Monitoraggio della resistenza all'artemetere-lumefantrina nei bambini con malaria da Plasmodium Falciparum non complicata in Mali

Artemetere-lumefantrina (AL) ha sostituito artesunato + amodiachina come terapia di combinazione di artemisinina (ART) in prima linea (ACT) per la malaria da Plasmodium falciparum non complicata in Mali. Non è noto se i parassiti stiano sviluppando resistenza all'AL in Mali, dove stiamo studiando come l'immunità acquisita naturalmente e il tratto falciforme riducano il rischio di malaria e la densità dei parassiti nella nostra popolazione di studio pediatrica. Studio di monitoraggio della resistenza AL: per monitorare l'emergente resistenza AL in vivo e la resistenza alla lumefantrina (LF) ex vivo, condurremo un protocollo standard raccomandato dall'OMS per misurare i tassi di resistenza AL nei prossimi 4 anni. Arruolaremo tutti i bambini di età compresa tra 2 e 17 anni con malaria da falciparum non complicata e conta di parassiti tra 2.000 e 200.000 parassiti per microlitro, li tratteremo con AL su D0, D1 e D2, confermeremo adeguate concentrazioni plasmatiche di LF il giorno 7 e monitoreremo la malaria sintomi e parassitemie ricorrenti in G0, D1, D2, D3, D7, D14, D21 e D28. In studi di laboratorio correlati, utilizzeremo campioni di sangue prelevati al momento dell'arruolamento e della recrudescenza per misurare la suscettibilità del parassita alla LF e ad altri farmaci antimalarici ex vivo; studiare i determinanti genetici e trascrizionali della risposta del parassita ad AL in vivo e LF ex vivo; e preparare i parassiti criopreservati per lavori futuri sull'azione dei farmaci e sui meccanismi di resistenza. Sottostudio sull'eliminazione del parassita: abbiamo recentemente scoperto un'accelerazione dipendente dall'età dei tassi di eliminazione del parassita nei bambini del Mali e postuliamo che sia mediata da IgG specifiche per la proteina 1 della membrana eritrocitaria del Plasmodium falciparum (PfEMP1), il principale fattore di virulenza del parassita sulla superficie dell'infezione globuli rossi (iRBC). Ipotizziamo che l'esposizione all'ART induca l'espressione prematura di PfEMP1 sulla superficie degli iRBC ad anello circolanti in vivo. Per testare questa ipotesi, calcoleremo i tassi di eliminazione del parassita in un sottogruppo di soggetti con densità parassitarie relativamente elevate e metteremo in relazione questi tassi con la capacità delle IgG autologhe di riconoscere gli iRBC ad anello nelle prime 8 ore di esposizione all'ART in vivo. In questo stesso sottogruppo di pazienti, esploreremo anche se AL induce la dormienza del parassita in vivo rimuovendo i parassiti a H0, H6, H24, H48, D3, D7 e D14 dopo la terapia con AL e clonandoli per quantificare il numero di parassiti vitali . Studio sulla raccolta del sangue: abbiamo scoperto che il tratto falciforme (HbAS), come l'immunità umorale acquisita naturalmente, riduce sia il rischio di malaria che la densità del parassita nella nostra popolazione di studio e che questa protezione è associata alla visualizzazione anormale di PfEMP1 sulla superficie iRBC. Per chiarire il meccanismo molecolare di questo fenotipo ed esplorare come può entrare in sinergia con le risposte IgG acquisite naturalmente, indagheremo se lo sviluppo del meccanismo di traffico di PfEMP1 è compromesso nell'HbAS rispetto ai normali globuli rossi omozigoti con emoglobina A (HbAA) (RBC) . Per verificarlo, purificheremo isolati di parassiti da bambini affetti da malaria, li inoculeremo in HbAA e HbAS RBC da donatori adulti sani e seguiremo il loro sviluppo intraeritrocitario mediante citometria a flusso e microscopia elettronica.