Étude sur la cohorte de naissance du Collège des sciences de la santé de l'Université du Zimbabwe (UZ-CHS) (UZ-CHS-BC)

Plus d'un million d'enfants naissent chaque année de femmes infectées par le VIH-1 en Afrique subsaharienne. Au Zimbabwe, les naissances annuelles s'élèvent à 379 000, avec environ 48 000 nourrissons nés chaque année de femmes infectées par le VIH-1 sous traitement antirétroviral hautement actif (HAART) à vie. Des inquiétudes ont été exprimées sur la santé générale et les résultats développementaux des nourrissons exposés au VIH-1 mais non infectés (HEU) nés de femmes infectées par le VIH-1. Bien qu'ils soient séronégatifs pour le VIH, les enfants HEU ont une mortalité 3,9 et 2,0 fois plus élevée que les nourrissons non exposés et non infectés au VIH (HUU) au cours de la première et de la deuxième année de vie, respectivement. Par rapport à leurs homologues HUU, les enfants HEU peuvent avoir des résultats défavorables à la naissance, une croissance altérée, un développement et d'autres déficits de santé. Il s'agit d'un problème de santé publique important car à l'âge adulte, les nourrissons nés avec un faible poids à la naissance (LBW) sont plus susceptibles de mourir de maladies non transmissibles (MNT) telles que l'hypertension, les accidents vasculaires cérébraux et le diabète de type 2. Au Zimbabwe, les nourrissons HEU ont été bien étudiés pendant l'ère pré-HAART; cependant, les preuves contemporaines font défaut. De plus, les études précédentes n'ont pas caractérisé les femmes pendant la grossesse et les résultats n'ont pas été contrôlés pour d'autres agents pathogènes infectieux prénatals courants, y compris les facteurs de risque supplémentaires tels que l'accouchement prématuré, le faible poids de naissance, la durée de l'allaitement, la pauvreté et les facteurs de stress psychosociaux maternels. Par conséquent, une caractérisation approfondie et complète des nourrissons à l'UHE est nécessaire non seulement pour éviter l'infection par le VIH, mais aussi pour améliorer les résultats de santé à court et à long terme des personnes exposées.

Risques du HAART pendant la grossesse Au Zimbabwe, la norme actuelle de soins pour les femmes infectées par le VIH pour prévenir la transmission mère-enfant (TME) du VIH consiste en le ténofovir, la lamivudine et l'éfavirenz (TENOLAM-E). Cependant, les médicaments antirétroviraux peuvent s'accumuler dans le liquide amniotique, posant ainsi un risque lors de développements embryonnaires et fœtaux délicats. Le moment du HAART pourrait également être important, car une étude sud-africaine a montré que les mères qui ont commencé un HAART à base de zidovudine avant la conception avaient deux fois plus de chances d'accoucher avant terme que les mères qui ont commencé le HAART après la conception. Les mécanismes toxiques des médicaments anti-VIH comprennent la toxicité mitochondriale et les mutations de l'ADN mitochondrial chez les mères et peut-être aussi chez les nourrissons. Le dysfonctionnement mitochondrial augmentera à son tour la production d'espèces réactives de l'oxygène et l'activation de la production d'IL-1. L'interférence avec le métabolisme des lipides est un autre mécanisme de toxicité du HAART. L'exposition précoce au HAART à base d'éfavirenz a été associée à des défis neurodéveloppementaux et socio-émotionnels pouvant entraîner des déficits comportementaux. En outre, les infections persistantes, les effets néfastes du statut socio-économique et les contaminants alimentaires maternels tels que les dioxines ou les pesticides chlorés peuvent également jouer un rôle.

Les raisons des effets néfastes observés sur la santé des nourrissons UHE pourraient être liées à un état altéré du système immunitaire. Cependant, les profils immunitaires au-delà d'un an des enfants UHE restent largement inexplorés. Au Zimbabwe, les campagnes de vaccination pour l'immunisation active des nourrissons sont promues via le programme élargi de vaccination (PEV). Même si les titres d'anticorps maximaux après certains vaccins du PEV sont normaux chez les nourrissons à l'UHE, il n'y a pas eu d'études sur la longévité de ces réponses immunitaires. L'exposition au VIH in utero augmente les niveaux de cytokines pro-inflammatoires produites par les cellules placentaires. Les co-infections semblent être importantes puisque les nouveau-nés kenyans à l'UHE (avec un nombre élevé de co-infections maternelles) avaient des niveaux plus élevés de marqueurs plasmatiques inflammatoires que les témoins à l'UHE issus d'études aux États-Unis. De plus, les nourrissons UHE ont des charges de CMV plus élevées, qui peuvent être en partie dues à la virémie maternelle et peuvent contribuer à l'activation immunitaire. Ainsi, les nourrissons à l'UHE continuent d'avoir une inflammation de base qui peut être liée à de mauvais résultats à court et à long terme et les interventions anti-inflammatoires pourraient améliorer la santé du nourrisson. Les études interventionnelles avec le traitement HAART chez les femmes enceintes sont éthiquement difficiles ; cependant, l'impact du HAART sur le développement neuro/immunitaire pourrait être évalué dans des études comme la cohorte de naissance UZ-CHS, où le plus souvent, en raison de difficultés économiques, les mères réservent en retard pour leurs consultations prénatales, et certaines n'ont jamais reçu de HAART au cours de leur troisième trimestre. Les preuves concernant le risque d'exposition au HAART à l'ère de l'option B+ pour les résultats à court et à long terme des nourrissons à l'UHE restent limitées. Cependant, à notre connaissance, aucune étude n'a corrélé les niveaux de HAART dans le liquide amniotique maternel, l'urine, le plasma et le lait maternel longitudinal et n'a été liée à des issues défavorables de la grossesse, à la croissance du nourrisson, au métabolisme et au développement (immunitaire/neuro).

Méthodes L'étude de cohorte de naissance du Collège des sciences de la santé de l'Université du Zimbabwe (UZ-CHS) est une étude de cohorte observationnelle prospective comparant les nourrissons nés de femmes infectées par le VIH et de femmes non infectées par le VIH dans un environnement à faibles ressources de la banlieue ouest à haute densité des polycliniques de santé primaires de Harare . 1 200 femmes enceintes (600 mères infectées par le VIH et 600 témoins non infectées par le VIH) dans leur troisième trimestre ont été inscrites de janvier 2016 à juin 2019. Les participants sont suivis en tant que paires mère-bébé à la naissance, dans les 10 jours suivant l'âge de 6, 10, 14, 24, 48, 72 et 96 semaines. À chaque visite, des examens cliniques sont utilisés pour évaluer l'état de santé et l'impact des facteurs environnementaux. De plus, des questionnaires sont administrés et des échantillons biologiques pour les tests de laboratoire. La conception de l'étude est une cohorte non interventionnelle, mais les participants reçoivent des conseils en matière de santé et d'hygiène.

Objectif de l'étude Cette étude vise à examiner l'impact du statut VIH maternel, l'exposition cumulative au HAART in utero et tout au long de l'allaitement, la suppression immunitaire et l'activation immunitaire et les variables environnementales sur les résultats à court et à long terme des nourrissons dans un environnement à faibles ressources. Notre étude se concentre sur la mortalité et la morbidité des nourrissons UHE, en testant les facteurs de risque établis des cohortes précédentes. Les données et les biomatériaux sont collectés de manière prospective auprès des mères et des nourrissons de la grossesse à l'âge de 2 ans et comparent les nourrissons HEU à HUU de la même communauté. Pour une évaluation complète, le rôle du statut socio-économique maternel, les facteurs familiaux, les comorbidités, y compris les co-infections avec des virus persistants tels que le cytomégalovirus (CMV), l'hépatite b/c (VHB)/(VHC), les maladies bactériennes telles que la syphilis et la tuberculose (TB), les helminthes intestinaux, les MNT émergentes, telles que le diabète sucré gestationnel (GDM) et les troubles hypertensifs et l'état nutritionnel maternel sur les résultats de la grossesse, la mortalité infantile et le développement, l'immunité et la santé seront testés. L'UZ-CHS offre l'opportunité d'établir des gammes de référence non disponibles actuellement, pour différents sous-groupes de femmes enceintes ayant une évolution favorable de la grossesse pour une utilisation clinique pour les futures patientes.

Sites d'étude et engagement municipal local La municipalité de Harare a créé 12 polycliniques comprenant chacune des unités de soins de santé primaires, de maternité, de soins postnatals et un service de santé familiale. Les services médicaux comprennent le conseil et le dépistage rapide du VIH ainsi que l'initiation et l'administration du HAART. La surveillance et le suivi d'autres maladies chroniques, y compris le DG et l'hypertension artérielle, sont également offerts. Un médecin vient deux fois par semaine par site pour s'occuper des cas compliqués. Les services de maternité comprennent les soins prénatals, les visites de suivi et le dépistage et le traitement du VIH et de la syphilis. Il en coûte à une mère 25 USD pour accéder aux services prénatals jusqu'à 10 jours après l'accouchement, tandis que les services de santé sont gratuits pour le nourrisson jusqu'à l'âge de 5 ans. Les mères sont encouragées à réserver tôt pendant la grossesse (à la semaine 4-12) et à faire un test de dépistage du VIH avec leur conjoint. Actuellement, en raison de défis socio-économiques, la plupart des femmes enceintes se rendent à l'enregistrement prénatal dans les polycliniques lorsque leur grossesse est à un stade avancé, une situation qui expose leurs bébés à naître à un risque de transmission du VIH, perpétuant le cercle vicieux de la pauvreté et de l'infection par le VIH. Suite à une évaluation de faisabilité du site avant l'étude, sur les 12 polycliniques, Kuwadzana, Dzivaresekwa (Rujeko), Glenview et Budiriro ont été sélectionnées en fonction des volumes plus élevés de services de santé maternelle et infantile, de la fréquence de la séropositivité et de l'absence de recherches concurrentes ciblant le même population. Les zones de chalandise des quatre polycliniques sélectionnées ont des communautés relativement stables qui ne changent pas fréquemment de logement locatif. Les infirmières et les sages-femmes municipales de ces établissements participent aux procédures d'étude telles que la collecte de données pendant l'accouchement qui a lieu tard dans la nuit. Tous les participants résident dans les zones à forte densité du sud-ouest de Harare. Les résidents de cette communauté sont de statut socio-économique relativement pauvre avec des taux de chômage élevés. La plupart des individus ne peuvent généralement pas se permettre 3 repas appropriés par jour. La plupart des familles (72 %) vivent avec moins d'un dollar par jour et complètent leur alimentation en jardinant à petite échelle autour de leurs maisons. Les familles vivent dans des maisons de structure et de taille similaires (200 mètres carrés). En moyenne, 2 à 6 familles vivent dans ces maisons relativement petites et, dans certaines situations extrêmes, jusqu'à 5 membres de la famille partagent une seule pièce. L'approvisionnement en eau est irrégulier, nécessitant l'utilisation de forages communaux à 200-1 500 mètres de distance. Cette eau puisée manuellement est utilisée pour boire, cuisiner, se laver et tirer la chasse d'eau. Les explosions d'eaux usées sont fréquentes et peuvent se produire à proximité des forages. Les forages contaminés dans deux de nos quatre sites d'étude, Budiriro et Glenview, ont été les épicentres de la récente épidémie de choléra de 2018. Les résidents de ces zones à forte densité partagent un fardeau disproportionné de maladies infectieuses et de MNT par rapport à ceux qui vivent dans des zones à faible densité dans la même ville.

Taille de l'échantillon et puissance statistique Le critère d'évaluation principal de notre étude est la comparaison de la mortalité infantile jusqu'à l'âge de deux ans chez les nourrissons HEU versus HUU. Au Zimbabwe, 50 décès de nourrissons au cours de la première année et 5 décès de nourrissons au cours de la deuxième année de vie sont attendus. Dans l'ère pré-HAART, un facteur 3,2-3,9 une mortalité plus élevée au cours de la première année de vie et une mortalité deux fois plus élevée au cours de la deuxième année de vie étaient attendues. La mortalité de l'UHE à l'ère du HAART avec un traitement plus efficace du VIH pourrait maintenant être améliorée et, dans une estimation prudente, nous avons supposé une multiplication par deux de la mortalité chez les nourrissons UHE au cours des deux premières années de vie. Nous nous attendions donc à une mortalité de 5,5 % chez les nourrissons HUU et de 11 % chez les nourrissons HEU. Selon notre analyse de puissance utilisant G*Power3, un échantillon de 1 198 femmes était nécessaire pour détecter une telle différence avec une puissance de 90 % et un niveau de signification de 0,05 dans une analyse bilatérale. Nous avons donc opté pour une taille d'échantillon de 1 200 mères, 600 séropositives et 600 non séropositives. Les participants potentiels ont été identifiés lors des visites de soins prénatals (ANC) de routine dans l'une des quatre polycliniques de la ville de Harare. Les participants potentiels ont été informés de l'étude et ceux qui ont accepté verbalement de participer ont reçu la fiche d'information du participant rédigée en anglais ou traduite en langue vernaculaire shona pour assurer une pleine compréhension des objectifs et des activités de l'étude en utilisant la langue que le participant comprend le mieux. La participation est volontaire et les femmes ont la possibilité de se retirer à tout moment au cours de l'étude. L'alphabétisation est presque universelle au Zimbabwe et tous les participants potentiels doivent être capables de lire et de comprendre le formulaire de consentement éclairé.

Procédures et mesures des questionnaires des mères À l'inclusion, toutes les mères ont répondu à un questionnaire structuré visant à une caractérisation clinique, comportementale et environnementale complète. Des questions spécifiques porteront sur le comportement sexuel et les problèmes de santé reproductive, y compris les maladies sexuellement transmissibles et l'utilisation de la contraception. L'état de santé général, le comportement de recherche de soins de santé, le stress maternel et la consommation de drogues/herbes seront évalués. Chez les mères séropositives, l'utilisation et la durée du HAART, les comorbidités et les problèmes liés à la divulgation du statut VIH et à la stigmatisation seront enregistrés.

Pour aborder l'hygiène, des questions précises sur l'assainissement (type et nombre de toilettes, système d'égouts), l'eau potable, le type d'énergie utilisée (pollution intérieure), le type de maison, le nombre de pièces utilisées pour dormir par la famille et le nombre d'individus partageant une chambre individuelle sera demandée. Les informations économiques comprenant la situation de l'emploi, le revenu familial mensuel, la sécurité alimentaire, le régime alimentaire, l'argent mis de côté pour l'alimentation, les soins de santé, le combustible de cuisine et les économies seront évaluées. La propriété de terres agricoles ou de biens du ménage, y compris les radios, les télévisions, les téléphones portables/fixes, les réfrigérateurs, les vélos, les motos/scooters et les voitures, fournira des informations supplémentaires sur le statut socio-économique. D'autres questions porteront sur le style de vie maternel tel que la consommation d'alcool, le tabagisme, les habitudes de sommeil, les activités physiques, la violence domestique et le soutien du partenaire, y compris les connaissances, les croyances et les pratiques.

Examen physique et tests au point de service Lors de l'inscription, la sage-femme de l'étude a effectué un examen physique complet, des contrôles de la pression artérielle, une évaluation de l'œdème et une anthropométrie. La stadification clinique de l'OMS sera établie pour toutes les femmes séropositives. L'évaluation de l'état nutritionnel se fera à l'aide d'indices anthropométriques standard, notamment l'indice de masse corporelle (IMC). Le périmètre brachial (PB) sera utilisé comme indicateur de malnutrition ou d'obésité. Le MUAC sera mesuré à mi-distance entre l'acromion et l'olécrâne. Une étude sud-africaine a démontré qu'un MUAC de <23 cm prédisait un IMC avant la grossesse de <18,5 kg/m2. Pour des raisons pratiques, un seuil maternel de PB de ≤25 cm sera utilisé comme marqueur de malnutrition.

La tension artérielle (TA) sera mesurée après avoir accordé à la mère au moins 5 minutes de repos. Une machine Tenso MED BP avec un brassard normal ou large couvrant au moins la moitié de la longueur du bras est utilisée. L'hypertension pendant la grossesse est définie par une pression artérielle ≥ 140/90 mmHg sur au moins 2 mesures distinctes à 4 heures d'intervalle, à tout moment de la grossesse. Une hypertension légère à modérée telle qu'une TA systolique de 140-159 mmHg ou une TA diastolique de 90-109 mmHg avec une hypertension sévère fait référence à une pression artérielle systolique d'au moins 160 mmHg ou une pression artérielle diastolique d'au moins 110 mmHg. L'hypertension chronique est définie par une hypertension diagnostiquée soit avant 20 semaines de grossesse, soit diagnostiquée pour la première fois pendant la grossesse et persistant au-delà de 12 semaines après l'accouchement. Toutes les mères présentant une protéinurie basée sur des bandelettes urinaires sont référées à l'hôpital pour une investigation de la pré-éclampsie. Le diagnostic de pré-éclampsie suivra des critères établis.

Visites de suivi de la mère et du nourrisson Les mères sont informées de leurs visites de suivi à venir par téléphone ou par SMS. Les données peuvent toujours être collectées en cas de visites manquées à condition que le participant se présente dans un délai de sept jours suivant les visites prévues. Si une mère ne se présente pas à ses rendez-vous de suivi prévus, des tentatives de contact avec elle ou son plus proche parent par téléphone et/ou des visites à domicile par l'infirmière de recherche sont effectuées strictement selon les préférences de la mère documentées lors de l'inscription. Les nourrissons malades seront vus par le pédiatre de l'étude. Des informations sur le lieu, la date et le mode d'accouchement, les pratiques longitudinales d'alimentation du nourrisson et des informations complètes sur la santé, le développement et l'environnement seront collectées. Des questionnaires détaillés similaires à l'inscription seront ré-administrés à 6, 12, 18 et 24 mois. Un examen physique des mères et de leurs nourrissons sera effectué pour les mères jusqu'à la semaine 6 et pour les bébés à chaque visite. Les procédures d'étude comprennent également des prélèvements biologiques approfondis de sang, de lait maternel et de selles. À chaque visite, le remboursement du transport pour la fréquentation de la clinique est fourni ainsi que des rafraîchissements. La mère peut être invitée à interrompre si elle ne se présente pas consécutivement à au moins deux visites d'étude programmées successives sans aucune raison ni communication.

Mortalité infantile Le principal critère de jugement de cette étude est le critère composite « décès du nourrisson », défini comme la mortinaissance (âge gestationnel à la naissance ≥ 20 semaines) et les nourrissons décédés au cours des deux premières années de vie. Les décès néonatals (0-364 jours) seront ensuite divisés en trois sous-groupes : décès néonatal précoce (0-6 jours), décès néonatal tardif (7-27 jours) et décès post-néonatal (28-364 jours). Les décès tardifs (365-730 jours) seront également enregistrés. La mortalité sera évaluée séparément chez les nourrissons exposés et infectés par le VIH (HEI), HEU et HUU.

Les effets indésirables à l'accouchement comprennent l'accouchement prématuré. L'âge gestationnel sera divisé en prématurité précoce ≤ 31 semaines, prématurité tardive (32-36 semaines), terme (au moins 37 semaines) et naissance post-terme (> 42 semaines de gestation). Les résultats défavorables à la naissance comprennent la nécessité d'une réanimation à la naissance en raison d'une asphyxie à la naissance ou d'un syndrome de détresse respiratoire. L'asphyxie à la naissance sera définie comme toute condition médicale résultant d'une diminution ou d'une interruption de l'apport d'oxygène à un nouveau-né avant, pendant ou peu après la naissance. Les résultats indésirables supplémentaires sont un faible score d'Apgar à 5 minutes (<7), petit pour l'âge gestationnel, c'est-à-dire poids/taille inférieur au 10e centile pour l'âge gestationnel, LBW (<2 500 g, pesé dans la première heure de vie, très LBW (<1 000 g), macrosomie fœtale (poids de naissance > 4 000 g, microcéphalie < 2 DS de la moyenne, malformations congénitales (malformations, chiffres supplémentaires) et naissances multiples.

Croissance du nourrisson La croissance sera exprimée sous forme de scores Z selon les définitions de l'OMS : poids pour l'âge (WAZ), taille pour l'âge (HAZ), poids pour la taille (WHZ) et tour de tête pour l'âge (HCAZ). ). Les résultats de croissance seront évalués en tant que variables continues (score Z atteint et changement du score Z entre les visites). De plus, les résultats catégoriques ; l'émaciation modérée, le retard de croissance, le retard de croissance sévère, l'insuffisance pondérale et la microcéphalie seront évalués comme HAZ <-2, HAZ <-3, WAZ <-2 ; et HCAZ <-2, respectivement. En tant que marqueur biologique de la croissance du nourrisson, les taux sériques de facteur de croissance analogue à l'insuline plasmatique 1 seront déterminés à l'âge de 6 semaines à l'aide d'ELISA, R&D Systems, Minneapolis.

Le périmètre brachial du nourrisson est mesuré à partir de l'âge de 6 semaines et la sensibilité, la spécificité, la valeur prédictive positive et les valeurs prédictives négatives du périmètre brachial pour le retard de croissance, l'insuffisance pondérale, l'émaciation, l'anémie et le développement neurologique indésirable chez les nourrissons HEI, HEU et HUU âgés de 0 à <6 mois , 6-<12 mois et 12-24 mois seront déterminés. WHZ sera utilisé comme étalon-or pour le gaspillage.

Évaluation de la morbidité infantile Des carnets de morbidité sont remis aux mères à l'accouchement. Les professionnels de la santé documentent les rapports médicaux dans le journal de morbidité lors des visites de maladie ou des hospitalisations. Celles-ci comprendront : l'hypoglycémie néonatale, la jaunisse néonatale, l'anémie infantile, les éruptions cutanées, les infections congénitales, la transmission verticale de l'infection au cours des 2 ans, toute hospitalisation (fréquence et durée), les visites de maladie (dates et durée), les traitements hospitaliers locaux documentés, le retard de croissance , dépérissement et développement neurologique anormal. Après des épisodes de maladies, des notes de suivi seront enregistrées dans le journal. Les mères évalueront également de manière subjective et continue le bien-être du nourrisson et seront encouragées à documenter toute maladie infantile dans le journal pour une documentation complète. Le journal sera soumis à l'étude à la sortie, à 24 mois.

Développement du nourrisson Les résultats neurodéveloppementaux seront évalués de six semaines à deux ans à l'aide de l'outil de dépistage Denver II. Cet outil évalue les capacités motrices globales et fines, le développement du langage, les compétences sociales, la capacité d'attention, la conformité générale et la peur. De plus, les étapes du développement du nourrisson (p. l'heure de la dentition, de la première position assise, de la marche ou de la conversation) sera enregistrée.

Échantillons biologiques maternels Des échantillons biologiques comprenant du sang total, du plasma et du sérum, de l'urine et du lait maternel seront prélevés à toutes les visites ; les selles, le sang de cordon, le liquide amniotique et le placenta sont prélevés à l'accouchement. Les échantillons sensibles (selles, lait, urine) seront placés à 4°C pendant 4 heures maximum avant le traitement. Tous les échantillons seront conservés en bio-banque à -80°C dans un délai maximum de 6 heures après acquisition.

Les échantillons de selles maternelles seront criblés pour les protozoaires intestinaux et les helminthes trophozoïtes et ovules en utilisant la microscopie directe en montage humide et la technique de concentration à l'éther formel.

Détermination des numérations globulaires complètes maternelles Pour l'évaluation des numérations globulaires complètes (FBC), le sang veineux sera prélevé dans des tubes d'acide éthylènediaminetétracétique (EDTA) de 5 ml par un système Vacutainer et analysé à l'aide d'un analyseur différentiel en 3 parties Mindray© Hematology, 16 paramètres BC3600 Analyser, Chine utilisant du sang total. La définition de l'OMS pour le diagnostic de l'anémie pendant la grossesse sera utilisée (concentration d'hémoglobine <11,0 g/dl.) Échantillons de sang du nourrisson Le sang veineux du nourrisson sera prélevé dans la mesure du possible entre 7 et 10 jours pour la FBC. Dans la mesure du possible, les échantillons de plasma seront conservés. Le volume de sang prélevé respectera les quantités recommandées en fonction du poids du nourrisson (c.-à-d. ≤1-5% du volume sanguin total sur 24 heures et ≤ 10% sur 8 semaines). Le sang ne sera pas prélevé sur les nourrissons gravement malades et ceux chez qui on soupçonne une anémie grave selon l'évaluation clinique. Des taches de sang séché seront prélevées à chaque visite à l'aide d'échantillons de sang total ou d'une ponction à l'aiguille du talon. 3 à 5 gouttes de sang seront prélevées et séchées sur du papier filtre Whatman et conservées à -80◦ Celsius.

Glycémie maternelle Le dépistage du diabète gestationnel à l'aide de taux sériques aléatoires de glycémie non à jeun sera effectué pour un sous-groupe de femmes lors de l'inscription à l'aide de l'analyseur chimique Mindray BS200 (Mindray, Chine), y compris les taux d'hémoglobuline glycosylée (HbA1c). Un seuil d'HbA1c de 6,5 % identifiera le diabète non diagnostiqué, tandis qu'un HbA1c ≥ 5,6 % marquera les individus présentant un risque accru de diabète futur selon les directives de l'OMS.

Profils des fonctions rénales et hépatiques maternelles La créatinine, l'urée et les électrolytes (sodium, potassium et chlorure) seront mesurés sur des échantillons de sérum des mères à l'aide de l'analyseur chimique Beckman Coulter AU680, Allemagne. Les niveaux de créatinine seront utilisés pour estimer le taux de filtration glomérulaire maternelle à l'aide de l'équation modifiée pour le régime alimentaire dans les maladies rénales. La fonction hépatique et la cholestase seront évaluées à l'aide de l'albumine sérique, du fibrinogène, de la bilirubine, de la lactate déshydrogénase (LDH), de l'alanine transaminase (ALT), de l'aspartate aminotransférase (AST), de la phosphatase alcaline (ALP) et de la gamma glutamyl transférase (GGT).

Les tests de la fonction hépatique et rénale du nourrisson seront évalués chez tous les nourrissons à 6 et 24 mois à condition que suffisamment de matériel soit disponible.

Profils lipidiques et osseux maternels Le cholestérol à lipoprotéines de haute densité (HDL-C), le cholestérol à lipoprotéines de basse densité (LDL-C), le cholestérol total (TC) et le rapport TC/HDL-C au départ seront déterminés à l'aide de sérum à l'inscription et à 24 mois suivi. TC sera utilisé pour calculer le LDL-C lorsque les concentrations sont inférieures à 4,4 mmol/L. Pour les profils osseux maternels, des mesures longitudinales des taux sériques de calcium ionisé, de phosphore, d'albumine et d'ALP pendant la grossesse et au sevrage seront effectuées.

Diagnostic maternel du VIH Le dépistage maternel de l'infection par le VIH sera effectué à l'aide de l'algorithme de test en série conformément aux directives nationales du Zimbabwe pour le dépistage du VIH et le conseil. Des tests immunochromatographiques rapides qualitatifs, Standard Diagnostics (SD) Bioline HIV-1/2 3.0 (SD Inc., Kyonggi-Do, Corée du Sud) sont utilisés pour le dépistage initial. Les tests positifs sont confirmés à l'aide du kit Alere DetermineTM HIV-1/2 (Abbott Diagnostics, USA. Western blot est utilisé pour les résultats de test indéterminés. Le dépistage du VIH des mères non infectées par le VIH sera répété tous les 6 mois pour identifier les séroconvertisseurs.

Diagnostic du VIH chez le nourrisson Chez tous les nourrissons exposés au VIH, la détection précoce du VIH est effectuée à l'aide du test qualitatif COBAS1 AmpliPrep/COBAS1 TaqMan1 HIV-1 (Roche Molecular System) conformément aux instructions du fabricant. Des tests sont effectués à chaque visite depuis l'accouchement jusqu'au sevrage ou au diagnostic d'infection par le VIH.

Quantification de la charge d'ARN du VIH-1 Les échantillons de plasma maternel et infantile seront quantifiés pour la charge d'ARN du VIH-1 à l'inscription et à 24 mois, respectivement à l'aide d'un TaqMan Cobas AmpliPrep Roche Diagnostics, Branchburg NJ), conformément aux instructions du fabricant. La limite de détection inférieure du test est de 20 copies/mL.

Évaluation de l'état immunitaire de la mère et du nourrisson Les numérations maternelles absolues des lymphocytes T CD4 + sont dénombrées dans des échantillons de sang EDTA pour tous les séropositifs à l'aide du compteur Partec Cyflow, Allemagne lors de l'inscription et à des intervalles de 12 mois. Les analyses seront effectuées dans les 6 heures suivant le prélèvement sanguin.

Niveaux de HAART Les niveaux d'éfavirenz, de lamivudine et de ténofovir dans différents compartiments maternels, y compris le plasma, le lait maternel, l'urine et le liquide amniotique, seront mesurés à l'aide de la chromatographie liquide à haute performance.

Évaluation des co-infections maternelles Le dépistage du VHB de toutes les mères et de tous les nourrissons exposés sera effectué en mesurant l'antigène de surface du VHB (HBsAg), les anticorps anti-HBsAg et anti-core seront détectés à l'aide de kits immunochromatographiques, Pointecare Diagnostics, États-Unis, conformément aux instructions du fabricant. . Les charges d'ADN de CMV dans le sérum maternel et le CMV congénital seront mesurés à l'aide du kit RealStar CMV PCR v1.0 Germany, après isolement de l'ADN viral à l'aide du QIAamp MinElute Virus Spin Kit Germany.

Les taches de sang séché des nourrissons seront évaluées pour les marqueurs d'infection, le CMV, le VHB, le VHC et le VIH pour tous les nourrissons exposés. Les isotypes d'anticorps anti-Treponema pallidum seront utilisés pour le profilage de la syphilis maternelle à l'aide du kit immunochromatographique qualitatif SD Bioline 3.0. Le test Rapid Plasma Reagin (RPR) sera utilisé pour la détection de l'antigène du laboratoire de recherche sur les maladies vénériennes (VDRL) contenant du carbone microparticulaire. La sérologie de la syphilis se fera sur plasma de nourrisson à 24 mois chez les nourrissons exposés à l'aide du kit immunochromatographique qualitatif SD Bioline 3.0.

L'immunogénétique de la sensibilité au VIH et aux co-infections Le typage de l'antigène leucocytaire humain (HLA) et des récepteurs de type immunoglobuline tueur (KIR) sera effectué sur des échantillons d'ADN maternels et infantiles en utilisant le séquençage de l'ADN et la réaction en chaîne par polymérase (PCR) à amorce spécifique de séquence comme précédemment décrit précédemment. Les variantes HLA et KIR seront corrélées au statut virologique maternel, au statut immunitaire et aux résultats cliniques.

Réponses immunitaires humorales du nourrisson aux vaccins du PEV Les corrélats de l'immunité contre les maladies infectieuses chez les nourrissons à l'UHE restent mal compris. Les titres d'anticorps contre la rougeole, la rubéole, le rotavirus, le poliovirus, le virus de l'hépatite B (VHB), la diphtérie, l'anatoxine tétanique, la coqueluche, le pneumocoque et Haemophilus influenza de type b (Hib) seront mesurés à l'aide de méthodes commerciales basées sur ELISA. Les mesures seront effectuées après la vaccination à 12, 18 et/ou 24 mois. Titres sériques corrélés à la protection (par ex. l'immunoglobuline anti-rotavirus A ≥ 20 U/mL sera évaluée chez les nourrissons HUU, HEI et HEU.

Évaluation des manifestations atopiques et de la sensibilisation du nourrisson Les causes et le moment de la dermatite atopique restent mal décrits en ASS. Les conditions allergiques maternelles au cours du troisième trimestre seront évaluées par un questionnaire détaillé concernant le régime alimentaire maternel, y compris les envies alimentaires, l'utilisation de drogues par la mère et les symptômes allergiques et intestinaux. À partir de l'accouchement, la sage-femme de recherche ou l'infirmière de l'étude examinera physiquement tous les nourrissons pour détecter la présence d'une dermatite atopique définie par la présence d'une éruption cutanée avec démangeaisons et/ou d'une dermatite de flexion visible. L'érythème fessier, l'éruption autour des yeux et/ou la desquamation du cuir chevelu ne seront pas considérés comme un diagnostic d'eczéma. L'immunoglobuline sérique totale et spécifique E (IgE) dans des échantillons de sang de nourrissons sélectionnés sera mesurée sur un analyseur d'immuno-analyse (Thermofisher, Fribourg, Allemagne) pour soutenir le diagnostic clinique d'une condition atopique comme décrit précédemment. Plus précisément, les anticorps IgE contre l'œuf de poule, le lait de vache, les arachides, les aéroallergènes, le pollen de graminées, les squames de chat, de chien et les acariens seront évalués. Les nourrissons présentant des taux sériques spécifiques d'IgE > 0,3 UI/ml contre un ou plusieurs des aliments testés ou des allergènes inhalés seront considérés comme sensibilisés. Les allergies alimentaires seront corrélées à la morbidité infantile, à l'utilisation prénatale de médicaments et à la nutrition, y compris les aliments dont les mères ont rêvé pendant la grossesse.

Résumé des sous-études

1. Sous-étude sur le microbiote intestinal Cette sous-étude vise à évaluer comment l'infection par le VIH et l'utilisation du HAART affectent la maturation du microbiote intestinal afin de comprendre la pathogenèse du dysfonctionnement entérique environnemental (EED. Des échantillons séquentiels de selles mère-nourrisson de la grossesse à 24 mois seront utilisés pour effectuer le séquençage de 16 petites sous-unités (S) d'acide ribonucléique ribosomal (ARNr) pour l'évaluation de la composition de l'embranchement et de l'unité taxonomique opérationnelle avec ≥ 97 % d'identité de séquence, ainsi que microbienne. diversité. Dans des échantillons sélectionnés, un séquençage métagénomique complet du génome bactérien sera effectué pour identifier le potentiel métabolique du microbiote. En outre, une spectrométrie de masse sera effectuée pour le métabolome, y compris l'évaluation des marqueurs de translocation microbienne à travers la paroi intestinale endommagée, tels que les lipopolysaccharides (LPS) et l'anticorps de noyau d'endotoxine (EndoCAb) et la protéine de liaison aux acides gras intestinaux (I-FABP) en tant que marqueur pour les entérocytes. dommage. Les marqueurs du microbiote et des métabolites seront corrélés à la croissance, au développement et à la susceptibilité du nourrisson aux maladies infectieuses.
2. Sous-étude sur l'immunométabolomique Cette sous-étude vise à étudier au moins 24 marqueurs plasmatiques d'activation immunitaire inflammatoire, à l'aide de tests multiplex basés sur ELISA par la technologie Luminex, en tant que facteurs de risque d'issue défavorable de la grossesse chez les femmes infectées par le VIH et d'une croissance et d'un développement ultérieurs du nourrisson. Pour cette étude-étude, nous sélectionnerons ≥ 50 femmes infectées par le VIH avec une exposition à long terme (> 7 mois), à moyen terme (1-7 mois) et sans/à court terme (sans ou < 1 mois) HAART et non infectées femmes comme témoins. Pour évaluer le dysfonctionnement du métabolome et des mitochondries, des techniques de spectrométrie de masse seront utilisées pour mesurer un large éventail de métabolites, notamment les acides aminés, les espèces réactives de l'oxygène, les triglycérides, les diacylglycérides, le cholestérol, les phospholipides, les acides gras, les lipides peroxydés et les oxylipides.
3. Sous-étude sur l'immunité à médiation cellulaire Nous émettons l'hypothèse que des altérations du nombre et de la fonction des cellules NK pourraient survenir chez les nourrissons UHE et les prédisposer à des infections graves et à des tumeurs malignes associées à des virus persistants. Chez les nourrissons ayant un volume sanguin suffisant de ≥ 2 ml, nous isolerons les cellules mononucléaires dérivées du sang périphérique des nourrissons HUU et HEU avec une exposition maternelle à court, moyen et long terme au HAART à 24 mois pour déterminer le nombre et la fonction des lymphocytes T et NK cellules comme décrit précédemment.
4. Sous-étude sur la co-infection tuberculeuse latente Nous émettons l'hypothèse que la tuberculose latente non diagnostiquée peut partiellement expliquer l'augmentation de la mortalité infantile chez les nourrissons dans les milieux à faibles ressources. Les TST ont été utilisés pour dépister la tuberculose latente ; cependant, en raison d'une interaction avec le vaccin BCG qui est administré systématiquement au Zimbabwe, la spécificité du TCT peut être considérablement réduite dans notre population d'étude. TB, IGRA) seront utilisés pour tester la TB latente dans un sous-groupe de femmes enceintes et à 6 semaines après l'accouchement et évalués par rapport au TCT. De plus, des échantillons placentaires seront testés pour des lésions histologiques suggérant une inflammation tuberculeuse. Les mesures IGRA et la taille des lésions TST doivent être corrélées avec des résultats indésirables pour la mère et le nourrisson.
5. Sous-étude sur le stress maternel Cette étude évaluera la prévalence, les facteurs de risque et les mécanismes d'adaptation du stress maternel à l'aide du questionnaire sur le stress perçu au moment de l'inscription et 6 semaines après l'accouchement.
6. Exposition au VIH/HAART et résultats neurodéveloppementaux Cette sous-étude évalue les séquelles neurodéveloppementales potentielles à long terme liées à l'infection par le VIH et à l'exposition prolongée au HAART à l'aide de l'outil Mullen à 12 et 24 mois.

De futures études pourraient suivre les nourrissons jusqu'à l'adolescence. Une cohorte d'observation rurale parallèle est souhaitable pour contrôler les facteurs de confusion des ménages et de l'environnement associés à l'étude actuelle en milieu urbain.