Monitorowanie oporności na artemeter-lumefantrynę u dzieci z niepowikłaną malarią Plasmodium falciparum w Mali

Artemeter-lumefantrine (AL) zastąpił artesunat + amodiachinę jako terapia skojarzona artemizyniną (ART) pierwszego rzutu (ACT) w niepowikłanej malarii wywołanej przez Plasmodium falciparum w Mali. Nie wiadomo, czy pasożyty rozwijają oporność na AL w Mali, gdzie badamy, w jaki sposób naturalnie nabyta odporność i cecha sierpowatokrwinkowa zmniejszają ryzyko malarii i gęstość pasożytów w naszej pediatrycznej populacji badawczej. Badanie monitorowania oporności na AL: Aby monitorować pojawiającą się oporność na AL in vivo i oporność na lumefantrynę (LF) ex vivo, przeprowadzimy standardowy protokół zalecany przez WHO w celu pomiaru wskaźników oporności na AL w ciągu najbliższych 4 lat. Zarejestrujemy wszystkie dzieci w wieku 2-17 lat z niepowikłaną malarią falciparum i liczbą pasożytów między 2000 a 200 000 pasożytów na mikrolitr, leczymy je AL w D0, D1 i D2, potwierdzamy odpowiednie stężenia LF w osoczu w dniu 7 i monitorujemy malarię objawy i nawracające parazytemie w D0, D1, D2, D3, D7, D14, D21 i D28. W powiązanych badaniach laboratoryjnych użyjemy próbek krwi pobranych w czasie rekrutacji i rekrudencji, aby zmierzyć podatność pasożyta na LF i inne leki przeciwmalaryczne ex vivo; badanie genetycznych i transkrypcyjnych uwarunkowań odpowiedzi pasożytów na AL in vivo i LF ex vivo; i przygotować kriokonserwowane pasożyty do przyszłych prac nad działaniem leków i mechanizmami oporności. Podbadanie eliminacji pasożytów: Niedawno odkryliśmy zależne od wieku przyspieszenie eliminacji pasożytów u malijskich dzieci i postulujemy, że pośredniczy w tym IgG specyficzna dla białka błonowego 1 erytrocytów Plasmodium falciparum (PfEMP1), głównego czynnika wirulencji pasożyta na powierzchni zakażonych krwinki czerwone (iRBC). Stawiamy hipotezę, że ekspozycja na ART indukuje przedwczesną ekspresję PfEMP1 na powierzchni krążących pierścieni-iRBC in vivo. Aby przetestować tę hipotezę, obliczymy wskaźniki klirensu pasożytów w podgrupie osobników o stosunkowo wysokim zagęszczeniu pasożytów i odniesiemy te wskaźniki do zdolności autologicznej IgG do rozpoznawania pierścieniowych iRBC w ciągu pierwszych 8 godzin ekspozycji na ART in vivo. W tej samej podgrupie pacjentów zbadamy również, czy AL indukuje stan uśpienia pasożyta in vivo, usuwając pasożyty w H0, H6, H24, H48, D3, D7 i D14 po terapii AL i klonując je w celu ilościowego określenia liczby żywotnych pasożytów . Badanie pobierania krwi: Stwierdziliśmy, że cecha sierpowatokrwinkowa (HbAS), podobnie jak naturalnie nabyta odporność humoralna, zmniejsza zarówno ryzyko malarii, jak i gęstość pasożytów w naszej badanej populacji, oraz że ta ochrona jest związana z nieprawidłowym wyświetlaniem PfEMP1 na powierzchni iRBC. Aby wyjaśnić mechanizm molekularny tego fenotypu i zbadać, w jaki sposób może on synergizować z naturalnie nabytymi odpowiedziami IgG, zbadamy, czy rozwój mechanizmu transportu PfEMP1 jest upośledzony w HbAS w porównaniu z normalnymi krwinkami czerwonymi homozygotycznej hemoglobiny A (HbAA) (RBC) . Aby to przetestować, oczyścimy izolaty pasożytów od dzieci chorych na malarię, zaszczepimy je w RBC HbAA i HbAS od zdrowych dorosłych dawców i będziemy śledzić ich rozwój wewnątrzerytrocytarny za pomocą cytometrii przepływowej i mikroskopii elektronowej.