Monitoramento da resistência ao arteméter-lumefantrina em crianças com malária não complicada por Plasmodium Falciparum no Mali

Artemeter-lumefantrina (AL) substituiu artesunato + amodiaquina como a terapia de combinação de artemisinina (ART) de primeira linha (ACT) para malária por Plasmodium falciparum não complicada no Mali. Não se sabe se os parasitas estão desenvolvendo resistência à AL no Mali, onde estamos estudando como a imunidade adquirida naturalmente e o traço falciforme reduzem o risco de malária e a densidade de parasitas em nossa população de estudo pediátrico. Estudo de monitoramento de resistência a AL: Para monitorar a resistência emergente a AL in vivo e a resistência à lumefantrina (LF) ex vivo, conduziremos um protocolo padrão recomendado pela OMS para medir as taxas de resistência a AL nos próximos 4 anos. Inscreveremos todas as crianças de 2 a 17 anos com malária falciparum não complicada e contagem de parasitas entre 2.000 e 200.000 parasitas por microlitro, trataremos com AL em D0, D1 e D2, confirmaremos as concentrações plasmáticas adequadas de LF no dia 7 e monitoraremos a malária sintomas e parasitemias recorrentes em D0, D1, D2, D3, D7, D14, D21 e D28. Em estudos laboratoriais relacionados, usaremos amostras de sangue coletadas nos momentos de inscrição e recrudescência para medir a suscetibilidade do parasita à LF e outras drogas antimaláricas ex vivo; investigar determinantes genéticos e transcricionais da resposta do parasita à AL in vivo e LF ex vivo; e preparar parasitas criopreservados para trabalhos futuros sobre ação de drogas e mecanismos de resistência. Subestudo de eliminação de parasitas: Descobrimos recentemente uma aceleração dependente da idade das taxas de eliminação de parasitas em crianças do Mali e postulamos que é mediada por IgG específica para Plasmodium falciparum proteína de membrana de eritrócitos 1 (PfEMP1), o principal fator de virulência do parasita na superfície de células infectadas glóbulos vermelhos (iRBCs). Nós hipotetizamos que a exposição ART induz a expressão prematura de PfEMP1 na superfície do anel-iRBCs circulantes in vivo. Para testar essa hipótese, calcularemos as taxas de depuração de parasitas em um subconjunto de indivíduos com densidades de parasitas relativamente altas e relacionaremos essas taxas à capacidade da IgG autóloga de reconhecer iRBCs em anel nas primeiras 8 horas de exposição à ART in vivo. Neste mesmo subconjunto de pacientes, também exploraremos se o AL induz a dormência do parasita in vivo, removendo os parasitas em H0, H6, H24, H48, D3, D7 e D14 após a terapia com AL e clonando-os para quantificar o número de parasitas viáveis . Estudo de Coleta de Sangue: Descobrimos que o traço falciforme (HbAS), como a imunidade humoral adquirida naturalmente, reduz o risco de malária e a densidade parasitária em nossa população de estudo, e que essa proteção está associada à exibição anormal de PfEMP1 na superfície iRBC. Para elucidar o mecanismo molecular desse fenótipo e explorar como ele pode sinergizar com as respostas de IgG adquiridas naturalmente, investigaremos se o desenvolvimento da maquinaria de tráfico de PfEMP1 é prejudicado na HbAS em comparação com os glóbulos vermelhos (hemácias) da hemoglobina A (HbAA) homozigótica normal. . Para testar isso, vamos purificar isolados de parasitas de crianças com malária, inoculá-los em hemácias HbAA e HbAS de doadores adultos saudáveis ​​e acompanhar seu desenvolvimento intraeritrocitário usando citometria de fluxo e microscopia eletrônica.