University of Zimbabwe College of Health Science (UZ-CHS) BIRTH COHORT Study (UZ-CHS-BC)

Over en million spædbørn fødes hvert år af HIV-1-smittede kvinder i Afrika syd for Sahara. I Zimbabwe er de årlige fødsler på 379.000 med ca. 48.000 spædbørn, der fødes hvert år af HIV-1-smittede kvinder i livslang højaktiv antiretroviral terapi (HAART). Bekymringer er blevet udtrykt over de generelle sundheds- og udviklingsresultater for HIV-1-eksponerede, men uinficerede (HEU) spædbørn født af HIV-1-inficerede kvinder. På trods af at de er HIV-negative, har HEU-børn 3,9 og 2,0 gange højere dødelighed end HIV-ueksponerede og uinficerede (HUU) spædbørn i henholdsvis det første og andet leveår. Sammenlignet med deres HUU-modstykker kan HEU-børn have ugunstige fødselsresultater, svækket vækst, udvikling og andre sundhedsmæssige underskud. Dette er et betydeligt folkesundhedsproblem, da spædbørn født med lav fødselsvægt (LBW) i voksenalderen er mere tilbøjelige til at dø af ikke-smitsomme sygdomme (NCD'er) såsom hypertension, slagtilfælde og type 2-diabetes. I Zimbabwe er HEU-spædbørn blevet grundigt undersøgt i præ-HAART-æraen; dog mangler nutidige beviser. Derudover har tidligere undersøgelser ikke karakteriseret kvinder under graviditet, og resultatet er ikke blevet kontrolleret for andre almindelige antenatale infektionspatogener, herunder yderligere risikofaktorer såsom for tidlig fødsel, LBW, varighed af amning, fattigdom og mødres psykosociale stressfaktorer. Derfor er en dybdegående og omfattende karakterisering af HEU-spædbørn nødvendig, ikke kun for at undgå HIV-infektion, men også for at forbedre kort- og langsigtede sundhedsresultater for de udsatte.

Risici ved HAART under graviditet I Zimbabwe består den nuværende standard for behandling af HIV-smittede kvinder for at forhindre mor til barn-overførsel (MTCT) af HIV af Tenofovir, Lamivudine og Efavirenz (TENOLAM-E). Antiretrovirale lægemidler kan dog ophobes i fostervandet, hvilket udgør en risiko under sarte embryonale og føtale udviklinger. Timing af HAART kan også være vigtig, eftersom en sydafrikansk undersøgelse viste, at mødre, der startede zidovudin-baseret HAART før befrugtningen, havde dobbelt så høje odds for præmatur fødsel sammenlignet med mødre, der startede HAART efter befrugtningen. Toksiske mekanismer af anti-HIV-lægemidler omfatter mitokondriel toksicitet og mitokondrielle DNA-mutationer hos mødre og muligvis også hos spædbørn. Mitokondriel dysfunktion vil igen øge produktionen af ​​reaktive oxygenarter og aktivering af IL-1-produktion. Interferens med lipidmetabolisme er en anden mekanisme for HAART-toksicitet. Tidlig eksponering for Efavirenz-baseret HAART er blevet forbundet med neuroudviklingsmæssige og socio-emotionelle udfordringer, som kan føre til adfærdsmæssige underskud. Derudover kan vedvarende infektioner, skadelige virkninger af socioøkonomisk status og moderens kostforurenende stoffer såsom dioxiner eller klorerede pesticider også spille en rolle.

Årsagerne til de observerede negative sundhedsresultater for HEU-spædbørn kan være relateret til en ændret immunsystemtilstand. Imidlertid forbliver immunprofiler ud over et år for HEU-børn stort set uudforskede. I Zimbabwe fremmes vaccinationskampagner for aktiv immunisering af spædbørn via det udvidede immuniseringsprogram (EPI). Selvom maksimale antistoftitre efter nogle EPI-vacciner er normale hos HEU-spædbørn, har der ikke været undersøgelser af levetiden af ​​disse immunresponser. In utero HIV-eksponering øger pro-inflammatoriske cytokinniveauer produceret af placentaceller. Co-infektioner ser ud til at være vigtige, eftersom kenyanske HEU-nyfødte (med et højt antal moderlige co-infektioner) havde højere niveauer af inflammatoriske plasmamarkører end HEU-kontroller fra undersøgelser i USA. Yderligere har HEU-spædbørn højere CMV-belastninger, som kan være drevet delvist af maternel viræmi og kan bidrage til immunaktivering. HEU-spædbørn fortsætter således med at have baseline-inflammation, som kan kædes sammen med dårlige kort- og langsigtede resultater, og antiinflammatoriske indgreb kan forbedre spædbørns sundhed. Interventionsstudier med HAART-behandling hos gravide kvinder er etisk udfordrende; virkningen af ​​HAART på neuro/immun udvikling kunne dog vurderes i undersøgelser som UZ-CHS fødselskohorten, hvor mødre oftere på grund af økonomiske udfordringer booker for sent til deres svangerskabsforsøg, og nogle er HAART-naive i deres tredje trimester. Beviser vedrørende risikoen for HAART-eksponering i option B+-æraen for de kort- og langsigtede resultater af HEU-spædbørn er fortsat begrænset. Men så vidt vi ved, har ingen undersøgelser korreleret HAART-niveauer i moderens fostervand, urin, plasma og longitudinel modermælk og relateret til ugunstige graviditetsudfald, spædbørns vækst, metabolisme og (immun/neuro) udvikling.

Metoder University of Zimbabwe College of Health Science (UZ-CHS) fødselskohorteundersøgelse er et prospektivt observationelt kohortestudie, der sammenligner spædbørn født af HIV-inficerede og HIV-ikke-inficerede kvinder i et lavressourcemiljø i vestlige forstæder med høj tæthed til Harare primære sundhedspoliklinikker. . 1.200 gravide kvinder (600 HIV-inficerede mødre og 600 HIV-ikke-inficerede kontroller) i deres tredje trimester blev tilmeldt fra januar 2016 til juni 2019. Deltagerne følges som mor-baby-par ved fødslen inden for 10 dage efter livet 6, 10, 14, 24, 48, 72 og 96 uger gamle. Ved hvert besøg bruges kliniske undersøgelser til at vurdere sundhed og påvirkningen af ​​miljøfaktorer. Derudover administreres spørgeskemaer og bioprøver til laboratorieundersøgelser. Designet af undersøgelsen er ikke-interventionel kohorte, men deltagerne bliver tilbudt rådgivning vedrørende sundhed og hygiejne.

Formålet med undersøgelsen Denne undersøgelse har til formål at undersøge indvirkningen af ​​moderens HIV-status, kumulativ HAART-eksponering i utero og gennem amning, immunundertrykkelse og immunaktivering og miljøvariabler på kort- og langsigtede resultater af spædbørn i et miljø med lav ressource. Vores undersøgelse fokuserer på dødelighed og sygelighed af HEU-spædbørn, tester etablerede risikofaktorer fra tidligere kohorter. Data og biomaterialer indsamles prospektivt fra mødre og spædbørn fra graviditet til 2 års alderen og sammenligner HEU med HUU-spædbørn fra samme samfund. For en omfattende vurdering, rollen af ​​moderens socioøkonomiske status, husholdningsfaktorer, komorbiditeter inklusive co-infektioner med persistente vira såsom cytomegalovirus (CMV), hepatitis b/c (HBV)/(HCV), bakterielle sygdomme såsom syfilis og tuberkulose (TB), intestinale helminths, nye NCD'er, såsom svangerskabsdiabetes mellitus (GDM) og hypertensive lidelser og moderens ernæringsstatus på graviditetsresultater, spædbørnsdødelighed og -udvikling, immunitet og sundhed vil blive testet. UZ-CHS giver mulighed for at etablere referenceintervaller, der i øjeblikket ikke er tilgængelige, for forskellige undergrupper af gravide kvinder med et gunstigt resultat af graviditeten til klinisk brug for fremtidige patienter.

Studiesteder og lokalt kommunalt engagement Harare kommune har etableret 12 poliklinikker, der hver omfatter enheder for primær sundhedspleje, barsel, fødselshjælp og en familiesundhedstjeneste. Medicinske tjenester omfatter HIV-rådgivning og hurtig test og initiering og administration af HAART. Overvågning og opfølgning for andre kroniske lidelser, herunder GDM og arteriel hypertension tilbydes også. En læge kommer to gange om ugen pr. sted for at behandle komplicerede sager. Barselsydelser omfatter svangreomsorg, opfølgningsbesøg og HIV- og syfilisscreening og behandling. Det koster en mor 25 USD at få adgang til prænatal-tjenester indtil 10 dage efter fødslen, mens sundhedsydelser er gratis for spædbarnet indtil 5-års alderen. Mødre opfordres til at booke tidligt under graviditeten (i uge 4-12) og til at teste for hiv sammen med deres ægtefælle. På grund af socialøkonomiske udfordringer går de fleste gravide kvinder i øjeblikket til svangerskabsregistrering på poliklinikkerne, når deres graviditeter er i fremskredne stadier, en situation, der sætter deres ufødte babyer i fare for hiv-overførsel, og fastholder den onde cirkel af fattigdom og hiv-infektion. Efter en gennemførlighedsvurdering af forundersøgelsesstedet blev ud af de 12 poliklinikker, Kuwadzana, Dzivaresekwa (Rujeko), Glenview og Budiriro udvalgt baseret på de større mængder af mødre- og børnesundhedstjenester, hyppigheden af ​​HIV-positivitet og fraværet af konkurrerende forskning rettet mod samme befolkning. Oplandet til de udvalgte fire poliklinikker har relativt stabile samfund, der ikke hyppigt skifter lejebolig. Kommunale sygeplejersker og jordemødre på disse faciliteter hjælper med undersøgelsesprocedurer såsom dataindsamling under fødslen, der sker sent om natten. Alle deltagere bor i det sydvestlige område med høj tæthed i Harare. Beboere i dette samfund er af relativt dårlig socioøkonomisk status med høje arbejdsløshedsrater. De fleste individer har generelt ikke råd til 3 passende måltider om dagen. De fleste familier (72%) lever for mindre end 1 dollar om dagen og supplerer deres kost gennem små havearbejde omkring deres huse. Familier bor i huse af lignende struktur og størrelse (200 kvadratmeter). I gennemsnit bor 2-6 familier i disse relativt små huse og i nogle ekstreme situationer deler op til 5 familiemedlemmer et enkeltværelse. Vandforsyningen er uregelmæssig, hvilket nødvendiggør brug af fælles boringer i 200-1.500 meters afstand. Dette manuelt hentede vand bruges til at drikke, lave mad, bade og skylle på toilettet. Spildevandssprængninger er almindelige og kan forekomme tæt på boringer. Forurenede boringer i to af vores fire undersøgelsessteder, Budiriro og Glenview, har været epicentre for den seneste koleraepidemi i 2018. Beboere i disse områder med høj tæthed deler en uforholdsmæssig stor byrde af både infektionssygdomme og NCD'er i forhold til dem, der bor i områder med lav tæthed i samme by.

Prøvestørrelse og statistisk styrke Det primære endepunkt for vores undersøgelse er sammenligningen af ​​spædbørnsdødelighed indtil to års alderen hos HEU versus HUU-spædbørn. I Zimbabwe forventes 50 spædbørnsdødsfald i det første år og 5 spædbørnsdødsfald i det andet leveår. I pre-HAART-æraen, en 3,2-3,9-fold højere dødelighed i det første leveår og en 2 gange højere dødelighed i andet leveår forventedes. Dødeligheden af ​​HEU i HAART-æraen med mere effektiv HIV-behandling kan nu blive forbedret, og i et konservativt skøn antog vi en 2-fold stigning i dødeligheden hos HEU-spædbørn inden for de første to leveår. Vi forventede derfor 5,5 % dødelighed hos HUU-spædbørn og 11 % hos HEU-børn. Ifølge vores styrkeanalyse ved brug af G*Power3 var en prøvestørrelse på 1.198 kvinder påkrævet for at påvise en sådan forskel med en styrke på 90 % og et signifikansniveau på 0,05 i en tosidet analyse. Vi valgte derfor en stikprøvestørrelse på 1.200 mødre, 600 med og 600 uden hiv-infektion. Potentielle deltagere blev identificeret under rutinemæssige førfødselsbesøg (ANC) på en af ​​de fire by Harare poliklinikker. De potentielle deltagere blev orienteret om undersøgelsen, og de, der mundtligt accepterede at deltage, fik deltagerinformationsarket skrevet enten på engelsk eller oversat til sproget Shona-sprog for at sikre fuld forståelse af undersøgelsens mål og aktiviteter ved at bruge det sprog, som deltageren bedst forstår. Deltagelse er frivillig, og kvinder får mulighed for at trække sig når som helst i løbet af studiet. Læsefærdighed er næsten universel i Zimbabwe, og alle potentielle deltagere bør være i stand til at læse og forstå formularen til informeret samtykke.

Mødres spørgeskemaprocedurer og målinger Ved indskrivningen besvarede alle mødre et struktureret spørgeskema, der sigtede mod en omfattende klinisk, adfærdsmæssig og miljømæssig karakterisering. Specifikke spørgsmål vil omhandle seksuel adfærd og reproduktive sundhedsproblemer, herunder seksuelt overførte sygdomme og brug af prævention. Generel sundhed, sundhedssøgende adfærd, moders stress og stof-/urtebrug vil blive vurderet. Hos hiv-positive mødre vil HAART-brug og -varighed, komorbiditeter og problemer relateret til afsløring af hiv-status og stigma blive registreret.

For at løse hygiejne, specifikke spørgsmål om sanitet (type og antal toiletter, kloaksystem), drikkevand, energitype (indendørs forurening), hustype, antal værelser brugt til at sove af familien og antallet af personer, der deler et enkeltværelse vil blive spurgt. Økonomiske oplysninger, der omfatter beskæftigelsessituation, familiens månedlige indkomst, fødevaresikkerhed, kost, penge afsat til mad, sundhedsvæsen, brændstof til madlavning og opsparing vil blive vurderet. Ejerskab af landbrugsjord eller husholdningsaktiver, herunder radioer, fjernsyn, mobiltelefoner/fastnettelefoner, køleskabe, cykler, motorcykler/scootere og biler vil give yderligere oplysninger om social økonomisk status. Yderligere spørgsmål vil omhandle moderens livsstil såsom alkoholbrug, rygning, sovevaner, fysiske aktiviteter, vold i hjemmet og støtte fra partneren, herunder viden, tro og praksis.

Fysisk undersøgelse og point of care test Ved tilmeldingen udførte studiejordemoderen en fuldstændig fysisk undersøgelse, blodtrykskontrol, vurdering af ødem og antropometri. WHO klinisk iscenesættelse vil blive udført for alle HIV-positive kvinder. Vurdering af ernæringsstatus vil blive foretaget ved hjælp af standard antropometriske indekser inklusive body mass index (BMI). Midt upper arm circumference (MUAC) vil blive brugt som en indikator for underernæring eller fedme. MUAC vil blive målt ved midtpunktsafstanden mellem (acromion og olecranon. En sydafrikansk undersøgelse viste, at en MUAC på <23 cm forudsagde et BMI før graviditet på <18,5 kg/m2. Af praktiske årsager vil en maternal MUAC cut-off på ≤25 cm blive brugt som markør for underernæring.

Blodtrykket (BP) vil blive målt efter at have givet moderen mindst 5 minutters hvile. Der anvendes en Tenso MED BP-maskine med en normal eller stor manchet, der dækker mindst halvdelen af ​​armlængden. Hypertension under graviditet er defineret ved et blodtryk på ≥140/90 mmHg ved mindst 2 separate målinger med 4 timers mellemrum, når som helst under graviditeten. Mild til moderat hypertension som systolisk blodtryk på 140-159 mmHg eller diastolisk blodtryk på 90-109 mmHg med svær hypertension refererer til systolisk blodtryk på mindst 160 mmHg eller diastolisk blodtryk på mindst 110 mmHg. Kronisk hypertension er defineret ved hypertension, diagnosticeret enten før 20 ugers svangerskab eller første gang diagnosticeret under graviditet og vedvarer ud over 12 uger efter fødslen. Alle mødre med proteinuri baseret på urinpinde henvises til hospitalet for udredning af svangerskabsforgiftning. Diagnose af præeklampsi vil følge fastlagte kriterier.

Mødre- og spædbarnsopfølgningsbesøg Mødre bliver mindet om deres kommende opfølgningsbesøg via telefonopkald eller sms. Data kan stadig indsamles i tilfælde af ubesvarede besøg, forudsat at deltageren møder op inden for en periode på syv dage efter de planlagte besøg. Hvis en mor ikke møder op til deres planlagte opfølgningsaftaler, forsøges telefonisk kontakt til hendes eller hendes pårørende og/eller hjemmebesøg af forskningssygeplejersken nøje efter mors præferencer dokumenteret ved indskrivningen. Syge spædbørn vil blive tilset af undersøgelsen Børnelæge. Oplysninger om sted, dato og leveringsmåde, langsgående spædbørnsernæringspraksis og omfattende information om sundhed, udvikling og miljø vil blive indsamlet. Omfattende spørgeskemaer svarende til indskrivning vil blive genadministreret efter 6, 12, 18 og 24 måneder. En fysisk undersøgelse af mødre og deres spædbørn vil blive udført for mødre indtil uge 6 og for babyer ved hvert besøg. Undersøgelsesprocedurer omfatter også omfattende bio-prøveudtagning af blod, modermælk og afføring. Ved hvert besøg ydes transportgodtgørelse for klinikdeltagelse sammen med nogle forfriskninger. Moderen kan blive bedt om at stoppe, hvis hun fortløbende undlader at møde op til mindst to på hinanden følgende planlagte studiebesøg uden nogen grund(er) eller kommunikation.

Spædbørnsdødelighed Nøgleresultatet af denne undersøgelse er det sammensatte endepunkt "spædbarnsdød", defineret som dødfødsel (gestational alder ved fødslen ≥20 uger) og spædbørn, der dør i løbet af de første to leveår. Neonatale dødsfald (0-364 dage) vil yderligere blive opdelt i tre undergrupper: tidlig neonatal død (0-6 dage), sen neonatal død (7-27 dage) og post-neonatal død (28-364 dage). Sene dødsfald (365-730 dage) vil også blive registreret. Dødeligheden vil blive vurderet særskilt hos HIV-eksponerede og inficerede (HEI), HEU og HUU spædbørn.

Uønskede udfald ved fødslen omfatter for tidlig fødsel. Svangerskabsalderen vil blive opdelt i tidlig præmatur ≤31 uger, sen præmatur (32-36 uger), termin (mindst 37 uger) og post-term fødsel (>42 ugers graviditet). Uønskede fødselsudfald omfatter behov for genoplivning ved fødslen på grund af fødselskvælning eller respiratorisk distress-syndrom. Fødselsasfyksi vil blive defineret som enhver medicinsk tilstand som følge af nedsat eller afbrudt ilttilførsel til et nyfødt spædbarn før, under eller kort efter fødslen. Yderligere negative udfald er lav Apgar ved 5 minutters score (<7), lille for gestationsalder, dvs. vægt/længde under 10. percentilen for gestationsalder, LBW (<2.500g, vejet inden for den første time af livet, meget LBW (<1.000) g), føtal makrosomi (fødselsvægt > 4.000 g, mikrocefali <2 SD fra gennemsnittet, fødselsdefekter (misdannelser, ekstra cifre) og flergangsfødsler.

Spædbørns vækst Vækst vil blive udtrykt som Z-score i henhold til WHO-definitioner: Vægt-for-alder (WAZ), højde-for-alder (HAZ), vægt-for-højde (WHZ) og hoved-omkreds-for-alder (HCAZ) ). Vækstresultater vil blive evalueret som kontinuerlige variable (opnået Z-score og ændring i Z-score mellem besøg). Hertil kommer kategoriske udfald; moderat svind, hæmning, svær svind, undervægt og mikrocefali vil blive vurderet som HAZ <-2, HAZ <-3, WAZ <-2; og HCAZ <-2, henholdsvis. Som en biologisk markør for spædbørns vækst vil serumniveauer af plasma insulinlignende vækstfaktor-1 blive bestemt ved 6 ugers alderen ved hjælp af ELISA'er, R&D Systems, Minneapolis.

Spædbørns MUAC bliver målt fra 6 ugers alder og sensitivitet, specificitet, positiv prædiktiv værdi og negative prædiktive værdier af MUAC for hæmme, undervægt, svind, anæmi og uønsket neuroudvikling hos HEI, HEU og HUU spædbørn i alderen 0-<6 måneder , 6-<12 måneder og 12-24 måneder vil blive fastsat. WHZ vil blive brugt som guldstandarden for spild.

Vurdering af spædbørnssygelighed Morbiditetsdagbøger udsendes til mødre ved fødslen. Læger dokumenterer lægerapporter i sygedagbogen under sygebesøg eller hospitalsindlæggelser. Disse vil omfatte: neonatal hypoglykæmi, neonatal gulsot, anæmi hos spædbørn, hududslæt, medfødte infektioner, vertikal overførsel af infektion over de 2 år, enhver hospitalsindlæggelse (hyppighed og varighed), sygebesøg (datoer og varighed), dokumenterede lokale indlæggelsesbehandlinger, stunting , svind og unormal neuroudvikling. Efter episoder med sygdom vil opfølgningsnotater blive noteret i dagbogen. Mødre vil også løbende subjektivt vurdere spædbørns trivsel og opfordres til at dokumentere eventuel børnesygdom i dagbogen for omfattende dokumentation. Dagbogen indsendes til undersøgelsen ved afslutning efter 24 måneder.

Spædbørns udvikling Neuroudviklingsresultater vil blive evalueret fra seks uger til to års alderen ved hjælp af Denver II-screeningsværktøjet. Dette værktøj vurderer grov- og finmotoriske evner, udvikling af sprog, sociale færdigheder, opmærksomhedsspænding, generel compliance og frygt. Derudover kan spædbørns udviklingsmilepæle (f.eks. tidspunkt for tænder, første gang du sidder, går eller taler) vil blive registreret.

Maternelle bioprøver. Biologiske prøver inklusive fuldblod, plasma og serum, urin og modermælk vil blive indsamlet ved alle besøg; afføring, navlestrengsblod, fostervand og moderkage opsamles ved fødslen. Følsomme prøver (afføring, mælk, urin) placeres ved 4°C i højst 4 timer før behandling. Alle prøver vil blive opbevaret i en biobank ved -80°C inden for maksimalt 6 timer efter erhvervelse.

Maternelle afføringsprøver vil blive screenet for intestinale protozoer og helminthes trophozoiter og æg ved hjælp af direkte vådmonteringsmikroskopi og den formelle etherkoncentrationsteknik.

Bestemmelse af moderens fulde blodtal Til vurdering af fulde blodtal (FBC) vil venøst ​​blod blive opsamlet i 5 ml ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA) rør ved hjælp af et vacutainer-system og analyseret ved hjælp af en Mindray© Hematology 3-delt differential, 16 parametre BC3600 Analyser, Kina bruger fuldblod. WHO-definitionen for diagnosticering af anæmi under graviditet vil blive brugt (hæmoglobinkoncentration <11,0 g/dl.) Spædbørnsblodprøver Spædbørnsveneblod vil blive indsamlet, når det er muligt efter 7-10 dage for FBC. Når det er muligt, vil plasmaprøver blive opbevaret. Volumen af ​​opsamlet blod vil ligge inden for de anbefalede mængder afhængigt af spædbarnets vægt (dvs. ≤1-5 % af det samlede blodvolumen over 24 timer og ≤ 10 % over 8 uger). Blod vil ikke blive indsamlet fra svært syge spædbørn og dem med mistanke om alvorlig anæmi ifølge klinisk vurdering. Tørrede blodpletter vil blive indsamlet ved hvert besøg ved hjælp af fuldblodsprøver eller et nålestik i hælen. 3-5 dråber blod vil blive opsamlet og tørret på Whatman-filterpapir og opbevaret ved -80◦ Celsius.

Moderens blodsukkerniveauer Screening for svangerskabsdiabetes ved hjælp af serum ikke-fastende tilfældige blodsukkerniveauer vil blive udført for en undergruppe af kvinder ved tilmelding ved hjælp af Mindray BS200 Chemistry Analyzer (Mindray, Kina), inklusive glykosyleret hæmoglobulin (HbA1c) niveauer. Et cut-off for HbA1c på 6,5 % vil identificere udiagnosticeret diabetes, mens et HbA1c ≥5,6 % vil markere personer med en øget risiko for fremtidig diabetes i henhold til WHOs retningslinjer.

Moderens nyre- og leverfunktionsprofiler Kreatinin, urinstof og elektrolytter (natrium, kalium og chlorid) vil blive udført på mødres serumprøver ved hjælp af Beckman Coulter AU680 kemianalysator, Tyskland. Kreatininniveauer vil blive brugt til at estimere moderens glomerulære filtrationshastighed ved hjælp af ligningen Modified for Diet in Renal Disease. Leverfunktion og kolestase vil blive vurderet ved hjælp af serumalbumin, fibrinogen, bilirubin, lactatdehydrogenase (LDH), alanintransaminase (ALT), aspartataminotransferase (AST), alkalisk fosfatase (ALP) og gammaglutamyltransferase (GGT).

Spædbørns lever- og nyrefunktionstest vil blive vurderet hos alle spædbørn efter 6 og 24 måneder, forudsat at tilstrækkeligt materiale var tilgængeligt.

Moderens lipid- og knogleprofiler Højdensitetslipoproteinkolesterol (HDL-C), lavdensitetslipoproteinkolesterol (LDL-C), totalkolesterol (TC) og TC/HDL-C-forhold ved baseline vil blive bestemt ved hjælp af serum ved indskrivning og efter 24 måneder opfølgning. TC vil blive brugt til at beregne LDL-C, når koncentrationerne er under 4,4 mmol/L. For maternelle knogleprofiler vil der blive udført longitudinelle målinger af serum ioniseret calcium, fosfor, albumin og ALP niveauer under graviditet og ved fravænning.

Moderdiagnose af HIV Moderscreening for HIV-infektion vil blive udført ved hjælp af den serielle testalgoritme i henhold til Zimbabwes nationale retningslinjer for HIV-testning og rådgivning. Kvalitative hurtige immunokromatografiske analyser, Standard Diagnostics (SD) Bioline HIV-1/2 3.0 (SD Inc., Kyonggi-Do, Sydkorea) bruges til indledende screening. Positive tests bekræftes ved hjælp af Alere DetermineTM HIV-1/2 kit (Abbott Diagnostics, USA. Western blotting bliver brugt til ubestemte testresultater. HIV-testning af HIV uinficerede mødre vil blive gentaget med 6 måneders mellemrum for at identificere serokonvertere.

Diagnose af spædbørns HIV Hos alle HIV-eksponerede spædbørn sker tidlig påvisning af HIV ved hjælp af COBAS1 AmpliPrep/COBAS1 TaqMan1 HIV-1 kvalitativ test (Roche Molecular System) i henhold til producentens instruktioner. Tests udføres ved hvert besøg fra fødslen til fravænning eller diagnosticering af HIV-infektion.

Kvantificering af HIV-1 RNA-belastningen Moder- og spædbarnsplasmaprøver vil blive kvantificeret for HIV-1 RNA-belastning ved henholdsvis tilmelding og 24 måneder ved hjælp af en automatiseret TaqMan Cobas AmpliPrep Roche Diagnostics, Branchburg NJ), i henhold til producentens instruktioner. Den nedre detektionsgrænse for analysen er 20 kopier/ml.

Vurdering af moder-spædbarns immunstatus Moderlige absolutte CD4+ T-lymfocyttal er opregnet i EDTA-blodprøver for alle HIV-positive ved brug af Partec Cyflow-tæller, Tyskland ved tilmelding og med 12 måneders intervaller. Analyser vil blive udført inden for 6 timer efter blodopsamling.

HAART-niveauer Niveauer af Efavirenz, Lamivudin og Tenofovir i forskellige moderkompartmenter inklusive plasma, modermælk, urin og fostervand vil blive målt ved hjælp af højtydende væskekromatografi.

Vurdering af moderlige co-infektioner HBV-screening af alle mødre og alle eksponerede spædbørn vil blive udført ved at måle HBV overfladeantigen (HBsAg), anti-HBsAg og anti-kerne antistoffer vil blive påvist ved hjælp af immunokromatografiske, Pointecare Diagnostics, USA-sæt i henhold til producentens instruktioner . Maternal serum CMV DNA-belastninger og medfødt CMV vil blive målt ved hjælp af RealStar CMV PCR kit v1.0 Germany, efter isolering af viralt DNA ved hjælp af QIAamp MinElute Virus Spin Kit Germany.

Spædbørns tørrede blodpletter vil blive evalueret for infektionsmarkører, CMV, HBV, HCV og HIV for alle udsatte spædbørn. Anti-Treponema pallidum antistof-isotyper vil blive brugt til maternel syfilisprofilering ved brug af SD Bioline 3.0 kvalitative immunokromatografiske kit. Rapid Plasma Reagin (RPR) test vil blive brugt til påvisning af Venereal disease research laboratory (VDRL) antigen, der indeholder mikropartikelformigt kulstof. Syfilis-serologi vil blive udført på spædbørnsplasma efter 24 måneder hos eksponerede spædbørn ved hjælp af SD Bioline 3.0 kvalitative immunokromatografiske kit.

Immunogenetik af modtagelighed for HIV og co-infektioner Humant leukocytantigen (HLA) og dræbercelle-immunoglobulin-lignende receptorer (KIR'er) typebestemmelse vil blive udført på mors og spædbarns DNA-prøver ved hjælp af DNA-sekventering og sekvensspecifik primerpolymerasekædereaktion (PCR) som tidligere beskrevet tidligere. HLA- og KIR-varianter vil være korreleret til moderens virologiske status, immunstatus og kliniske resultater.

Spædbørns humorale immunresponser på EPI-vacciner Korrelater af immunitet mod infektionssygdomme blandt HEU-spædbørn er stadig dårligt forstået. Antistoftitre mod mæslinger, røde hunde, rotavirus, poliovirus, hepatitis B-virus (HBV), difteri, tetanustoxoid, pertussis, pneumococcus og Haemophilus influenza type b (Hib), vil blive målt ved hjælp af kommercielle ELISA-baserede metoder. Målinger vil blive udført efter vaccination ved 12, 18 og/eller 24 måneder. Serumtitre, der korrelerer med beskyttelse (f.eks. anti-rotavirus immunoglobulin A ≥20 U/mL vil blive vurderet hos HUU, HEI og HEU spædbørn.

Vurdering af spædbørns atopiske manifestationer og sensibilisering Årsager og timing af atopisk dermatitis forbliver dårligt beskrevet i SSA. Moderens allergiske tilstande i tredje trimester vil blive vurderet ved hjælp af et detaljeret spørgeskema vedrørende moderens kost, herunder madtrang, moderens stofbrug og allergiske og tarmsymptomer. Fra og med fødslen vil forskningsjordemoderen eller studiesygeplejersken fysisk undersøge alle spædbørn for tilstedeværelsen af ​​atopisk dermatitis defineret ved tilstedeværelsen af ​​kløende udslæt og/eller synlig flexural dermatitis. Bleudslæt, udslæt omkring øjnene og/eller afskalning i hovedbunden vil ikke betragtes som diagnostisk for eksem. Totalt og specifikt serumimmunoglobulin E (IgE) i udvalgte spædbørnsblodprøver vil blive målt på en Immuno-assay analysator (Thermofisher, Freiburg, Tyskland) for at understøtte den kliniske diagnose af en atopisk tilstand som tidligere beskrevet. Specifikt vil IgE-antistoffer mod hønseæg, komælk, jordnødder, aero-allergener, græspollen, katte, hundeskæl og husstøvmide blive vurderet. Spædbørn med specifikke serum-IgE-niveauer >0,3 IE/ml mod en eller flere af de testede fødevarer eller inhalationsallergener vil blive betragtet som sensibiliserede. Fødevareallergier vil være korreleret med spædbørns morbiditet, prænatalt stofbrug og ernæring, herunder den mad, mødrene længtes efter under graviditeten.

Resumé af delstudier

1. Tarmmikrobiota sub-undersøgelse Dette delstudie har til formål at vurdere, hvordan HIV-infektion og HAART-brug påvirker tarmmikrobiota modning for at forstå patogenesen af ​​miljømæssig enterisk dysfunktion (EED. Sekventielle mor-spædbarns afføringsprøver fra graviditet til 24 måneder vil blive brugt til at udføre 16 small-subunit (S) ribosomal ribonukleinsyre (rRNA) sekvensering til vurdering af phylum og operationel taksonomisk enheds sammensætning med ≥97% sekvensidentitet, såvel som mikrobiel mangfoldighed. I udvalgte prøver vil bakteriel fuldgenommetagenomisk haglgeværsekventering blive udført for at identificere mikrobiotaens metaboliske potentiale. Yderligere vil massespektrometri blive udført for metabolom, herunder vurdering af markører for mikrobiel translokation over den beskadigede tarmvæg, såsom lipopolysaccharider (LPS) og endotoksinkerneantistof (EndoCAb) og intestinalt fedtsyrebindende protein (I-FABP) som markør for enterocytter skade. Mikrobiota og metabolitmarkører vil være korreleret til spædbørns vækst, udvikling og modtagelighed for infektionssygdomme.
2. Immunometabolomics delstudie Dette delstudie har til formål at undersøge mindst 24 plasmainflammatoriske immunaktiveringsmarkører ved hjælp af ELISA-baseret multiplextest ved Luminex teknologi, som risikofaktorer for ugunstige graviditetsresultater hos HIV-inficerede kvinder og efterfølgende svækket spædbørns vækst og udvikling. Til dette studie-studie vil vi udvælge ≥50 HIV-inficerede kvinder med langvarig (>7 måneder), mellemlang (1-7 måneder) og ingen/kortvarig (ingen eller <1 måned) HAART eksponering og uinficerede kvinder som kontroller. For at vurdere metabolomet og mitokondriel dysfunktion vil massespektrometriske teknikker blive brugt til at måle en bred vifte af metabolitter, herunder aminosyrer, reaktive oxygenarter, triglycerider, diacylglycerider, kolesterol, fosfolipider, fedtsyrer, peroxiderede lipider og oxylipider.
3. Cellemedieret immunitetsunderundersøgelse Vi antager, at ændringer i antal og funktion i NK-celler kan forekomme hos HEU-spædbørn og disponere dem for alvorlige infektioner og maligniteter forbundet med persistente vira. Hos spædbørn med tilstrækkeligt blodvolumen på ≥2 ml, vil vi isolere mononukleære celler fra perifert blod fra HUU- og HEU-spædbørn med kort-, mellem- og langsigtet HAART-eksponering for moderen efter 24 måneder for at bestemme antal og funktion af T-celler og NK celler som tidligere beskrevet.
4. Latent TB co-infektion delstudie Vi antager, at udiagnosticeret latent TB delvist kan forklare øget spædbørnsdødelighed hos spædbørn i lav-ressource miljøer. TST er blevet brugt til at screene for latent TB; Men på grund af en interaktion med BCG-vaccine, som gives rutinemæssigt i Zimbabwe, kan TST-specificiteten være stærkt reduceret i vores undersøgelsespopulation. TB, IGRA'er) vil blive brugt til at teste latent TB i en undergruppe af kvinder under graviditet og 6 uger efter fødslen og evalueret mod TST. Yderligere vil placentaprøver blive testet for histologiske læsioner, der tyder på TB-betændelse. IGRAs målinger og størrelsen af ​​TST-læsioner skal være korreleret med ugunstige resultater for moder og spædbarn.
5. Maternel stress delundersøgelse Dette vil vurdere prævalens, risikofaktorer og mestringsmekanismer for maternel stress ved hjælp af det opfattede stress-spørgeskema ved indskrivning og 6 uger efter fødslen.
6. HIV/HAART-eksponering og neuroudviklingsresultater Dette delstudie evaluerer potentielle langsigtede neuro-udviklingsmæssige følgesygdomme relateret til HIV-infektion og forlænget HAART-eksponering ved hjælp af Mullen-værktøjet efter 12 og 24 måneder.

Fremtidige undersøgelser kan følge spædbørn ind i teenageårene. En parallel landlig observationskohorte er ønskværdig at kontrollere for husholdnings- og miljøkonfoundere forbundet med den nuværende bybaserede undersøgelse.