Papel do CD133 e do status do microssatélite na avaliação do câncer retossigmoide em adultos jovens que receberam tratamento neoadjuvante

A incidência de câncer colorretal em idade é superior a cinquenta anos em todo o mundo. Mas, ao comparar a incidência e as características clínico-patológicas do câncer colorretal em países ocidentais e países com recursos limitados como o Egito, há uma idade mediana de incidência significativamente menor. No Egito, relatórios mostraram que o CCR foi detectado em 11-15% dos pacientes submetidos à colonoscopia e diagnosticado em 29-31% dos pacientes com 40 anos ou menos. Dados semelhantes vêm de outros países altamente populosos e com recursos limitados na Ásia. Este câncer retal de início precoce é principalmente pouco diferenciado, avançado no prognóstico, esporádico sem predisposição familiar. Pacientes jovens com câncer de cólon proximal microssatélite alto (MSI-h) têm bom prognóstico, mas faltam dados sobre o papel prognóstico e preditivo desses genes em pacientes jovens com câncer retal irradiado. Como esses pacientes jovens apresentam pior resultado em termos de sobrevida livre de progressão e taxas mais altas de eventos metastáticos, levantamos a hipótese de que as células-tronco do câncer colorretal (CR-CSC) podem ter um papel neste resultado sombrio. CD133 é um dos mais bem caracterizados marcadores de CR-CSCs, muitos estudos demonstraram que a expressão de CD133 estava correlacionada com a sobrevida, recorrência, metástase e resistência à quimioterapia no câncer colorretal.

Portanto, o estudo está tentando estabelecer uma correlação entre o status de EM e o enriquecimento com CR-CSC e se essa relação proposta pode ter implicações no resultado da doença e nos resultados do tratamento.

Pacientes e métodos:

Os investigadores inscreverão cerca de 30 pacientes e examinarão a biópsia colonoscópica pré-tratamento para

• Tipo e grau de carcinoma sob microscopia de luz após coloração com hematoxilina e eosina.

• Imunocitoquímica realizada em seções de 4 µ de espessura de blocos de parafina usando a técnica de estreptavidina-biotina-peroxidase. Os cortes serão rotineiramente desparafinizados, reidratados por meio de álcoois graduados para água destilada. Os cortes desparafinizados serão tratados com peróxido de hidrogênio 0,3% por 10 min. A recuperação antigênica adequada será realizada. O soro bloqueador será aplicado por 10 min. Os cortes serão incubados com anticorpo criado contra

  1. Proteínas MMR: MLH1, MSH2 ou MSH6,PMS-2.
  2. CD133. Em seguida, os investigadores coletarão os blocos dos mesmos pacientes após receberem quimiorradioterapia neoadjuvante e foram submetidos à cirurgia e examinarão
  1. Sob microscópio de luz após coloração para: Tipo e grau de carcinoma Invasão angiovascular Grau de resposta imune Padrão e profundidade da invasão Estado dos linfonodos.
  2. Contagem de células CD 133 positivas com a mesma técnica relatada anteriormente. O complexo imune resultante será detectado por um kit de coloração universal seguindo as instruções anexadas ao kit. As lâminas serão lavadas várias vezes em solução salina tampão fosfato e nela serão colocadas por 5 minutos entre cada etapa, exceto após o reagente de peroxidase a lavagem será com água destilada. Controles negativos e positivos serão incluídos em cada série de coloração. A avaliação imuno-histoquímica será feita de acordo com Ren F et al e Zhang X et al. As imagens digitais serão obtidas com um sistema de câmera digital