Investigação do coquetel de probióticos ideal para descolonização de enterococos resistentes à vancomicina no intestino humano

Os enterococos fazem parte da flora intestinal comensal em humanos e se tornaram uma importante bactéria patogênica de infecção oportunista. Os enterococos podem causar infecção grave quando os pacientes ficam imunocomprometidos e subsequentemente um problema sério na terapia médica porque os antibióticos de última linha podem ser ineficazes. A incidência de enterococos resistentes à vancomicina (VRE) tem aumentado em todo o mundo nos últimos anos. Os VRE tornaram-se uma ameaça global na saúde humana e nos cuidados médicos devido à possível disseminação de genes de resistência a antibióticos. Até agora, as bactérias probióticas desempenharam vários papéis importantes na regulação das funções intestinais e algum impacto positivo no diabetes, comprometimento da função hepática e distúrbios psiquiátricos. Recentemente, alguns estudos probióticos indicaram que o VRE poderia ser descolonizado do intestino humano. No entanto, permanece controverso devido às diferentes cepas probióticas, dosagens, durações das administrações e desenhos de estudo nesses relatórios. Portanto, mais estudos in vitro e ensaios clínicos são necessários para a validação da hipótese de que o VRE pode ser descolonizado por bactérias probióticas do intestino humano.

No estudo preliminar usando o pipeline de análise de microbioma para dissecar os dados NGS (sequenciamento de próxima geração) das co-culturas de duas cepas VRE (Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis) e dez bactérias probióticas aprovadas pela TFDA (Taiwan Food and Drug Administration), os pesquisadores confirmaram que a mistura das dez bactérias probióticas suprimiu significativamente as quantidades bacterianas de VRE durante as co-culturas in vitro. Os resultados fornecerão uma fórmula de probióticos em um coquetel ideal, na qual uma combinação específica das bactérias probióticas selecionadas pode exercer um efeito máximo na supressão do crescimento de VRE.

Primeiro, será realizada uma co-cultura in vitro de VRE e os probióticos coquetéis ideais selecionados pelo pipeline de análise de microbioma para validação dos resultados do estudo preliminar. Cápsulas resistentes ao ácido gástrico contendo o coquetel probiótico validado com modelo de co-cultura in vitro, serão então preparadas na dosagem de 10^10 CFU (Colony Forming Unit).

Em segundo lugar, no ensaio clínico proposto, os participantes com idade entre 20 e 90 anos serão selecionados e admitidos no Taipei Medical University Hospital com enterococos resistentes à vancomicina (VRE) isolados de suas fezes após a hospitalização. Os critérios de exclusão neste estudo são indivíduos: (1) com ingestão rotineira de probióticos na vida diária ou com prescrição de probióticos na clínica uma semana antes ou no período do ensaio clínico; (2) ter recebido prescrição de antibiótico via oral no período do ensaio clínico; (3) com sintoma de diarreia; (4) na gravidez; (5) de condições imunocomprometidas ou sendo prescritos com medicamentos do tipo esteroide; (6) com diabetes mellitus; (7) pacientes gravemente enfermos.

Quando as condições de suas doenças subjacentes estiverem estabilizadas, esses pacientes que assinarem os consentimentos informados serão divididos aleatoriamente em dois grupos recebendo o coquetel de probióticos ou placebo por 3 semanas em mascaramento duplo-cego. As amostras de fezes serão coletadas antes e após a administração de 3 semanas do coquetel de probióticos ou placebo. Após a conclusão da inscrição de 80 pacientes no total, as cápsulas duplo-cegas serão desmarcadas e pelo menos 50 pacientes com 25 amostras de fezes pareadas completas em ambos os grupos serão processadas para isolamento de DNA genômico e análise de 16s rDNA (DNA ribossomal) NGS. Por fim, serão analisadas as quantidades de VRE nas amostras de fezes com o número de formação de colônias em meio seletivo, e as alterações da microbiota intestinal serão analisadas através do microbioma fecal 16s rDNA NGS. Os resultados serão comparados entre o grupo de probióticos em coquetel e o grupo de placebo para avaliação do efeito de descolonização VRE dos probióticos.