert mot TST. Videre vil placentaprøver bli testet for histologiske lesjoner som tyder på TB-betennelse. IGRAs målinger og størrelsen på TST-lesjoner skal være korrelert med ugunstige utfall for mor og spedbarn.
5. Delstudie av mødrestress Denne vil vurdere prevalens, risikofaktorer og mestringsmekanismer for mødres stress ved hjelp av spørreskjemaet opplevd stress ved innskrivning og 6 uker etter fødsel.
6. HIV/HAART-eksponering og nevroutviklingsresultater Denne delstudien evaluerer potensielle langsiktige nevroutviklingssekveler relatert til HIV-infeksjon og utvidet HAART-eksponering ved bruk av Mullen-verktøyet etter 12 og 24 måneder.

Fremtidige studier kan følge spedbarn inn i ungdomsårene. En parallell landlig observasjonskohort er ønskelig å kontrollere for husholdnings- og miljøforvekslere assosiert med den nåværende bybaserte studien.